HPLC法测定D-色氨酸甲酯盐酸盐中的左旋异构体

建立了测定D-色氨酸甲酯盐酸盐中左旋异构体的手性高效液相色谱方法。采用EnantioPak Y5(4.6 mm×250 mm, 5μm)色谱柱,以正己烷(含0.1%二乙胺)-乙醇(80:20)为流动相,检测波长280 nm。D-色氨酸甲酯盐酸盐与其左旋异构体之间分离度良好,L-色氨酸甲酯盐酸盐在0.9927~14.8905μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好;D-色氨酸甲酯盐酸盐在0.9839~14.7588μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,R^(2)均为0.9998。本方法准确、简便,可以用于D-色氨酸甲酯盐酸盐中左旋异构体的质量研究。

采用重叠PCR构建高灵敏度酵母细胞传感器评估遗传毒性化合物

采用重叠PCR(overlap PCR)方法构建了pdr5与snq2基因敲除组件,研究了pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响。考察了野生型、pdr5单基因突变、snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器暴露于系列浓度甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、顺铂、4-硝基喹啉-N-氧化物(4NOQ)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基脲、水杨酸和葡萄糖溶液24 h后的细胞生长抑制情况与16 h后的荧光诱导情况。研究结果表明,overlap PCR方法能够高效率构建基因突变酵母细胞传感器;snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变细胞传感器检测遗传毒性的准确度为100%,高于野生型与pdr5单基因突变细胞传感器(87.5%);pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器表现出最高的遗传毒性检测灵敏度,为构建高准确度与灵敏度的酵母细胞传感器提供了思路与方法,为酵母细胞膜转运蛋白基因pdr5与snq2的进一步功能研究奠定了基础。