欧前胡素对高脂型蛋氨酸-胆碱缺乏饲粮诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠血清生化指标和肝脏的影响

本试验旨在研究欧前胡素(IMP)对高脂型蛋氨酸-胆碱缺乏饲粮(MCD-HFD)引起的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。将50只9周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只。MCS-LFD组(对照组)饲喂蛋氨酸-胆碱充分低脂饲粮(MCS-LFD),MCD-HFD组(模型组)、MCD-HFD+IMP25组、MCD-HFD+IMP50组和MCD-HFD+IMP100组小鼠饲喂MCD-HFD,连续喂养8周。各组均在喂养4周后对小鼠进行灌胃处理,连续4周。MCD-HFD+IMP25组、MCD-HFD+IMP50组和MCD-HFD+IMP100组小鼠分别灌胃25、50和100 mg/(kg·d)IMP,MCS-LFD组和MCD-HFD组小鼠灌胃等量生理盐水。饲喂8周后处死,取血清检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;通过苏木精-伊红(HE)染色以及Masson染色检测肝脏组织脂肪变性和纤维化;称量肝脏湿重,计算肝脏指数;通过Western blot法检测肝脏中肉碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的蛋白表达量。结果显示:1)与MCS-LFD组相比,MCD-HFD组小鼠体重和增重显著降低(P<0.05),肝脏湿重显著增加(P<0.05),肝脏指数极显著升高(P<0.01),血清中AST、ALT活性和TG、TC含量均极显著升高(P<0.01),肝脏中CPT1A的蛋白表达量极显著降低(P<0.01)。2)切片结果显示,与MCS-LFD组相比,MCD-HFD组小鼠肝细胞排列紊乱,发生气球样变性,出现大量脂肪性空泡,且肝细胞周围纤维化。3)与MCD-HFD组相比,MCD-HFD+IMP50组小鼠的体重和增重显著升高(P<0.05),肝脏湿重显著降低(P<0.05),肝脏指数极显著降低(P<0.01),血清AST和ALT活性极显著下降(P<0.01),TG和TC含量显著下降(P<0.05),肝脏中CPT1A的蛋白表达量显著升高(P<0.05)。4)与MCD-HFD组相比,MCD-HFD+IMP100组小鼠体重无显著变化(P>0.05),肝脏湿重和肝脏指数均极显著降低(P<0.01),血清AST、ALT活性和TG、TC含量均极显著下降(P<0.01)。5)与MCD-HFD组相比,IMP处理能够减少肝脏中空泡数量,改善肝细胞气球样变性和纤维化程度,且呈剂量依赖性。由此可见,IMP能够缓解MCD-HFD诱导的NAFLD小鼠的肝脏损伤,改善体内脂肪代谢,缓解脂质沉积,对肝脏具有保护作用。

冷暴露下添加盐酸川芎嗪提高小鼠肝脏PGC-1α表达

试验探讨冷暴露条件下添加盐酸川芎嗪对小鼠肝脏产热蛋白PGC-1α的影响。试验选取C57BL/6雄性小鼠40只,预饲一周后,随机分为四组。常温对照组保持在26±2℃环境中饲养,冷暴露组和加药组每天置于4℃人工气候室中冷刺激3 h,加药组小鼠在冷暴露前进行相应的灌胃处理,四周后处死小鼠并采集肝脏组织。采用HE染色法观察肝脏组织是否有损伤;采用油红O染色法观察肝脏组织中脂滴数量;采用IHC法和Western Blot法对肝脏组织中PGC-1α表达量进行检测。结果显示,与对照组相比,添加盐酸川芎嗪后肝脏无损伤,脂滴数增加,PGC-1α的表达量显著提高。综上,冷暴露条件下盐酸川芎嗪可提高PGC-1α的表达量,促进小鼠肝脏产热。

盐酸川芎嗪对冷暴露小鼠肝脏中解偶联蛋白1表达的影响

在北方寒冷地区,冷应激不可避免的带来一系列负面影响。试验探讨在冷暴露环境下添加不同浓度的盐酸川芎嗪对小鼠肝脏产热能力的影响。冷暴露前对预饲一周后的小鼠进行相应的灌胃处理,常温对照组每天始终保持在26±2℃环境中饲养,冷暴露组每天置于4℃人工气候室中冷刺激3 h。四周后采集小鼠的肝脏组织,采用HE染色法观察肝脏组织是否有损伤;采用油红O染色法观察肝脏组织中脂滴的分布和数量;采用IHC法和Western Blot法对肝脏组织中解偶联蛋白1(UCP1)的表达量进行检测。与对照组相比,添加了盐酸川芎嗪调后肝脏无损伤,肝脏中脂滴数增加,产热因子UCP1的表达量显著提高。研究结果表明,冷暴露下盐酸川芎嗪可提高UCP1的表达量,促进小鼠肝脏产热,为缓解冷应激产生的负面影响提供一定的参考。

酪氨酸联合半胱氨酸对冷暴露小鼠肝脏产热能力的影响

运用HE染色法观察小鼠肝脏在添加酪氨酸和半胱氨酸后是否有损伤;油红O染色法观察小鼠肝脏脂质沉积的变化;血清生化检测小鼠血脂四项的表达水平;最后用RT-qPCR和Western blot法检测小鼠肝脏中产热相关基因的表达水平。结果显示,添加酪氨酸和半胱氨酸后小鼠体质量下降,肝脏并未出现明显损伤并且小鼠肝脏中的脂滴含量下降;除Ⅱ组的低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)无显著下降外,添加了酪氨酸和半胱氨酸的小鼠血液中的甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和LDL-C都显著降低;高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)只有Ⅵ组显著升高。RT-qPCR结果显示,常温条件下除Ⅱ组的PPAR-α的mRNA无显著表达外,其他产热相关mRNA显著升高;冷暴露条件下只有Ⅴ组的PPAR-α的mRNA上升显著,除Ⅵ组UCP1的mRNA上升显著,其他3个产热相关mRNA极显著上升。Western blot结果显示,常温条件下Ⅱ组的产热相关蛋白显著上升,其中PGC-1α上升极显著,Ⅲ组除UCP1上升显著外,其他产热蛋白无显著上升;冷暴露条件下Ⅴ组的PPAR-α升高显著,其他产热蛋白上升不显著,Ⅵ组的产热相关蛋白都有显著上升,其中PPAR-α和PPAR-γ上升极显著。结果表明,联合使用酪氨酸和半胱氨酸可以降低小鼠体质量并改善小鼠的血脂水平,提高小鼠肝脏的产热能力。