同时接种伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

本实验室前期研究中构建了一种新型的猪瘟标记疫苗—腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗(rAdV-SFV-E2),并证实该疫苗具有与C株猪瘟疫苗相同的免疫效力。为评价该疫苗与伪狂犬病疫苗(Bartha-K61)联合免疫是否存在相互干扰现象,本研究将这两种疫苗联合免疫健康仔猪(n=5),同时设立单独免疫对照和阴性对照,免疫后利用CSFV强毒石门株进行攻击,并通过抗体反应、临床症状、病毒血症、病理学及组织病理学变化等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果显示,rAdV-SFV-E2和Bartha-K61联合免疫后与单独免疫rAdV-SFV-E2均能够对致死性CSFV强毒的攻击提供完全保护(5/5存活),表现为无猪瘟特异性临床症状、无病毒血症、无病理变化和组织病理学变化。该研究证实,rAdV-SFV-E2和伪狂犬病疫苗Bartha-K61同时免疫对rAdV-SFV-E2的免疫效果无干扰现象。

母源抗体对腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其母源抗体(MDA)的干扰及制定合理有效的免疫程序,本研究将rAdV-SFV-E2疫苗株免疫妊娠期的母猪后检测其抗体诱导水平,然后将该疫苗株免疫具有其母源抗体的30日龄新生仔猪及无母源抗体仔猪(n=4),攻毒后,监测所有仔猪的抗体水平、临床症状、病毒血症、病理学等。结果显示,有无母源抗体的仔猪均能够产生高水平的特异性E2抗体及抗CSFV的中和抗体,而且攻毒后未出现猪瘟特异性临床症状,包括发热、食欲减退、腹泻及死亡等;对照组仔猪均出现了明显的临床症状,其死亡率为100%。本研究证明rAdV-SFV-E2疫苗的免疫效力未受其母源抗体的显著干扰,免疫30日龄的仔猪后能够完全抵抗致死性CSFV强毒石门株的攻击。

猪繁殖与呼吸综合征病毒传代与免疫原性变化的关联研究

本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗候选株JXM105以及其传代毒株JXM125和JXM135为研究对象,通过3株传代毒株对其母源强毒株JX143攻毒免疫保护效力评价和全基因序列分析,解析病毒体外传代与毒株免疫原性间的关联。结果显示:JXM105、JXM125和JXM135免疫后的仔猪在21 d观察期内未出现异常临床表现,剖检猪无显著肺脏损伤。攻毒JX143后,免疫JXM105的动物组无发病和死亡,免疫JXM125或JXM135的动物组虽无死亡,但分别有20%的发病率。全基因组测序结果显示,与亲本病毒JX143相比,JXM105含有47处突变,包括23处氨基酸突变、位于nsp2的88个连续氨基酸缺失和GP2碳端的11个氨基酸截短。与JXM105相比,JXM125和JXM135仅增加了8处核苷酸突变,其中2处导致氨基酸突变。研究表明:3株传代毒株对仔猪均无致病力;JXM105对4周龄仔猪的保护率可以达到100%,JXM125和JXM135不能提供完全保护、已出现过度弱化的现象。23处分散在不同区域的氨基酸突变可能与JX143致弱相关。

我国猪伪狂犬病变异株研究概况

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的、严重危害养猪业的一种烈性传染病。在过去的几十年里,我国通过在猪群中广泛使用Bartha-K61株基因缺失弱毒疫苗,使PR得到了有效控制。但自2011年以来,在全国范围内,许多Bartha-K61疫苗免疫猪群出现了PR疫情。研究证实,该疫情是由PRV变异株引起的,与以往毒株相比,PRV变异株致病性明显增强,且Bartha-K61疫苗不能对猪只提供完全的免疫保护。目前针对PRV变异株的疫苗正在研制中,其中基因缺失活疫苗能够对当前流行的PRV变异株提供完全的免疫保护,这些疫苗大多处于转基因安全评价阶段。在诊断方法上,已经建立了能够有效区分Bartha-K61疫苗株、PRV经典强毒株和当前流行的变异株的三重荧光定量PCR方法。利用安全有效的基因缺失疫苗和配套的鉴别诊断技术,并结合有效的生物安全防控措施,对PR进行净化,是未来必由之路。本文对我国当前PR的流行病学、诊断方法、疫苗研制和防控策略等进行了简述和讨论。

携带BAC质粒DNA序列的重组伪狂犬病病毒变异株的构建和鉴定

本研究旨在以当前流行的伪狂犬病病毒变异株(TJ株)为基础,构建携带红色荧光蛋白(RFP)标记细菌人工染色体质粒的重组伪狂犬病病毒(PRV)。通过同源重组和Cre/lox P特异性位点重组的方法构建了重组病毒r PRVTJ-del TK-BAC-RFP株。PCR鉴定和测序分析结果表明,在重组病毒r PRVTJ-del TK-BAC-RFP株的基因组中已插入RFP标记的BAC质粒DNA序列;动力学参数分析表明,重组病毒的生长特性与PRV TJ株相似,尽管复制能力稍有降低,但与亲本株相比并无显著性差异;电镜检测结果显示,重组病毒与亲本病毒PRV TJ株的病毒粒子极其相似,均有囊膜,核心约为80 nm,核衣壳清晰可见。这为进一步研究PRV的变异机制奠定了基础。