c-myc靶向siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的:设计构建重组体为转染肿瘤细胞,观察癌基因的沉默效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础。方法:以c-myc为靶基因,以pEGFP-C1/U6质粒为载体,设计构建重组体,根据c-myc癌基因cDNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pEGFP-C1/U6中,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。结果:经酶切鉴定筛出的重组体测序结果与目的序列相同,重组载体构建成功。结论:利用RNAi技术可成功构建小干扰RNA重组体。

腹腔镜技术在切口疝修补术中的应用体会

目的探讨腹腔镜下应用补片修补切口疝的手术方法和临床效果。方法回顾性分析我科2006年1月至2008年12月对腹壁切口疝23例施行腹腔镜修补术的临床资料。结果本组成功施行腹腔镜下切口疝补片修补22例,因腹腔内严重粘连中转剖腹手术1例,术中发现多发切口疝3例。本组无手术死亡和肠瘘病例。术后出现疼痛4例,补片周围积液3例。全组获随访4～24个月,平均13.8个月,未见切口疝复发。结论腹壁切口疝病人行腹腔镜下补片修补大多是安全地,还可在术中发现隐性缺损。对腹腔内广泛粘连分离困难者,应及时中转剖腹手术。

c-myc靶向小干扰RNA诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

目的构建小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外观察其诱导乳腺癌细胞凋亡效应。方法基因克隆技术构建人cmyc癌基因特异性siRNA表达载体,体外转染MCF7,48h后检测c-myc癌基因表达状况并观察MCF7凋亡诱导效应。结果(1)成功构建siRNA表体载体:pEGFP-C1/U61、pEGFP-C1/U62和pEGFP-C1/U63;(2)siRNA表达载体转染MCF748h后,pEGFP-C1/U62组显著抑制胞内c-myc表达(80%);(3)转染24h和48h后,pEGFP-C1/U62组凋亡率分别为11.01%和21.30%,明显高于对照组(P<0.01)。结论构建的cmyc靶向siRNA表达载体能显著下调cmyc在MCF7中的过表达,诱导乳腺癌细胞株MCF7凋亡。