乙型肝炎病毒在慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体上的整合情况

目的研究慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体是否存在HBV的整合及整合情况。方法选择我院慢性乙型肝炎患者16例，采用荧光原位杂交（FISH）技术制备肝细胞染色体标本，以地高辛标记的HBV探针进行原位杂交。结果16例患者中，5例（31．25％）肝细胞分裂期染色体上可观察到绿色荧光信号，HBV呈低频率整合（1．00％～1．50％），整合位点呈随机分布。结论应用FISH技术可检测肝细胞染色体上整合型HBV。慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体上存在整合型HBV，使HBV感染可能发展成为一种遗传性传染性疾病，并成为肝癌高发的重要危险因素。

乙型肝炎病毒X基因在肝细胞肝癌及慢性乙型肝炎肝细胞染色体上整合情况的对照研究

目的:应用染色体制备和生物素原位杂交技术,研究乙型肝炎病毒X(HBx)基因在肝细胞肝癌(HCC)细胞染色体上的整合,并与慢性乙型肝炎(CHB)进行对比分析,了解HBx基因在肝细胞染色体上的整合与HCC发生的相关性。同时探讨在HCC与CHB患者中乙肝血清标志物差异及HBx整合与乙肝血清标志物之间的相关性。方法:HCC患者19例,CHB患者14例,分别获取手术或肝穿刺标本并制备成染色体载玻片,以生物素标记的HBx基因探针进行原位杂交,同时统计分析其乙肝血清标志物资料。结果:①19例HCC中有13例患者的肝细胞分裂期染色体上可观察到杂交信号,占68.24%,明显高于CHB组,差别有统计学意义("2=5.12,P<0.05),肝癌患者肝细胞染色体上HBx整合位点数为3.80±1.36,而CHB患者肝细胞染色体上整合位点数为1.30±0.36,二者差别具有极显著性(t=3.5,P<0.01)。②乙型肝炎e抗原(HBeAg)在CHB患者中阳性率为80.0%,明显高于HCC组(10.53%),差别有统计学意义("2=6.33,P<0.01)。③HCC及CHB患者HBx整合与否与患者乙肝血清标志物未见明显相关性。结论:①HBx基因在HCC细胞染色体上的整合明显高于CHB;②CHB患者乙肝病毒复制较HCC患者活跃;③HBx基因整合与否与HCC及CHB乙肝血清标志物未见明显关系。

TNF-α通过TNF-R1促进小鼠肾上腺皮质细胞系Y1凋亡

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞(Y1细胞)caspase8/3的影响是否主要通过TNF-R1。方法:小RNA干扰法下调Y1细胞中TNF-R1基因的表达,分光光度法分别检测一定浓度TNF-α对Y1细胞及TNF-R1基因干扰抑制后的Y1(miRNA-Y1)细胞caspase8/caspase3影响。结果:miRNA-Y1细胞TNF-R1基因的干扰效率为71.74%;TNF-α处理Y1细胞后,细胞caspase8/3活性明显升高(P<0.05);TNF-α处理miRNA-Y1细胞,细胞caspase8/3活性与未处理组相比无显著差异(P>0.05)。结论:TNF-α对Y1细胞caspase8/3活性的影响主要是通过TNF-R1受体实现的。

HBV在慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体上整合情况的临床分析

采用荧光原位杂交（FISH）技术检测慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体，明确是否存在HBV的整合及整合情况。选择我院慢性乙型肝炎患者共16例，制备其肝细胞染色体标本，以地高辛标记的HBV探针进行原位杂交。16例患者中，有5例患者的肝细胞分裂期染色体上可观察到绿色荧光信号，占31．25％，HBV呈低频率整合（1．00％-1．50％），整合位点呈随机分布。通过研究发现，应用FISH技术可检测肝细胞染色体上整合型HBV。慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体上存在整合型HBV，使HBV感染可能发生成为一种遗传性传染性疾病，并成为肝癌高发的重要危险因素。

HBV低水平复制状态下慢性乙型肝炎（中度）患者的临床表现分析

目的：通过对血清HBV DNA含量不同的慢性乙型肝炎患者(中度)的临床表现进行分析，了解HBV低水平复制状态下慢性乙型肝炎患者(中度)的临床表现。方法：应用荧光定量PCR技术检测慢性乙型肝炎(中度)患者血清中HBV DNA含量，按照HBV DNA水平的高低进行分组，对不同组别患者的临床表现进行对比分析，探讨HBV低水平复制对病情的影响。结果：HBV DNA含量≤10^3 copies/ml组的总胆红素(TBil)为(37．7±56．3)μmol/L，均高于其它各组，差别有统计学意义，P＜0．05；而且其丙氨酸氨基转移酶(ALT)为(406±338)U/L，也高于HBV DNA含量分别为10^4、10^7和≥10^8 copies/ml三组，差别有统计学意义，P<0．05。从HBV DNA含量为≤10^3组、10^5组和10^7copies/ml组的TBil和ALT的恢复曲线来看，三者非常相似，具有显著相关性，P<0.05。不同组别间年龄和住院日相比均无统计学差异(P>0．05)。结论：血清中HBV DNA含量的高低与慢性乙型肝炎(中度)患者的病程和病情轻重没有明显的相关性；HBV的低水平复制并不能代表患者的病情较轻。

As_2O_3注射液体外对人大肠癌细胞抑制作用的观察

目的 明确中药砒霜制剂三氧化二砷 (As2 O3 )注射液对人大肠癌细胞的体外抑制作用 ,为临床应用As2 O3 治疗大肠癌提供实验依据。方法 采用活细胞观察法、台盘兰拒染法、四甲基偶氮唑蓝比色 (MTT)法和透射电镜观察了As2 O3 对体外培养的人大肠癌细胞株CoLo-3 2 0生长的影响及其形态学变化。结果 As2 O3 能显著地抑制人大肠癌细胞CoLo -3 2 0的生长 ,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变。结论 As2 O3 对人大肠癌细胞具有显著抑制生长作用 ,该抑制作用与诱导细胞凋亡密切相关。

三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:明确三氧化二砷(As2O3):注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制. 方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响. 结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01). 结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.

TNFα对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1增殖、凋亡的影响。方法:不同浓度、不同作用时间的TNFα处理小鼠肾上腺皮质细胞系Y1;MTT法检测细胞的增殖;台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;分光光度法检测细胞caspase8/3的变化。结果:不同浓度的TNFα处理Y1细胞不同时间后,细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平明显提高(P<0.05);细胞caspase8/3水平明显升高(P<0.05)。结论:TNFα可抑制Y1细胞增殖,并通过提高caspase8/3的活性而诱导及促进细胞凋亡。

慢性乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞及其活化状况研究

目的研究慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者B淋巴细胞及其活化状况,探讨其临床意义。方法用流式细胞术测定28例慢乙肝患者外周血单个核细胞膜CD5、CD19、CD23及CD38的表达情况,用速率散射比浊法测定其血清IgG、IgA、IgM含量,并与22例健康人(对照组)比较。结果28例慢乙肝患者外周血CD3-CD1+9、CD5-CD1+9及CD1+9CD3+8淋巴细胞数分别为(13.2±5.7)%、(4.3±3.8)%及(2.2±4.4)%,明显高于对照组(P<0.05)。外周血B淋巴细胞活化程度较高的慢乙肝患者,其肝功能指标(ALT)恢复情况较好。结论慢乙肝患者B淋巴细胞的活化程度较高,活化的B淋巴细胞通过体液免疫改善患者的肝功能状况。

催化荧光光度法测定痕量过氧化氢

在pH 7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中,四羧基铁酞菁(FeTCPc)能催化过氧化氢氧化L-酪氨酸,形成荧光二聚体,据此提出了荧光光度法测定水中过氧化氢的方法。在激发波长(λex)320nm与发射波长(λem)410nm处,反应体系的ΔF(F-F0)与过氧化氢的浓度在7.6×10-7～2.7×10-5 mol.L-1之间呈线性关系,方法的检出限(3s/k)为5.2×10-8 mol.L-1。以此方法对两种水样进行分析,测得回收率在96.5%～96.9%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在1.0%～2.8%之间。

虎红光度法测定硫酸卡那霉素

在pH3.6的Britton-Robinson(B-R)介质中,虎红与硫酸卡那霉素相互作用,使虎红褪色,最大吸收峰在546 nm处,且吸光度差值与硫酸卡那霉素浓度呈线性相关,在最佳条件下,硫酸卡那霉素在0.0～0.8μg/mL范围内遵守比尔定律,表观摩尔吸光系数ε546=8.98×104L.mol-1.cm-1。据此建立了一种测定硫酸卡那霉素含量的新方法。将方法应用于硫酸卡那霉素滴眼液和注射液的测定,结果满意。

脂多糖相关受体及其介导的信号转导通路

脂多糖(LPS)的识别与跨膜信号转导需要一系列分子的参与,如LPS结合蛋白、杀菌性/通透性增加蛋白、CD14、Toll样受体4等,是引起细胞炎性效应的关键,这一转导过程也是导致感染性休克、全身炎性反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的重要机制。Toll样受体4与LPS结合后,活化髓样分化因子88依赖性和非依赖性两条信号途径。前者活化丝裂原激活的蛋白激酶和核因子κB信号通路,后者活化核因子κB和干扰素调节因子3信号通路。研究通路中的信号传递分子和信号转导环节可以为临床治疗寻找"新靶点"。

内毒素休克大鼠血清中TNF-α、皮质醇、LPS的测定及肾上腺的病理改变

目的:建立内毒素休克大鼠模型,探讨内毒素休克形成机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=10)和内毒素休克组(n=30)。内毒素休克组采用腹腔注射适量D-氨基半乳糖(D-GalN)致敏后,经尾静脉注射休克剂量内毒素脂多糖(LPS),观察大鼠平均动脉压(MAP)变化,以评定模型是否成功。ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清及肾上腺组织中LPS浓度,电化学放光免疫分析法测定血清中皮质醇浓度,光镜下观察肾上腺组织的形态学改变。结果:注射休克剂量的LPS后,大鼠MAP迅速下降,回升至正常后逐渐缓慢下降并维持较低水平,其中19只大鼠符合休克标准,其血清中TNF-α、皮质醇、LPS的质量浓度分别为842.41 ng.L-1、9.50μg.L-1、231.44μg.L-1,肾上腺组织中的LPS质量浓度为154.23μg.L-1。光镜下可见肾上腺组织有明显充血和水肿。结论:LPS、TNF-α参与了内毒素休克的发生、发展过程。休克大鼠的血清皮质醇浓度明显升高,并伴有肾上腺组织的病理改变。

四羧基钴酞菁催化氧化邻苯二胺测定过氧化氢

在pH值为9.0的Britton-Robinson缓冲溶液中,以四羧基钴酞菁作为过氧化物模拟酶催化过氧化氢与邻苯二胺的反应,建立一种测定微量过氧化氢的新方法。结果显示,反应的产物2,3-二氨基吩嗪在421nm处有一最大吸收峰,其吸光度值随过氧化氢加入量的增加而增加,吸光度差值与过氧化氢浓度在0～2.07×10-4mol/L范围内呈线性关系,检出限为1.36×10-5mol/L。该方法简单,适用于微量过氧化氢含量的测定。

四羧基铜酞菁共振散射法测定硫酸庆大霉素

在弱酸性条件下,四羧基铜酞菁(CuC4Pc)与硫酸庆大霉素(GEN)反应形成离子缔合物,使体系的共振散射强度增大,据此建立了以四羧基铜酞菁为探针测定GEN的新方法.在λ为362 nm处,共振散射强度(△IRLS)最大且△IRLS与GEN的浓度在0.05～1.50μg/mL范围内成正比,检出限为0.044μg/mL.将方法用于硫酸庆大霉素注射液的测定,结果满意。

南京市传染病医院2000-2005年12种传染病发病及住院情况分析

目的掌握近年来南京市部分传染病发病现状及传染病住院情况,有针对性地在南京市开展传染病防治工作。方法对2000年1月-2005年12月住院的12种传染病资料以SPSS10．0统计软件包进行统计分析。结果12种传染病住院病人序位为麻疹、流行性腮腺炎、细菌性痢疾、百日咳、水痘、流行性乙型脑炎、流行性脑脊髓膜炎、伤寒副伤寒、艾滋病、猩红热、出血热、狂犬病；呼吸道传染病占首位(占87．48%),其次为肠道传染病(占8．42%)；自然疫源及虫媒传染病(占传染病总报告数的3．38%)；呼吸道传染病发病时间分布以冬春季为主。结论呼吸道传染病和肠道传染病是当前传染病防治重点,呼吸道传染病构成比上升,尤其麻疹近年发病人数大幅度升高,应引起高度重视。

慢性乙型病毒性肝炎血清HBV DNA载量与肝组织病毒学标志及肝脏损害程度的关系

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV DNA载量与肝组织病毒学标志及肝组织病理损伤的关系。方法根据血清学检查结果将90例CHB患者分为血清HBV DNA阳性与阴性2组,对2组患者血清HBeAg阳性率、肝组织病毒学标志HBsAg、HBcAg的表达及肝组织病理损伤进行对比分析。结果血清HBV DNA阳性组血清HBeAg阳性率、肝组织中HBeAg、HBcAg表达明显高于HBV DNA阴性组,统计学处理有显著性差异,而2组肝组织肝脏炎症和纤维化程度比较无明显差异。结论CHB患者血清HBV DNA定量与血清HBeAg阳性率、肝组织中HBsAg、HBcAg表达有高度的相关性,而与肝组织炎症和纤维化程度无关。

慢性乙型肝炎、肝癌病人肝细胞染色体制备法初探

目的 探讨慢性乙型肝炎、肝癌病人肝细胞染色体标本制备方法。方法 应用肝脏组织直接进行染色体制备及使用短期培养两种方法制备染色体，并对其结果进行分析比较，找出最佳肝细胞染色体制备方法。结果 短期培养法获得的单个细胞数目较多，细胞单个游离，获得的细胞中期分裂相较多，染色体分散好。而肝脏组织直接进行染色体制备获得的单个细胞数目少，常聚集成团，获得的细胞中期分裂相较少，染色体普遍分散不良。结论 在慢性乙型肝炎，肝癌病人肝细胞染色体标本制备过程中，使用短期培养法可以获得数量和质量都满意的染色体，以满足科研的需要。

IL-6对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1合成皮质醇的影响

目的:探讨白介素6(IL-6)对小鼠肾上腺皮质细胞系Y1合成皮质醇能力及合成过程中类固醇急性调节蛋白(StAR)相关基因表达的影响。方法:100 ng·ml-1IL-6单独或联合10-9mol·L-1促肾上腺皮质激素(ACTH)处理Y1细胞后,台盼蓝拒染法检测细胞活力,放免法检测细胞皮质醇合成量,实时荧光定量PCR法检测StAR mRNA表达水平。结果:IL-6单独或联合ACTH处理Y1细胞后,皮质醇合成量增加(P<0.05),同时StAR mRNA表达水平上升(P<0.05)。结论:IL-6可单独或联合ACTH通过促进StAR mRNA表达增强Y1细胞合成皮质醇的能力。