胚胎心肌干细胞体外的分化

目的鸡胚原肠胚形成期含有心肌干细胞（cardiac stem cell,CSC）的生心区原条组织离体后体外培养,使其增殖分化成具有舒缩功能的心肌组织。方法改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育,待胚胎发育到原肠胚的HH4期,无菌环境内选择性离体胚胎生心区原条组织（原条组织的前25%~40%）于10%FBSDMEM-F12培养基中培养,2~5d后得到局部跳动的细胞组织,通过原位杂交、免疫组织化学、DiI示踪和细胞的超微结构鉴定是否分化为心肌组织。结果 FGF8特异性表达于心管和神经管;N-cadherin特异性表达于心管、神经管和体节;DiI标记的细胞迁移参与心管的形成;细胞的超微结构显示心肌组织特有的结构---闰盘。结论 CSC体外培养可以定向分化发育成心肌组织,为进一步研究心肌细胞的发育分化和生理药理学实验提供了良好的平台。

PTEN在胚胎早期心脏发育过程中的作用

目的通过过表达PTEN,探讨胚胎早期原肠胚形成期PTEN表达及在早期心脏发生发育过程的作用和意义。方法用改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育待其发育到HH4期,对鸡胚心肌干细胞(Cardiac Stem Cell)进行PTEN电转染,转染成功后一部分鸡胚37℃孵箱继续培养30 h,待其发育形成心管,观察过表达PTEN对心管发生的影响;另一部分鸡胚在超净台内完成心肌干细胞的离体,体外培养使其分化发育成心肌组织,主要研究PTEN在细胞增殖、分化和凋亡过程中的作用。结果 30 h后鸡胚整体的免疫组织化学(N-cadherin)结果显示,PTEN-WT组和PTEN-G129E组鸡胚心管出现了反向环化、多囊化等畸形,GFP组和PTEN-C124S组心管发育受到的影响较小;转染后离体培养得到的心肌组织的跳动频率与GFP组下降的速度加快,且维持时间缩短,GFP组与PTEN-WT组差异有显著性(P<0.05),PTEN-WT组与PTEN-C124S组、PTEN-G129E组差异无显著性(P>0.05)。结论 PTEN蛋白酯酶可能参与早期胚胎心肌干细胞之间黏附分子的表达从而调节细胞迁移、分化发育,并加速了心肌组织的衰老。

体视学方法检测肿瘤微血管密度的研究

目的 采用以体视学原理为基础的微血管长度密度测量法 (MVLD法 )检测肿瘤微血管 ,并和传统方法(MVD法 )结果进行比较 ,分析其差异及意义。方法选取基底细胞癌标本 78例 ,分为侵袭型 (36 / 78)和非侵袭型 (42 /78)两组 ,经免疫组化实验标记vWF显示血管内皮细胞后 ,采用MVLD法和MVD法检测肿瘤灶内微血管的状态 ,并比较两法之间的差异及意义。结果 两法皆显示两型的瘤灶微血管密度状态有明显差异 (P <0 .0 5 ) ,而且对应结果具有高度相关性 (r =0 .80 4 )。