牛冠状病毒感染新生犊牛肺上皮细胞模型的建立

[目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epithelial cell,BLEC)建立BCoV体外感染本动物细胞模型。[方法]采用胰蛋白酶和Ⅰ型胶原蛋白酶两步酶消化法对新生犊牛肺脏组织进行肺上皮细胞初步提取,再利用上皮细胞贴壁时间不同的差异贴壁法纯化BLEC。通过间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)检测纯化后细胞中标志细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK-18)的表达来鉴定BLEC,并通过PCR方法对细胞进行病原纯净性检测,包括牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)、BPIV5、牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、BCoV和支原体(Mycoplasma)。通过PCR和IFA检测BCoV对BLEC的易感情况,并绘制BCoV在BLEC上的一步生长曲线。[结果]分离纯化培养的BLEC形态均匀稳定、呈菱形或砖块状,无常见病原BRV、BVDV、BPIV3、BPIV5、IBRV、BCoV和支原体污染,上皮细胞标志CK-18呈阳性表达。犊牛腹泻来源的BCoV HLJ-325毒株感染BLEC 24 h后可观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);PCR能扩增出BCoV N基因;IFA结果显示,BCoV感染BLEC呈现特异性红色荧光。通过实时荧光定量PCR检测BCoV含量建立病毒生长曲线,BCoV在感染BLEC后20 h时病毒载量最高,为4.46×10^(5)拷贝/mL。[结论]本研究成功分离制备了BLEC,证明BCoV易感染BLEC,构建了BCoV体外感染BLEC模型,为研究BCoV引起牛呼吸道疾病的致病机制奠定基础。

奶牛黏膜病的BVDV HJ-1株全基因组序列分析

BVDV HJ-1分离株属于1b基因亚型是引起奶牛发生黏膜病和出血综合症病原,导致高病死率。为了解BVDV HJ-1株的遗传学特征,研究应用PCR方法分13段扩增其全基因组序列,通过克隆测序最终组装出全序列。应用生物信息学软件对BVDV HJ-1基因序列同源性、跨膜结构域、糖基化位点、5’UTR一级结构与二级结构的差异等进行分析。结果测得该毒株全序列为12282 nt,与参考毒株相比存在高度变异,序列同源性在70.1%~93.5%,尤其是非结构蛋白NS4A、NS4B和NS5A同源性在49.0%~93.0%。E1-E2存在5个潜在的跨膜信号区,结构蛋白上富含14个潜在的糖基化位点,5’UTR Ⅰ区和Ⅲb-Ⅲe区相对保守,不同毒株之间II区的二级结构变异大。总之,BVDV HJ-1株全基因组序列信息丰富了我国BVDV的遗传学数据资源,为下一步疫苗的研制和致病机理的研究奠定了基础。

新课标理念下的初中政治课堂研究性教学策略

所渭研究性教学是指学生在教师的指导下，创设一种类似研究性的情境或途径，以特定或具体的某一主题为载体，让学生发现问题、解决问题的一种教学模式。这种教学模式能使学生在研究中关注社会、关注人生，并在交往中学习、捕捉、筛选、加工和再生信息，以此来强化其对知识的理解和应用，提高其自身的政治素质和生命质量。新课标下的初中政治学科教学理念，正是体现了构建课堂研究性教学的萤要作用。

畜禽粪污资源化利用技术

随着我国畜禽养殖规模化发展,所带来的环境污染问题引起党中央、国务院高度重视。为进一步促进畜牧业全面、协调、可持续发展,增加农民收入、促进农村经济发展、保障畜禽产品安全,改善农村居民生活环境,改良土壤、增加农作物产量,现围绕畜禽粪污处理现状,结合家畜粪污特点,开展调研和技术攻关,以应用技术和可行的典型案例为基础,并在实践中遴选典型应用技术模式。

公话超市费率切换技术分析

1引言长株潭三地升位并网总体思路为＂升位并网同时完成,3个月后再实施更优惠资费＂。长株潭升位并网公话部分工作包括：长株潭1.7万台公话超市终端在2009年6月28日升位并网的同时完成网络的融合。在2009年6月28日前为现有资费,6月28日到10月1日采用升位并网后新费率,10月1日后采用新的优惠费率,

隐身技术对战斗机空战的影响

最早考虑隐身问题的国家是德国。德国人早在二战期间就做了雷达吸波材料的实验，并在飞机两翼的前缘和潜艇上用了这些涂料和材料。直到60年代，美国研制出了A-12／SR-71黑鸟．它是第一代减少雷达信号特征．特别是减少防空监视和跟踪雷达信号特征的飞机。以后，美国洛克希德公司研制的Ma=3的战略侦察机和罗克韦尔的B-1A、B-1B轰炸机相继问世．