重组苯丙氨酸脱氢酶的分离纯化及酶学性质

苯丙氨酸脱氢酶(L-phenylalanine dehydrogenase,EC 1.4.1.20,PDH)在临床上可用作苯丙酮尿症的检测用酶,工业上可用于合成手性氨基酸与手性催化反应,但来自野生菌的PDH产量较低而且纯化困难,限制了其大规模的使用。基因重组酶的开发为解决该问题提供了一个可行的思路。为了研究重组PDH的分离纯化和酶学性质,利用基因工程菌发酵诱导PDH表达,采用双水相分离和离子交换柱色谱得到纯化酶,通过研究酶反应最适温度、最适pH值、动力学参数及热稳定性等得到重组酶的酶学性质。实验发现,纯化后的PDH纯度达到95%,酶反应最适温度为60℃,最适pH值为10.5、酶学动力参数K_m为(4.27±0.28)mmol/L,k_(cat)/K_m为(1.26±0.03)L/(mmol·s),重组酶在50℃高温下10min仍能保持较高活性,具有较好的热稳定性,为该酶在工业化中的应用提供了重要基础数据。

四川省新型冠状病毒感染集中隔离医学观察场所风险评价体系构建

目的通过对四川省新型冠状病毒感染集中隔离医学观察场所风险评价体系构建,了解集中隔离医学观察场所风险评价指标体系以及各项指标的权重,为集中隔离医学观察场所风险管理找准切入点。方法2022年3月20日至2022年6月15日通过德尔菲专家法确定新型冠状病毒感染集中隔离医学观察场所风险评价指标体系,利用层次分析法(Analytic Hierar Process,AHP),通过专家群决策方法计算各指标的权重。采用SPSS 22.0统计软件进行专家调查的协调系数计算,并评价问卷的有效性,检验水准α=0.05。结果参与专家共有50人,两轮专家调查的协调系数分别为0.38和0.43,新型冠状病毒感染隔离医学观察场所风险评价矩阵一致性为0.0756。一级指标有6个,一级指标权重大小依次为日常监管(0.4205)、场所硬件建设(0.1955)、核酸检测(0.1327)、制度与流程(0.1001)、人员管理(0.0949)、场所环境消毒(0.0564)。二级级指标有34个,二级级指标权重排在前6位依次为一脱间(0.1560)、隔离人员下车登记点(0.0937)、余氯监测(0.0649)、选址情况(0.0533)、视频监控(0.0456)、隔离人员核酸(0.0445)。结论四川省新型冠状病毒感染集中隔离医学观察场所风险评价指标体系全面。AHP在指标体系评价中应用比较合理,新发传染病防控管理利用AHP进行专家群决策可以提高效率。