全日制兽医专业学位研究生培养体系存在的问题与对策

兽医专业学位研究生教育是构建中国特色现代化兽医体系、适应重大社会需求的重要保障。结合我国兽医专业学位研究生教育的现状,从培养目标、师资队伍、培养过程以及人才培养质量等方面剖析了兽医专业学位研究生培养存在的主要问题。结合当前我国兽医专业学位教育体系改革的现状,从培养目标定位、优化培养过程、推进国际化等方面提出了一些对策,以期为推动我国兽医专业学位高质量、高水平、内涵式发展提供参考。

Toll样受体及其抗病原感染作用的研究进展

Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是最早发现的天然免疫受体家族,也是研究最为全面的模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRR)。PRR识别病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecule patterns,PAMP)诱导的天然免疫应答是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线。PRR主要由TLR、C-型凝集素受体、细胞质DNA感受器(如Cyclic GMP-AMP synthase),以及RIG-I样受体(RIG-I-like receptors)和NOD样受体(Nod-like receptors)等组成[1-2]。

猪氨肽酶N基因的克隆、表达系统构建和鉴定

为探讨猪氨肽酶N(APN)作为产肠毒素性大肠杆菌F4ac的受体蛋白的可能性,根据GenBank上的猪APN mRNA序列设计合成特异性引物,从新鲜的猪小肠组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链,RT-PCR扩增猪APN全长基因,并分别构建真核表达和原核表达系统。结果表明:APN基因已正确插入pcDNA3.1真核表达载体和pET-28a(+)原核表达载体,SDS-PAGE结果证明重组蛋白为包涵体,且纯化产物在110ku处有单一明显条带。pcDNA3.1-APN和pET28a-TAPN双系统的成功构建以及APN蛋白的成功表达,为进一步研究和验证该蛋白作为猪F4ac受体候选蛋白的可能性奠定基础。

产肠毒素大肠杆菌菌毛F4ac受体的研究进展

仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要疾病之一,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%~29.5%。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4（或K88）是导致新生或断奶仔猪腹泻的重要病原菌,可引发仔猪黄痢、白痢、水肿病和断奶仔猪腹泻等多种疾病,并 大肠杆菌F4致病性由两个因素决定。

大肠杆菌Nissle 1917株鞭毛展示6His标签的构建及相关生物学特性分析

为探索大肠杆菌Nissle 1917株(EcN)鞭毛展示的应用,本研究以重组质粒p UC18-fli C为模板,反向PCR产物经DpnⅠ、Exnase^(TM)Ⅱ重组环化,将6His标签基因分别插入无质粒大肠杆菌Nissle 1917(EcNcured of its two cryptic plasmids p MUT1和p MUT2;EcNc)fli C高变区774 bp^775 bp和792 bp^811 bp之间,构建嵌合鞭毛基因片段fliC01和fliC02。分别将其克隆于自杀性载体pRE112中,构建重组质粒pRE112-fliC01和pRE112-fliC02,并分别转化至EcNc中。通过一次重组和二次重组将嵌合鞭毛基因整合于EcNc基因组中,构建无抗性筛选的重组菌株EcNc fliC01和EcNc fliC02。对重组菌株进行生长状况、鞭毛形成以及体外细胞黏附试验和小鼠体内定植试验检测,结果表明EcNc fliC01和EcNc fliC02的生长未受影响,表达的嵌合鞭毛能够被H1多抗或His-Tag单克隆抗体识别并组装形成鞭毛丝;重组菌对IPEC-J2细胞的黏附能力及小鼠肠道定植能力与亲本株EcNc相比无显著性差异。本实验结果为进一步研究EcNc鞭毛展示技术应用于活疫苗研制奠定了基础。

案例纠错教学法在兽医微生物学实验课程教学中的应用

兽医微生物学实验课程是兽医学、动物科学及其相关专业学生必修的一门专业基础实验课。为了提高兽医微生物学实验课程教学效果,将案例教学法与纠错教学法相结合并引入该课程教学中,探索了提高该课程教学质量和效果的教学方法。与传统教学方法相比,案例教学结合纠错教学极大地激发了学生的学习兴趣,充分调动了学生的学习积极性和主动性。从学习效果来看,无论是理论知识考试还是实验操作,该模式下的学生成绩均显著高于传统教学模式。问卷调查结果表明,案例纠错教学试验组学生对该教学方式的满意度较高。

“兽医微生物学”案例式教学的设计与应用

兽医微生物学是兽医专业最重要的主干课程之一。为激发学生学习兴趣,提高该课程教学质量,将案例式教学法引入病原微生物的分离鉴定这一教学内容中,探索该教学方法在微生物教学中的效果。结果表明,与传统的教案教学法相比,案例式教学法可充分调动学生课堂参与的积极性,激发学习兴趣,学生能较好地掌握理论与实践知识,提高了教学效果。

肠杆菌科丝氨酸蛋白酶的研究进展

丝氨酸蛋白（Serine protease autotransporter of Enterobacteriaceac，SPATE）是革兰氏阴性肠杆菌分泌的蛋白性质的毒力因子。其主要功能在于降解宿主细胞内或细胞外基质，从而引发一系列对宿主细胞的不利应答反应。

F4大肠杆菌黏附素受体易感性仔猪的体外鉴定研究

猪小肠上皮细胞表面的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体的基因型与其粘蛋白4(MUC4)基因密切相关,根据MUC4基因内含子7能否被限制性内切酶XbaⅠ酶切,可以在基因水平上将所检测的猪分为ETEC F4易感型纯合子SS,易感型杂合子SR和抵抗型RR。为筛选对ETEC F4受体易感性和抗性仔猪用于本实验室的后续实验,本实验利用MUC4基因的多态性,对送检猪的样品进行初步的分型检测。选取MUC4基因内含子7不同等位基因型的仔猪,分离其小肠上皮细胞,并分别与野生型F4ab、F4ac、F4ad大肠杆菌,表达fae操纵子的重组大肠杆菌r F4ab、r F4ac、r F4ad进行体外黏附和黏附抑制试验。研究结果表明,上述野生菌或重组菌对SS和SR两种基因型的4周龄断奶大白仔猪小肠上皮细胞均具有较好的黏附能力,而且经过抗F4单克隆抗体处理后的细胞,对细菌的黏附数明显下降。而RR型仔猪小肠上皮细胞不能黏附上述野生菌或重组菌。本研究为体外鉴定F4受体易感性仔猪,以及为进一步研究ETEC F4的致病机理奠定了基础和平台。

研究生值班制度在高校兽医检测专业实验室建设管理中的实践

高校兽医检测实验室面对社会接收样品,提供兽医诊断和病原检测服务,对样品接收、处理有时效性要求;同时对整个实验室的人、机、料、法、环等要素有着较高要求。依靠高校全职工作人员对专业兽医检测实验室进行全面管理,限于效率不高、样品接收不够及时、周末及假期无人值班、环境要素有时无人监控等问题。通过对研究生值班制度的摸索、实践,使得以上问题得到基本解决。本文介绍了该制度运行模式、实行要点,总结了相关的管理经验及体会。

细菌Ⅶ型分泌系统的研究进展

蛋白分泌在调控细菌与周围环境的互相作用中起着重要的作用。革兰氏阴性菌的分泌涉及内膜和外膜的跨膜转运,已知的6种蛋白分泌系统均显示出相当可观的多样性。而革兰氏阳性菌除了部分蛋白通过其中的几种分泌系统来分泌外,其还进化、发展出了一种特殊的蛋白分泌系统,就是Ⅶ型分泌系统（TypeⅦSecretion System,

产肠毒素大肠杆菌F4ac黏附素新基因sfm缺失株的构建及相关功能验证

为研究产肠毒素大肠杆菌菌株F4ac(F4ac^+ETEC)菌毛粘附素sfm基因的功能,本研究利用Red同源重组方法对F4ac+ETEC的sfm基因进行敲除,构建缺失株F4acΔsfm。再将sfm基因克隆到表达载体pACYC184中,获得重组质粒pACYC184-sfm,并转化至F4acΔsfm得到回补株F4acΔsfm/psfm。对ETEC野生菌、缺失株和回补株的生长曲线进行了测定和比较,结果显示sfm的缺失和回补对F4ac^+ETEC的生长没有影响;生物被膜定性和定量试验结果一致:均表明sfm在F4ac^+ETEC生物被膜形成的过程中作用不明显;血凝试验和甘露糖敏感性血凝试验结果显示3种类型的菌株均能够与2%猪血红细胞发生凝集反应,且该凝集现象能被D-甘露糖抑制。本研究为进一步研究sfm菌毛粘附素功能奠定了基础。

禽源大肠杆菌致新生儿大肠杆菌型脑膜炎小鼠模型的构建研究

禽致病性大肠杆菌(APEC)临床分离株TW-XM可引起禽类和哺乳动物的脑膜炎,具有感染人类新生儿的潜能并受到医学和学术界极大关注。为探索不同感染剂量的APEC TW-XM感染情况,对新生小鼠进行腹腔接种,通过临床症状观察、存活率差异分析、同一时间点处死发病濒死的小鼠收集样品、脑组织病理学检测、血脑屏障损伤程度及脑膜炎相关炎症因子表达检测等评估,成功构建小鼠脑膜炎模型。基于新生小鼠大肠杆菌型脑膜炎模型建立,为防控大肠杆菌型脑膜炎提供研究基础。

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛的表达及其对该菌的特异性检测研究

为获得肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白并检测其生物学功能,本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板,PCR扩增其含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段,并克隆至表达载体pBR322中,构建重组质粒pBR322-sef14,将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中,获得重组菌pBR322-sef14/SE5000M。将重组菌pBR322-sef14/SE5000M与本实验室制备的SefA(SEF14菌毛的主要亚基)单克隆抗体(MAb)凝集;利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并通过SDS-PAGE和western blot鉴定,利用该重组菌pBR322-sef14/SE5000M与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清及其他菌的阳性鸡血清结合。结果显示,本实验室制备的SefA MAb能够特异性识别该重组菌,并产生明显的肉眼可见的凝集反应。重组菌表达的SEF14菌毛产物大小约为14.3 ku,与菌毛的主要亚基SefA的大小一致,电镜观察到重组菌表面有明显的菌毛结构。在肠炎沙门氏菌特异性靶向检测中,该重组菌表达的菌毛蛋白仅与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清反应,能够在2 min内用肉眼观察到清晰的凝集颗粒,而不与鸡白痢、鸡伤寒、鼠伤寒沙门氏菌阳性鸡血清反应。本研究首次克隆了肠炎沙门氏菌sef14操纵子基因并在体外成功表达并进行了功能鉴定,上述研究结果为进一步研究SEF14菌毛及建立特异性诊断技术提供基础。

产肠毒素大肠埃希菌sfmH基因的原核表达及多克隆抗体的制备

以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac^+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行探究,发现重组菌在0.8mmol·L^(-1)IPTG、25℃诱导7h时蛋白表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为26ku。将重组蛋白在最优诱导条件下进行大量表达并纯化,利用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得SfmH多克隆抗体(简称多抗),通过ELISA和Western blot试验对多抗效价和特异性进行鉴定。这一研究构建并获得了高纯度的融合蛋白rSfmH,将其免疫小鼠后成功获得鼠源高免血清,为进一步探究Sfm菌毛的功能奠定了研究基础。

黏附侵袭性大肠杆菌在炎症性肠道疾病中的作用

哺乳动物肠道中定植有数以亿计的微生物菌群,这些菌群大多和宿主共生共演化,其中一部分在与其他微生物菌群竞争中,利用自身生存策略,促进自身的增殖复制。近期研究表明,微生物菌群平衡的破坏更有利于条件致病菌发挥作用。以宿主黏附侵袭性大肠杆菌(AIEC)为例,在肠道菌群失衡的情况下,AIEC不仅能够提高肠道炎症的发病率,还能诱发更为严重的炎症性肠炎。我们简要综述了AIEC在炎症性肠道疾病中的作用,并对炎症性肠道疾病的治疗新策略做相关展望。

马进教授酒大黄治疗Ⅲ、Ⅳ期糖尿病肾病经验总结

糖尿病肾病是指糖尿病所致的肾脏疾病,蛋白尿是糖尿肾病进入中后期的关键性临床表现。持续性蛋白尿会造成肾小球的硬化、肾小管的萎缩等肾脏损伤,因此,24 h尿蛋白的增加,意味着持续性、进展性的肾脏损伤,需引起临床医生高度重视。现代医学在治疗糖尿病肾病时,常规采用降糖、降压、降脂、改善微循环、降低尿蛋白等对应的基础治疗,患者症状改善常不理想,而中医药则有着自己独特的优势,中西医结合治疗也是未来发展的趋势。作者在跟随马进教授出诊期间,发现教授善用酒大黄,酒大黄因具有活血化瘀通经的功效,对改善Ⅲ、Ⅳ期糖尿病肾病患者的症状及控制蛋白尿有着很好的疗效,遂对其探究并总结。

博士研究生培养质量保障路径探讨——以国际合作交流为视角

博士研究生培养质量的提高对于成就我国高等教育强国的梦想至关重要。作为高等教育的核心力量,博士研究生的"国际性"既反映高等教育发展情况、国际合作交流深入程度,也可以作为建设世界一流大学和一流学科建设的硬性指标。通过给予博士生更多的自主权,鼓励国际双导师或多导师培养模式,加强博士研究生全英文课程的普及性和针对性教育,推进双向留学,特别是"一带一路"沿线国家留学生的招收和派遣等方式开展国际合作,可以进一步增强博士研究生的核心竞争力,提高博士研究生培养质量。

2022年猴痘流行初期各国首例猴痘输入病例的防控措施分析

目的 回顾分析2022年全球猴痘流行初期各国应对首例输入性猴痘病例的防控措施,为我国借鉴全球输入性传染病防控经验提供参考。方法 检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library等英文数据库,检索时间为自数据库建库至2022年10月1日。根据制定的纳入/排除标准筛选文献,提取2022年猴痘流行初期各国首例输入性猴痘病例的防控措施,并通过主题分析进行归纳总结。结果 共检索获得文献8 247篇,阅读标题和摘要后筛选余370篇,最终通过阅读全文纳入26篇文献,报告了26个国家在猴痘流行初期针对30例首发输入性猴痘病例采取的防控措施。多国针对首例输入性猴痘采取了综合的防控措施,包括早期识别和隔离治疗、加强疾病监测预警、追踪密切接触者并对其采取暴露后预防及为接触猴痘患者的医务人员提供个人防护装备。结论 针对输入性传染病病例采取综合防控措施是防止输入再传播及暴发流行的关键。

肠道免疫的安全靶向载体：大肠杆菌Nissle1917

长期以来,如何激发高效的肠道黏膜免疫应答来预防肠道感染始终是较为棘手的问题。本文旨在对大肠杆菌(Escherichia coli)Nissle 1917作为肠道黏膜免疫的安全靶向载体,调理胃肠道菌群紊乱、缓解溃疡性结肠炎以及利用益生菌固有特性或优化特性进行治疗的可能性等相关研究进展作一综述。大肠杆菌Nissle1917(EcN)是一株可口服的优良益生菌,也可作为生物载体活苗候选株,兼有较强的肠道局部定殖能力和无免疫原性的特性。该菌株还可以作为载体靶向递呈TAT—凋亡素融合蛋白治疗结肠直肠癌,并在研发靶向递呈防御素治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病上具有重要的功能。其基因修饰株能够原位递呈特定的抗原分子,有效激发特异性的黏膜免疫应答。重组大肠杆菌Nissle-HA110-120具有体外表达特异性抗原的能力,但EcN菌体本身不会引起黏膜免疫应答,也不影响对自身抗原的外周免疫耐受。同时,EcN具有很好的安全性,尤其是因炎症导致肠道防御屏障破坏的时候,重组大肠杆菌Nissle-HA110-120在健康或患有急性结肠炎的小鼠体内都没有迁移、克隆扩增和激活特异性CD4+T淋巴细胞的作用。