缺氧诱导因子-1和红细胞生成素3′-增强子调节内皮细胞环氧合酶和血栓素合酶基因转录

目的和方法 :将红细胞生成素 (EPO) 3′ 增强子野生片断及点突变片断借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4,用半定量RT PCR测定正常与缺氧诱导因子 1 (HIF 1 )诱导剂氯化钴 (CoCl2 )作用下培养 6h的细胞环氧合酶 2 (COX 2 )和血栓素合酶 (TXS)的mRNA。结果 :HIF 1诱导剂CoCl2 可诱导ECV 30 4的COX 2和TXS基因转录明显增强 ;向细胞导入野生EPO3′增强子片断可阻断CoCl2 诱导的COX 2和TXS基因转录增强 ,而点突变片断无此作用。结论 :在COX 2和TXS基因序列中 ,可能存在EPO3′ 增强子类似片断中的HIF 1的结合序列 ,HIF 1诱导COX 2和TXS基因表达增强可能主要通过HIF 1与该序列结合实现的。

抑制蛋白磷酸酶对嗜铬细胞瘤细胞一氧化氮合酶活性的影响

蛋白磷酸酶降低参与阿尔茨海默病 (AD)神经元退化 ,本文旨在探讨一氧化氮 (NO)在 tau蛋白过度磷酸化引起 AD脑神经元退化中的可能作用。采用 β-还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 -黄递酶 (β- NADPH- d)组织化学技术研究不同剂量蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸 (OA)对嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )一氧化氮合成酶 (NOS)活性的影响。结果显示 1nmol/ L OA与 PC12共培养 48小时 ,NOS活性轻度增强 ;当增加 OA浓度至 10 nmol/ L 时 ,培养 2 4和 48小时均可见 NOS活性明显增强。结果表明根据 1nmol/ L OA抑制蛋白磷酸酶 (PP) - 2 A,而 10 nmol/ L OA除完全抑制 PP- 2 A外 ,还部分抑制 PP- 1,提示 PP- 2 A和 PP- 1的抑制均可增强 NOS活性使 NO产生增加。关于蛋白磷酸酶活性降低和 NO产生增多与

蛋白磷酸酶抑制剂对人成神经细胞瘤细胞钙瞬态的影响

应用荧光倒置显微镜系统，分别检测了蛋白磷酸酶ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１抑制剂岗田酸（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）和ＰＰ－２Ｂ抑制剂三氟吡拉嗪（Ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒａｚｉｎｅ，Ｔｒｉ）处理的人成神经细胞瘤细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）胞浆钙瞬态变化。结果发现：１ｎｍｏｌ／ＬＯＡ抑制ＰＰ－２Ａ时，胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）瞬时波动明显增强，［Ｃａ２＋］ｉ在２０ｍｉｎ内逐步轻微升高，后逐渐回复；而用１００ｎｍｏｌ／ＬＯＡ同时抑制ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－１时，则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高，并同时伴有［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动明显增强；用１００μｍｏｌ／ＬＴｒｉ抑制ＰＰ－２Ｂ时，则引起［Ｃａ２＋］ｉ即刻持续升高，［Ｃａ２＋］ｉ瞬时波动没有明显变化。提示：蛋白磷酸酶降低可能通过钙瞬态变化而参与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病（ＡＤ）的发病过程。

一氧化氮、一氧化碳对大鼠微血管急性缺氧反应的影响

采用微循环实验方法,研究一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)对大鼠软脑膜和提睾肌微血管急性缺氧反应的影响。结果显示,内源CO生成阻断剂ZnPPⅨ对软脑膜血管的基础管径及缺氧脑微动脉扩张反应均无影响,10^(-4)mol/L ZnPPⅨ可使提睾肌微动脉收缩(7.55±3.55)％,并可使提睾肌微动脉缺氧收缩反应由(10.84±3.07)％增强至(15.48±4.94)％。10^(-4)mol/L内源NO生成阻断剂L-NNA使脑和提睾肌微动脉基础口径分别缩小(7.94±1.99)％和(10.75±3.90)％,并可使脑微动脉缺氧扩张反应由(28.16±13.20)％减弱至(20.35±8.35)％;却对提睾肌微动脉缺氧收缩反应无显著影响。而外源给CO使基础脑和提睾肌微动脉收缩,并使其缺氧反应减弱。外源给NO可轻微扩张脑微动脉和提睾肌微动脉,但对其缺氧反应无影响。

拟除虫菊酯对大鼠脑突触体谷氨酸摄取功能的影响

作者观察了拟除虫菊酯对大鼠脑突触体谷氨酸重摄取功能的影响。在一定量的突触体与不同剂量的氯氰菊酯或氯菊酯中加入放射性标记谷氨酸，测定突触体摄取的谷氨酸的放射活性，在１０－ ９ ～１０－ ４ ｍ ｏｌ／ Ｌ的剂量范围内，氯氰菊酯及氯菊酯明显抑制突触体对谷氨酸的重摄取量，并有一定的剂量依赖性。在相同剂量水平，氯氰菊酯作用明显强于氯菊酯。结果表明拟除虫菊酯对大鼠脑突触体谷氨酸高亲和性重摄取功能有抑制作用，提示突触体谷氨酸重摄取系统功能障碍在拟除虫菊酯兴奋性神经毒性中具有重要意义。

拟除虫菊酯对大鼠中枢谷氨酸和γ-氨基丁酸递质影响的免疫组织化学研究

目的 探讨拟除虫菊酯类农药对大鼠中枢神经系统谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫阳性神经细胞的影响及机制。方法 雄性ＳＤ大鼠经氯氰菊酯（７ ｍ ｇ／ｋｇ）或氯菊酯（７０ｍ ｇ／ｋｇ）连续腹腔注射染毒后，通过免疫组织化学和显微图像分析技术检测Ｇｌｕ 及ＧＡＢＡ阳性神经细胞分布和阳性细胞中递质含量。结果 氯氰菊酯或氯菊酯染毒组大鼠大脑皮层、海马Ｇｌｕ 免疫反应阳性细胞数目和阳性细胞面积比减少，阳性细胞积分吸光度降低，阳性细胞突起减少；而ＧＡＢＡ免疫阳性神经细胞数目和面积比增加，阳性细胞积分吸光度升高；在相同条件下，氯氰菊酯作用明显强于氯菊酯。结论 拟除虫菊酯引起中枢神经系统Ｇｌｕ 及ＧＡＢＡ平衡失调可能是其导致兴奋性神经毒性作用机制之一。

青心酮对猪肺动脉平滑肌细胞增生的抑制作用

在培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）内加入青心酮（３．４－ＤＨＡＰ）（６．２５×１０－５Ｍ－１０－３Ｍ／Ｌ）注射液，用结晶紫染色法，３Ｈ－ＴｄＲ掺入以及用ＳＰ免疫细胞化学检测ＰＣＮＡ表达，观察对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响，结果表明青心酮对１０％小牛血清引起的ＰＡＳＭＣ增生的作用与异搏定（６．２５×１０－６－１０－４Ｍ／Ｌ）相似，呈剂量依赖性抑制细胞增殖。提示青心酮可用于慢性肺动脉高压肺血管改建的防治。

氯氰菊酯诱导大鼠中枢一氧化氮合酶表达增强

目的 探讨拟除虫菊酯对神经系统毒作用影响及其机制。方法 通过核酸原位杂交技术研究氯氰菊酯（ｃｙｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ，Ｃｙ）对中枢神经系统一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｊｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ水平的影响。结果 Ｃｙ（２０ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射染毒３ｈ后，大鼠海马旁ＣＡ１～ＣＡ４区锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层及大脑皮层１～２分子层有较低水平的表达；

内毒素上调血管内皮细胞肾上腺髓质素基因及其机制探讨

目的 :探讨内毒素对血管内皮细胞肾上腺髓质素 (ADM)mRNA的影响 ,以及p3 8丝裂原活化蛋白激酶 (p3 8MAPK)在其中所起的作用。方法 :应用逆转录 -巢式聚合酶链反应 ,测定血管内皮细胞株ECV3 0 4在不同剂量内毒素作用时ADMmRNA的量以及采用p3 8MAPK特异性抑制剂SB2 0 3 5 8( 10mmol/L)抑制p3 8MAPK后ADMmR NA的量。结果 :内毒素 0 1、1 0、10、5 0、10 0 μg/L与ECV 3 0 4共培养 2 4h后ADMmRNA/ β -actinmRNA均不同程度高于正常培养水平 ,而SB2 0 3 5 80抑制p3 8MAPK后可部分抑制内毒素引起的ADMmRNA水平增高。结论 :内毒素可诱导ADM基因转录增强 ,激活p3 8MAPK可能是一种重要机制。

抑制磷酸酶和tau过度磷酸化诱导神经细胞凋亡

目的 探讨磷酸酶活性抑制、tau蛋白异常磷酸化与神经细胞变性死亡的关系。方法 磷酸酶 (PP) 2A/PP 1抑制剂岗田酸 (okadaicacid ,OA) 10nmol/L与成神经细胞瘤细胞 (SH SY5Y)共培养 ,DNA 梯带和末端转移酶标记技术。结果 用 10nmol/LOA与SY5Y细胞共培养 2 4h和 4 8h均可引起DNA 梯带出现 ,此时末端转移酶标记显示阳性细胞数由 2 16%± 0 94 %分别增多至 18 0 5 %±3 5 7% (P <0 0 1)和 2 2 5 2 %± 4 78% (P <0 0 1)。结论 由于上述检测指标均与细胞凋亡有关 ,提示抑制PP 2A和部分抑制PP 1引起tau蛋白异常磷酸化可能通过神经细胞凋亡而引起AD患者神经细胞丢失。

红细胞生成素3'-增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时的细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可阻断缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强，而点突变片断无此作用。结论：在ＴＸＳ基因序列中，可能存在类似ＥＰＯ３′－增强子片断，缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强可能主要通过缺氧诱导因子－１与ＴＸＳ基因序列中类似ＥＰＯ３′－增强子片断结合。