基于响应面分析法优化顶空-固相微萃取与气相色谱-质谱法检测黑龙江野生鳜挥发性风味物质

目的使用响应面分析法优化顶空-固相微萃取(headspace-solid phase microextraction,HS-SPME)与气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联合检测黑龙江鳜肌肉风味的萃取方法,并检测分析鳜肌肉中挥发性风味物质。方法使用HS-SPME-GC-MS技术,以峰面积和峰个数为指标进行单因素实验,探究盐度、萃取温度、萃取时间和解吸时间对鳜肌肉风味检测的萃取效率的影响,根据单因素实验结果采用响应面方法优化萃取条件,分析鳜肌肉中挥发性风味物质的最佳萃取条件,并用优化后的萃取条件检测鳜的挥发性风味物质。结果优化后的最佳萃取条件为盐度7.7%,萃取温度82.4℃、萃取时间46.5 min、解吸时间5.4 min。此条件下,综合评分为101.4173,共检测出33种挥发性风味物质,其中化合物含量最多的是烃类和醇类。结论优化后的HS-SPME-GC-MS分析鳜肌肉挥发性风味物质的方法可以高效萃取鳜肌肉中的风味物质。

1株鲤源致病性铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

【目的】分离鉴定导致鲤大量急性死亡的病原菌,确定其毒力基因和药物敏感性,为后续病鲤的临床治疗提供参考。【方法】从病鲤的内脏中分离培养病原菌,并对该菌株进行形态学观察、革兰染色、生理生化鉴定及16S rRNA分子鉴定;采用毒力基因检测、K-B药敏纸片法及人工回归感染试验分析该病原菌的药物敏感性和致病性。【结果】分离菌在LB固体培养基上呈现圆形或椭圆形菌落,镜检为短棒状的革兰阴性菌,具有一定的运动能力。生理生化试验结果显示,分离菌株在D-葡萄糖、明胶、脲酶、氧化酶、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸及柠檬酸试验中均呈阳性反应,其余指标皆呈阴性反应,符合铜绿假单胞菌的生理生化特征。16S rRNA基因序列系统进化树显示,分离菌与铜绿假单胞菌NR_114471.1呈现高度同源,相似性为99%。综合以上试验结果,将分离菌鉴定为铜绿假单胞菌,命名为HB2210。通过毒力基因检测发现,该菌株含有鞭毛蛋白结构基因fla基因、气溶素aer基因、细胞毒性肠毒素act基因、外膜蛋白ompA基因及热稳定性肠毒素ast基因等多种毒力基因。通过药敏试验发现,分离菌株对头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B、左氧氟沙星及哌拉西林9种抗菌药敏感。通过人工回归感染试验发现,分离菌对鲤具有急性毒性,高浓度组死亡率高达85%。【结论】本试验从病鲤组织中分离的铜绿假单胞菌HB2210具有极强的致病性,药敏试验筛选出的头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、多黏菌素B、左氧氟沙星及哌拉西林9种抗菌药素可为鲤养殖企业精准用药提供理论基础。

基于响应面分析法优化解淀粉芽孢杆菌DSYZ发酵条件

解淀粉芽孢杆菌DSYZ(Bacillus amyloliquefaciens)是一种重要的生防菌株,其代谢产物对多种病原菌有着拮抗作用,广泛应用于大蒜、辣椒、花生等农作物的生物防治,但是自然条件下其分泌的代谢产物浓度较低并且浓度主要与培养基的组成,培养条件以及自身诱导肽有关。因此,通过响应面分析法对发酵培养基进行优化以及提高菌株活菌数成为当前的主要目标。首先利用添加不同碳源、氮源、无机盐的豆芽汁培养基对菌株进行发酵,测定菌数,筛选出最适的碳源、氮源和无机盐。进一步通过单因素试验考察不同浓度的碳源、氮源和无机盐对菌种菌数的影响。然后通过响应面分析法对菌株的发酵培养基进行优化,得到最优的培养基组合。优化后的发酵培养基中的最优碳源是玉米粉为18.87 g·L^(-1),最优无机氮源是氯化铵为1.36 g·L^(-1),最优无机盐是磷酸二氢钾为0.47 g·L^(-1),优化后培养基菌数达到2.20×10^(9)cfu·mL^(-1),是未优化前的1.53倍。

辽宁省稻田养殖中华绒螯蟹中可食部分砷的含量特征及食用安全评价

目的 评价稻田养殖中华绒螯蟹体内砷的污染水平和膳食风险。方法 从辽宁省盘锦市和鞍山市采集了560份样本,采用电感耦合等离子体质谱仪和高效液相色谱-原子荧光法测定了肌肉、肝胰腺及性腺总砷和总无机砷[As(Ⅲ)和As(V)]的含量,并利用目标危险商数(target hazard quotient,THQ)和致癌风险(cancer risk,CR)来评价对人体的健康风险。结果 中华绒螯蟹中总砷均值呈现雌蟹肝胰腺与性腺>雄蟹肝胰腺与性腺>雄蟹肌肉>雌蟹肌肉的趋势,其中雄蟹肌肉与雌蟹肝胰腺及性腺总砷均值之间有显著性差异(P<0.05),雌蟹肌肉与肝胰腺及性腺总砷均值之间具有显著差异(P<0.05);总无机砷均值呈现雌蟹肝胰腺与性腺>雄蟹肝胰腺与性腺>雌蟹肌肉>雄蟹肌肉的趋势,总无机砷含量仅占总砷含量的5.014%~6.250%;盘锦市盘山县大洼区和胡家镇梁家村几个采样点的总砷和总无机砷含量相较于其他地区偏高,而其余的采样点总砷和总无机砷含量处在一个相对较低的水平;稻田养殖中华绒螯蟹所有样品的THQ值远低于1,CR值在10-6和10-4之间,经判别仅具有低致癌风险(levelⅡ)。结论 稻田养殖中华绒螯蟹不会对消费者造成潜在的健康危害。

论实际施工人制度的正确适用

实际施工人是指在施工合同无效的情况下,实际履行施工义务的主体。自《最高人民法院关于审理建设工程施工合同纠纷案件适用法律问题的解释》第26条规定了实际施工人制度之后,我国的审判实践中出现了一些新的情况。实际施工人制度背离了合同相对性原则,增加了审判工作的难度,其制度的运用带来不公平现象。因此,应准确认定实际施工人,精确适用实际施工人制度。

论建设工程项目部的法律责任承担

结合建设工程项目部的性质,介绍了建设工程施工项目部运作中的不规范现象,从获取营业执照、依法行使职权、超越代理权等方面,论述了建设工程项目部的法律责任承担,有利于工程项目的正常运作。

一株鲤源降血糖赖氨酸芽孢杆菌的筛选鉴定及其培养基优化

为研究赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus fusiformis的降血糖功能并提升其代谢产物浓度,通过产蛋白酶能力试验,从鲤肠道内含物中筛选具有蛋白分解能力的细菌,并对其产二肽基肽酶-Ⅳ(DDP-Ⅳ)抑制剂的能力进行测定,筛选出的菌株经分离纯化培养后,通过16S rRNA测序和生理生化特征进行鉴定,并通过单因素试验和响应面优化试验,对菌株的培养基配方进行配比优化。结果表明:筛选到一株产DDP-Ⅳ抑制剂能力较强的益生菌CR-3(37℃时产率为62.35%),通过生理生化试验和构建系统进化树,将CR-3菌株鉴定为赖氨酸芽孢杆菌;响应面优化试验显示,CR-3菌株的最佳发酵培养基配方为蔗糖1.46%、CaCO_(3)0.55%、NH_(4)Cl 0.48%及豆粕2.10%(均为质量分数),在此条件下,发酵培养基的OD值较初始发酵培养基的OD值提升了64%。研究表明,本试验中筛选出的赖氨酸芽孢杆菌具有良好的产DDP-Ⅳ抑制剂能力,并具有潜在的降鲤血糖功能。

黑龙江水域5个群体翘嘴鲌肌肉质构及营养成分比较分析

为探究黑龙江水域不同群体翘嘴鲌Culter alburnus的肌肉质构特征及营养成分差异,对黑龙江(HLR)、乌苏里江(WSR)、松花江(SHR)和兴凯湖(XKL)4个翘嘴鲌野生群体及兴凯湖翘嘴鲌养殖群体(XKY)的基本营养成分、氨基酸、脂肪酸和质构等指标进行了测定分析。结果表明:兴凯湖野生群体肌肉弹性和黏性显著高于其他群体(P<0.05),兴凯湖养殖群体肌肉硬度显著低于其他群体(P<0.05);兴凯湖野生群体、兴凯湖养殖群体和松花江群体肌肉粗蛋白质含量显著高于黑龙江群体和乌苏里江群体(P<0.05);5个群体肌肉中所含氨基酸种类相同,但含量有一定差异;兴凯湖野生群体和养殖群体肌肉的氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸含量均显著高于其他群体(P<0.05);兴凯湖野生群体和养殖群体的饱和脂肪酸含量显著低于其他群体(P<0.05),而多不饱和脂肪酸含量则显著高于其他群体(P<0.05)。研究表明,黑龙江水域5个翘嘴鲌群体均具有良好的肌肉品质和营养组成,是营养价值较高的优质鱼类,其中兴凯湖野生群体表现最佳,具有更高的食用价值和开发利用前景。