敲除CRFK细胞氨基肽酶N对猫传染性腹膜炎病毒复制影响的研究

猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。

鹌鹑实验动物化简史及相关研究进展

鹌鹑是一种重要的生产和实验用家禽,可按照实验动物标准进行实验动物化。文章总结了鹌鹑实验动物化简史及当前与实验动物领域密切相关的研究进展,包括分类学地位和驯化、常用的品种品系及资源、无菌鹌鹑培育、近交系鹌鹑培育、实验室饲养健康管理和资源保存,并对实验鹌鹑的应用前景进行了展望。

SPF鸡的主要垂直传播性病原体及其检测标准分析

无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)鸡在禽病及疫苗研究中应用广泛。垂直传播性疾病以垂直传播的方式传递给雏鸡,降低雏鸡成活率、增加生产成本、给整个养殖行业带来巨大经济损失的同时,严重影响SPF鸡的培育与使用。因此,需要加强研究及管理人员对鸡垂直传播性疫病病原的认识,并制定出行之有效的监测措施。质量监测是保证SPF鸡质量的重要环节,其中病原检测是首要环节。在此基础上,应结合净化方式以及生物安全防控手段来培育合格的SPF鸡群。本文综述了包括病毒性病原、细菌性病原和支原体在内的鸡主要垂直传播性病原和这些病原的检测方法,比较美国企业标准和中国国家标准中有关SPF鸡微生物检测项目及方法的差异。结果分析显示,在两种标准中,垂直传播性病原大肠埃希菌、奇异变形杆菌以及沙门菌、禽白血病等垂直传播性疾病均未被列入SPF鸡微生物检测项目。而这些病原存在混合感染特征,一旦爆发,将严重影响鸡群健康。为生产更高质量的SPF鸡群,有必要将其列入必检项目。本文旨在帮助人们了解SPF鸡微生物监测的相关标准以及垂直传播性病原的危害和防控策略,为SPF鸡病原检测及净化提供参考。

实验用荣昌猪SLA-1等位基因鉴定及分子遗传特征分析

旨在明确实验用荣昌猪SLA遗传背景,深入研究SLA-1分子相关的抗原递呈和免疫应答机制,本研究对27头荣昌猪采集抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,设计特异性引物对SLA-1基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,对获得序列的分子特征进行分析。结果显示,荣昌猪中共获得11个SLA-1等位基因,其中,9个为新等位基因,全部获得GenBank登录号和ISAG SLA命名委员会官方命名,SLA-1^(*)24:01等位基因在该群体中频率最高。SLA-1基因编码区全长1086 bp,存在127个核苷酸多态位点,非同义单核苷酸多态性位点数高于同义单核苷酸多态性位点数。核苷酸多样度为0.0449,单倍型多样度为1,平均核苷酸差异数为48.782,G+C含量为64.9%。SLA-1基因编码的361个氨基酸中,有75个氨基酸变异位点;第2和第3外显子编码区多态性最高,且第2外显子区域的氨基酸变异程度高于第3外显子区,组成抗原肽结合槽6个口袋的33个关键氨基酸位点中,11个在人与荣昌猪之间高度保守,与β2-微球蛋白结合的19个关键氨基酸位点中,10个保持一致,CD8分子与MHC结合的关键氨基酸位点中,只有225(Thr/Ser)和228(Thr/Met)位点不同。同源性和系统进化树分析表明,SLA-1^(*)10:03和SLA-1^(*)18:03分别与人HLA-A^(*)02:01和HLA-A^(*)11:01等位基因的同源性最高,荣昌猪与亚洲野猪、巴马小型猪和融水小型猪等亚洲猪种具有较近的亲缘关系。本研究成功获得了中国地方猪种荣昌猪SLA-1基因,发现其具有极为丰富的多态性,为揭示荣昌猪的SLA遗传背景和开展异种移植研究奠定了遗传学基础。

鸡传染性喉气管炎、传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系BWEL-SPF鸡或鸡胚的感染试验

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬＳＰＦ鸡，观察比较临床症状和剖检所见病变；用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚，收获胚液并测定其毒价。从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。

鸡副嗜血杆菌(HPG-A221、C668)对10个家系BWEL-SPF鸡胚的感染试验

用鸡副嗜血杆菌国际标准株（HPGA-221、C668）分别接种1-10个家系的BWEL-SPF鸡6日龄鸡胚，观察攻毒后16-30小时鸡胚死亡的情况。结果，第5、7、8家系死亡率为100％;1、4、6家系死亡率为90％;2、3、9、10家系死亡率为80％-85％，10个家系HPG平均死亡率为90.5％。对照组（HWL-SPF鸡胚）平均死亡率为90％。从而评估BWEL-SPF鸡群每个家系对鸡副嗜血杆菌（HPG-A221、C668）的敏感性。

CAV对BWEL-SPF鸡的致病性试验及毒价测定

本实验用鸡传染性贫血病病毒标准株 (CAV和Cux_1)和国内分离株 (CAVM990 5CAV和H990 6 )分别对BWEL_SPF雏鸡 1～ 7家系进行 1日龄和 1月龄攻毒的致病性试验。 1日龄雏鸡接种CAVCux_1毒株 ,12天后观察到感染鸡的喙、腿、冠和爪等部位颜色变浅 ,16天剖杀 ,观察剖检变化 ,并进行IFA和PCR检测 ,确定感染率和CAV毒价。结果CAVCux_1株对 1日龄BWEL_SPF雏鸡半数感染量 (CID50 )为 10 4 .3 / 0 .2ml。同时检测到CAVCux_1株对 1月龄BWEL_SPF雏鸡发病率为 6 0 %;CAVM990 5和CAVH990 6对 1日龄BWEL_SPF雏鸡发病率为 10 0 %,死亡率为 40 %、2 0 %。

几种消毒方法对SPF鸡培育室消毒效果评价

通过应用几种消毒剂和消毒方法，对ＳＰＦ鸡培育室进行消毒，测定不同消毒剂和方法消毒后微生物消长情况，比较不同消毒剂和方法的消毒效果。认为１０％过氧乙酸喷雾和１０．６１ｇ／ｍ３甲醛（硅油）熏蒸消毒是比较理想的消毒方法。

BWEL-SPF种鸡在隔离器中的培育和管理

SPF种鸡群培育和管理对建立SPF种鸡群至关重要 ,但在培育过程中也要保持来源鸡群各项性能指标的相对稳定。在做好鸡群疫病净化和生物学敏感试验的同时 ,对培育鸡群定期进行遗传性能和生产性能 (体增重、蛋增重、产蛋率、受精率、蛋料比、性比等 )的跟踪测定 ,并与来源鸡群进行对比 ,发现没有明显的差异或差异不显著。

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株 (吉林株、湖南株和广西株 ) ,对BWEL_SPF鸡群 1～ 1 0个家系 3周龄鸡进行敏感性试验 ,观察比较该鸡群各家系对不同毒株的敏感性 ,测定不同毒株的毒价。广西强毒株 (IBDV_GX株 ) ,LD50 为 1 0 5.0 /0 .2ml;湖南强毒株 (IBDV_HN株 ) ,LD50 为 1 0 5.2 / 0 .2ml;吉林强毒株 (IBDV_JL株 ) ,LD50 为 1 0 5.5/ 0 .2ml。以 1 0 0LD50 攻毒剂量 ,对BWEL_SPF鸡 1～ 1 0家系的致死率为 95 %～ 1 0 0 %。由此可见 ,BWEL_SPF鸡群对鸡传染性法氏囊强毒非常敏感 ,可供作试验鸡 ,数据可靠。

我国SPF种鸡群研究进展

目前 ,我国有大小不同规模的SPF种鸡场十几家 ,但由于我国还没有自己的SPF种鸡群 ,这些单位不得不从外国引进SPF种蛋进行建群和更新换代 ,这样 ,不仅花费大量的外汇 ,还将受控于外国之下。近年来 ,我国对这方面的研究较快 ,1993年 ,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所在国内首次采用普通种鸡群 (京白鸡 )为原材料 ,经疫病净化试验、生物学敏感性试验和选育培育试验等方法 ,用隔离器培育我国SPF种鸡基础群。 1996年 ,在培育出的SPF种鸡基础群的基础上开展了我国SPF种鸡群培育的研究工作 ,并已取得了阶段性进展。

京-1株鸡马立克氏病强毒对BWEL-SPF鸡群的感染试验

用京 1株鸡马立克氏病 (MD)强毒感染 1～ 10个家系 1日龄的BWEL SPF鸡 ,观察比较临床症状和剖检病变及病理切片 ,以此评估该BWEL SPF鸡群每个家系鸡对京 1株MD强毒的敏感性。结果 ,1、5、8、9号家系的BWEL SPF鸡对京 1株MD强毒最敏感 ;3、4、6、10号家系次之 ;2、7号家系敏感性相对较差。

BWEL鸡群的疫病监测与净化

SPF鸡和鸡胚广泛用于科学研究和生物制品生产等领域,其质量是否达标,直接影响科研结果和试验数据的可靠性。1993年前,我国还没有自已的SPF种鸡群。从国外引进的SPF种鸡群,经几年繁养,出现鸡个体变小,蛋重减轻,蛋的品质下降,渐渐失去SPF鸡的使用价值。为改变这一状况,我所S...

达乌尔黄鼠的生物学特性及实验动物化研究概况

本文简要介绍达乌尔黄鼠的形态特征、生活习性、活动规律、繁殖特征、栖息场所与洞型构造、食性分析和分布等情况,为达乌尔黄鼠的实验动物化研究提供理论基础和条件保障。

BWEL-SPF种鸡在隔离器中的育种和光照管理

1993年,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所在国内首次采用普通种鸡群(BWEL)为原材料,经疫病净化试验、生物学敏感性试验和选育培育试验等方法,用隔离器培育我国BWEL-SPF种鸡基础群.

实验动物设施环境检测方法探讨

实验动物设施竣工投入生产（实验）以后,都需要进行性能测定及工程验收,在系统维修或更新时也要进行全面的测试,目前国内各级实验动物管理机构在审发设施条件合格证时,也注重对实验动物（或动物实验）设施的环境进行检测。对实验动物设施环境检测内容大体上可分为两个部分,即外环境条件的检查和内环境条件的检测。供参考。1外环境条件的检查作为实验动物设施的外环境,主要包括：地理位置,地形特点与毗邻建筑（实验室）的关系,必要的公用设施——水、