栀子在肝脏疾病防治中的应用及作用机制研究进展

栀子为茜草科植物栀子的干燥成熟果实,是江西道地药材,含有环烯醚萜类、二萜类、黄酮类等多种化学成分。研究表明,栀子对多种类型肝损伤有一定的预防保护效果。栀子发挥肝损伤保护作用与其抗氧化、清除自由基、抗脂质过氧化等有关并有多种通路参与其中。现通过对栀子在肝脏疾病防治中的临床应用以及功能与机理进行系统总结,并对其研发现状加以研究,以期为栀子的开发和合理应用提供依据。

不同发育时期栀子果实中6种成分的变化规律

目的建立不同发育时期栀子果实中6种成分的含量测定方法,探究各成分的变化规律。方法分析采用Durashell C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长238、328、440 nm。结果随着栀子果实的发育成熟,栀子苷、京尼平苷酸、绿原酸含量呈逐渐下降的变化趋势;西红花苷类成分在栀子果实初期未合成,随着栀子果实的发育成熟,含量呈逐渐上升的变化趋势;京尼平-1-β-龙胆双糖苷的含量呈先上升后下降的变化趋势。结论通过对不同发育阶段栀子果实中6种成分含量的变化规律研究,为进一步探讨栀子药材的质量控制和成分积累机制提供参考。

栀子炭疽病的分离鉴定及其诱导的生理响应

目的:分离鉴定栀子炭疽病病原菌种类,探究栀子响应炭疽病病菌生理指标变化,为栀子炭疽病的防治提供理论依据。方法:采集栀子炭疽病病叶标本,对病原菌进行分离与纯化,柯赫氏法则检测病原菌的致病性,形态观察、显微鉴定和rDNA-ITS序列分析系统鉴定病原菌,选取一年生的栀子种苗叶片接种分离得到的炭疽病病原菌,在处理的0、4、8、12、24、48、72 h时测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性以及游离脯氨酸(Pro)和可溶性糖的含量。结果:从采集的栀子炭疽病叶片中分离纯化得到的菌株,通过病原菌形态观察和分子生物学鉴定,确定该病原菌为香柱菌生赤壳Bionectria epichloe,将其接种栀子叶片后,SOD、POD、CAT活性以及Pro和可溶性糖含量均呈先上升后下降的趋势。结论:确定了栀子炭疽病病原菌为香柱菌生赤壳Bionectria epichloe,并初步揭示了栀子叶片对炭疽病病害胁迫响应的生理机制。

基于网络药理学-分子对接探讨茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症的作用机制

目的利用网络药理学及分子对接技术,研究茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的物质基础及可能的作用机制。方法使用TCMSP数据库挖掘茵陈蒿汤有效成分和作用靶点,利用GeneCard与OMIM数据库筛选疾病靶点。将药物与疾病靶点的交集导入String构建PPI网络,使用Cytoscape3.7.2软件筛选核心靶点,借助Metascape数据库对靶点进行基因本体论(GO)功能和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,从筛选靶点-成分网络图中根据degree值筛选出前5个关键成分,并将该网络中的基因靶点以degree值高低进行排序,选择前5个核心靶点,然后从RCSB PDB数据库和Pub Chem数据库获取靶点与成分的三维结构和化学结构,使用Pymol软件对蛋白质分子进行去水、去磷酸根等操作,最后使用AutoDockTools进行分子对接。结果茵陈蒿汤中共筛选出21种有效活性成分,关键成分5个,分别为槲皮素、山奈酚、芦荟大黄素、谷甾醇、大黄酸;其治疗ICP的的核心靶点14个,分别为JUN、CASP3、TNF、TP53、MYC、EGFR、AKT1、VEGFA、MMP9、MAPK1、EGF、IL6、CXCL8、MAPK8,靶点主要涉及细胞氧化应激反应、细胞运动的正向调节、受体配体活性、细胞因子受体结合、蛋白激酶活性等生物学过程,通过乙型、丙型肝炎途径、癌症途径、MAPK、IL-17、TNF信号通路等多途径发挥治疗ICP的作用。分子对接结果显示关键成分与对应靶点具有较好的结合活性。结论茵陈蒿汤治疗ICP是通过槲皮素、山奈酚、芦荟大黄素、谷甾醇、大黄酸等多种成分作用于JUN、CASP3、TNF、TP53、MYC、EGFR、AKT1、VEGFA、MMP9、MAPK1、EGF、IL6、CXCL8、MAPK8等多种基因靶点,从而影响MAPK、IL-17、肿瘤坏死因子、ErbB、Toll样受体以及乙型丙型肝炎病毒等多种相关信号通路发挥功效,该研究为进一步深入研究其作用机制奠定了基础。

4种提取工艺制备溃结康栓对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用

目的研究4种提取工艺制备的溃结康栓对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用。方法 SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉秦栓组和4种提取工艺制备的溃结康栓组共7组,每组10只,用TNBS法复制UC大鼠模型,各给药组给予相应栓剂治疗,连续14 d。以各组实验大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤度、组织病理学改变、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)等为指标,对其治疗疗效进行评价。结果模型组大鼠DAI评分、结肠黏膜损伤评分,血清中TNF-α、IL-1β及IL-4水平与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),美沙拉秦栓组、各工艺溃结康栓组DAI评分、结肠黏膜损伤评分显著降低,TNF-α、IL-1β及IL-4水平与模型组比较有统计学意义(P<0.05);美沙拉秦栓组与工艺Ⅰ溃结康栓组、工艺Ⅳ溃结康栓组DAI评分,TNF-α、IL-1β及IL-4水平比较无统计学意义。结论 4种提取工艺制备的溃结康栓均对TNBS诱导的UC模型大鼠有治疗作用,其中以提取工艺Ⅳ制备的溃结康栓疗效尤为显著,可为溃结康栓制剂研究提供工艺基础。

江西省栀子根结线虫病病原鉴定及其防治研究

目的:针对江西省抚州市临川区栀子种植基地发生的严重根结线虫病,明确病原物种类,验证化学药剂对栀子根结线虫的抑制作用,为栀子根结线虫病原的研究及病害防治提供理论依据。方法:对栀子根结线虫进行分离及致病性测定,观测分离物的形态特征,并对其rDNA-ITS序列及28S rDNA D2D3序列进行测序及生物信息学分析。以根结线虫2龄幼虫(J2s)为材料,进行室内药剂毒力测定。结果:从采集到的栀子病根中经过分离纯化得到线虫,在病原回接实验中,栀子根系均产生根结。栀子根结线虫的形态学特征与象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii基本一致,rDNA-ITS、28S rDNA D2D3基因序列与象耳豆根结线虫的同源性均达到99%以上;系统发育树确定该根结线虫与象耳豆根结线虫位于同一分支。杀线虫剂的室内毒力测定结果表明,25 mg/L氟吡菌酰胺对Meloidogyne enterolobii抑制效果最佳,达到87.64%。结论:本研究确定在江西栀子种植基地中发现的根结线虫种类为象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii,氟吡菌酰胺能够有效防治栀子根结线虫。

栀子叶片响应链格孢菌侵染的转录组学分析

目的探究链格孢菌胁迫下栀子叶片的应答机制和分子基础。方法选用链格孢菌侵染后3个时间点的栀子叶片,使用Illumina2000进行转录组测序分析,筛选差异表达基因。结果借助RNA-seq技术共筛选到12538、11224、13452个DEGs,其中上调的分别有8697、6883、7805个,下调分别有3841、4341、5647个;通过GO功能分类和KEGG富集分析,主要显著富集到植物激素信号转导通路、MAPK信号通路-植物、淀粉和蔗糖代谢3条代谢通路,调控AUX1,BRI1、PR1、WRKY33、EIN3、MYC2、MPK6等基因表达。q-RT-PCR验证结果与转录组测序结果基本一致。结论栀子在遭受链格孢菌胁迫后,大量基因被抑制或诱导表达,转录组特征发生显著变化。其抗病机制与调节相关代谢通路和调控基因表达有关。