不同品种白芸豆α-淀粉酶抑制剂的活性和含量差异分析

探究不同品种白芸豆α-淀粉酶抑制剂(α-AI)的活性和含量差异,为α-AI专用型白芸豆的品种选育和加工生产提供指导。以大白芸豆(YWL1、YWL2)、中白芸豆(Tbh1、Tbh2)、小白芸豆(云白1、云白2)品种为材料,对其营养成分、α-AI的活性和含量进行测定分析,并采用超滤膜进行不同分子量α-AI1(6~20 ku)、α-AI2(21~40 ku)、α-AI3(41~60 ku)的分离,测定不同分子量α-AI的活性差异。结果表明,不同品种白芸豆的蛋白质、脂肪、淀粉和灰分含量差异明显,含量分别为17.5%~26.9%、1.1%~2.3%、32.9%~43.5%、3.8%~4.6%。云白1蛋白质含量最高(26.9%);YWL2灰分含量最高(4.6%),Tbh2脂肪含量最高(2.3%);α-AI的活性依次排序为YWL1>YWL2>云白1>Tbh1>Tbh2>云白2;α-AI的含量依次为云白1>YWL1>Tbh1>YWL2>Tbh2>云白2;将α-AI提取液进行膜分离得到3种不同分子量结构的α-AI1(6~20 ku)、α-AI2(21~40 ku)、α-AI3(41~60 ku),活性平均值分别为(2315±313)、(11491±1226)、(45683±1914)U/g,依次是α-AI3>α-AI2>α-AI1。综合比较发现,YWL1具有较高的α-AI活性和含量,分别为23156 U/g和7.04%,更适于α-AI的生产。

NF-κB在抗β_2GPⅠ/β_2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。

甘蔗磷效率基因型差异及磷高效基因型筛选研究

以120个不同地域或具有不同遗传背景的甘蔗品种(系)为材料,通过田间试验研究甘蔗不同基因型间的磷效率差异并筛选出甘蔗磷高、低效基因型。结果发现:低磷胁迫下,甘蔗幼苗期地上部生物量、苗高、磷累积量、磷素利用效率、叶片(+5)磷含量均受到显著影响;幼苗期地上部生物量与磷累积量、磷素利用效率呈显著相关,与其他性状相关不显著。以幼苗期地上部生物量、磷累积量、磷素利用效率等为参数进行聚类分析,结果表明:供试品种(系)可分为低产磷低效、较低产磷较低效、高产磷低效、低产磷高效和高产磷高效5大类型。综合幼苗期效率相关性状和成熟期蔗茎产量相关性状,筛选出5个磷素高效基因型和5个磷素低效基因型。磷素高效基因型为福农91-21、闽糖01-77,桂糖97-69、云瑞06-8270、云瑞06-8362;磷素低效基因型为Co285、台引14、云瑞05-782、云瑞05-784、云瑞06-2414。该研究结果为甘蔗磷高效选育及机制研究提供了基础。

mTOR活化对抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子表达的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β_2糖蛋白I(β_2GPI)/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。方法用抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-q PCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TF mRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。结果抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均<0.05);雷帕霉素能明显降低抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均<0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均<0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P>0.05)。结论抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。

PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠表达组织因子的影响

目的:本研究拟探讨PDTC和姜黄素对抗β_2GPI抗体诱导小鼠组织因子(Tissue factor,TF)表达的影响。方法:BALB/c小鼠先用PDTC[100 mg/(kg·d)]或/和姜黄素[50 mg/(kg·d)]预处理2 h,再进行腹腔注射anti-β_2GPI(500μg/只),取小鼠腹腔巨噬细胞、双侧颈动脉和胸主动脉,超声裂解,收集细胞总RNA和蛋白,实时定量PCR(Real-time q PCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性,Western blot方法检测NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65、c-Jun和磷酸化pc-Jun的表达情况。结果:抗β_2GPI抗体能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞TF的表达及NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化,与对照相比差异有统计学意义(P<0.05 vs NR-Ig G);PDTC和姜黄素均能抑制抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达以及NF-κB p65和cJun/AP-1的磷酸化效应(P<0.05 vs anti-β_2GPI),但是二者没有协同作用。结论:PDTC和姜黄素均能影响抗β_2GPI抗体诱导小鼠TF的表达,表明其具有防治血栓形成的潜力。

手部高压油漆注射伤8例治疗体会

随着舟山市船舶修造业的蓬勃发展，高压油漆喷射作业正被广泛应用，而由油漆高压喷射不慎引起的手部损伤也日渐增多。由于其皮肤伤口小，早期损伤轻．常被外科医生们忽视。若处理不当。容易预留不同程度的手部畸形及功能障碍。2005—2008年我院外科共收治8例手部高压油漆注射伤患者，现将诊治情况报告如下。

几种豆科作物对酸性土壤逆境因子适应性研究

采用水培法对三种豆科作物在不同介质pH、磷水平、Al3＋、Mn2＋协迫条件下植株的生长、相关酶类活性、元素吸收及有机酸分泌及其差异性进行了探讨。结果表明，三种豆科作物在低pH条件下的生物产量显著降低，而根尖H＋－ATPase活性显著提高，低pH溶液对作物影响顺序为：草木犀＞苜蓿＞大豆；低磷（0．05、0．10 mmol／L）胁迫下三种豆科作物生物产量、植株磷含量均显著下降而根尖H＋－ATPase活性显著提高，三种作物中苜蓿对低磷胁迫较敏感，而草木犀适应性最强；铝（3～10μmol／L ）处理后苜蓿和草木犀根尖能被苏木精染为紫色，且苜蓿的染色较草木犀的深，而铝处理后的大豆根尖经苏木精染色后观察不到明显的紫色，且大豆根尖经30μmol／L处理后根系分泌柠檬酸。锰（50、100μmol／L MnSO4）处理对三种植株的生物产量和锰含量的影响顺序为大豆＞苜蓿＞草木犀。采用赋值法对三种豆科作物适应酸性土壤中低pH、低磷、高铝、高锰胁迫的适应能力的综合评价表明，三种豆科作物的综合适应能力顺序为大豆＞草木犀＞苜蓿。

上市公司财务报告分析——以万科房地产股份有限公司为例

万科企业股份有限公司是中国房地产行业的领军企业之一,有着雄厚的资本,较大的业务辐射范围,在中国的房地产行业中有着举足轻重的地位,在社会上的众多企业中也有很大的代表性,因此选择万科企业股份有限公司作为财务分析对象。本文选取2010~2013年度报告中的财务报表,主要利用比率分析方法,对企业的偿债能力、盈利能力、营运能力、发展能力进行财务分析,并与行业水平进行了比较,分析行业地位,发掘异常指标,帮助管理者有效追溯问题根源,客观反映企业经营状况,评价企业存在的问题并给予建议。以期给企业经营管理者、企业债权人、股东等报表使用者提供参考,做出正确决策。

销售及应收账款内控研究

企业的内部控制越来越受到管理层的重视,但是大部分企业仍存在内部控制缺失或者失控的现象,尤其是销售及应收账款的内部控制。目前涉及销货业务的企业为争夺市场份额、管理者为了经营成果、销售人员为了销售业绩利用各种手段进行销售。其中,赊销带来的应收账款的回收就是企业一大难题,因为销售及应收账款内部控制缺失导致破产的企业比比皆是,文章目的在于通过案例探究如何做好销售及应收账款的内部控制,使企业最大限度地避免坏账和呆账。

酸性土壤植物锰毒与修复措施研究进展

指出了锰是植物必需微量元素,但过量的锰会对植物产生毒害。锰毒作为酸性土壤上主要的植物生长限制因子,已引起了越来越多的关注。综述了近年来有关土壤锰有效性、植物锰毒症状、锰毒害生理过程、植物耐锰机制和对应的锰毒修复措施等方面的研究进展。

二氧化钛负载的镍氧化态对乙腈气相加氢的影响（英文）

采用浸渍法制备了二氧化钛负载镍催化剂.通过控制还原温度(200-400°C),在Ti O2上得到不同氧化态的镍颗粒.结果发现,乙腈气相加氢反应受镍氧化态的影响,300°C下还原的催化剂表现出最高的乙腈转化活性,100°C时将乙腈完全转化.产物产率受到Ni/Ti O2催化剂酸性的影响,而催化剂的酸性不仅受到Ti O2载体的影响,还受到负载物Ni颗粒性质的影响.随着催化剂还原温度升高,金属态镍逐渐出现在催化剂表面,降低了催化剂的酸性强度,使三乙胺的最大产率升高(从34%升高到48%左右).研究还发现在Ni/Ti O2催化乙腈加氢反应中,三乙胺是初始产物.Ni的状态不仅影响乙腈的转化,还影响产物的脱附.提出了乙腈加氢的第一步反应机理.

定量式静压转台动态特性建模与影响因素分析

静压转台的动力学性能对转台的综合性能有较大影响,所以对转台在动载作用下响应的深入研究对于转台优化设计及提升转台的综合性能有重要作用。根据Christensen的模型计算考虑表面粗糙度的情况下静压转台支承油垫及预压油垫的非线性承载力。建立多油垫转台的多自由度动力学模型,应用龙哥库塔法计算转台在均载及偏载时转台的响应及转台的稳定时间和稳态油膜厚度,分析表面粗糙度、转台初始油膜厚度、转台支承及预压油垫进油流量、转台转动对转台动态特性的影响。结果表明偏载使得转台的动态性能下降并使转台的某些支承油垫油膜厚度出现较大幅度降低。较小的油膜初始厚度和较大的流量可以提升转台的动态性能,而表面粗糙度等因素对于转台的动态特性也有比较明显的影响其中周向粗糙度倾向与提高转台性能而径向粗糙度则倾向于降低转台性能。所建的模型及分析结论将为转台的优化设计及转台综合性能的提升提供理论基础。

抗β2GPI抗体促进载脂蛋白E缺陷小鼠血管炎症及血栓相关分子的表达

目的探讨抗β2糖蛋白I(β2GPI)抗体在载脂蛋白E缺陷(ApoE^(-/-))小鼠表达动脉粥样硬化相关炎症因子和血栓相关分子过程中的作用。方法将ApoE^(-/-)小鼠实施颈动脉套环手术后,随机分为生理盐水组、100μg抗β2GPI抗体组、100μg同源对照抗体(兔IgG)组以及100μgβ2GPI/抗β2GPI抗体复合物组。各组均给以高脂饮食,且每7 d腹腔注射1次相应刺激剂,6周后处死小鼠。采用HE染色观察套环侧颈动脉阻塞情况,并以免疫组织化学染色检测套环侧颈动脉TLR4、组织因子(TF)和冯·维勒布兰德因子(vWF)的表达。采用实时荧光定量PCR检测主动脉的白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。结果 HE染色结果显示抗体组阻塞最为明显,免疫组织化学染色结果显示抗体组套环侧颈动脉TLR4、TF和vWF表达上调,抗体组主动脉IL-1β和TNF-α的mRNA水平明显高于其他3组。结论抗β2GPI抗体通过上调小鼠动脉血管表达炎症因子IL-1β和TNF-α,血栓相关分子TF和vWF以及TLR4的表达,促进动脉粥样斑块形成。

β_2GPI/抗β_2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。

β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99～108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。

抗β_2GPI/β_2GPI复合物激活THP-1细胞表达炎性相关因子

目的探讨抗β2糖蛋白I(抗β2GPI)自身抗体与β2糖蛋白I(β2GPI)复合物刺激单核细胞株THP-1表达炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α及可能机制。方法用荧光定量PCR法检测抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞不同时间(0.5、1、1.5、2、6 h)后IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达,用免疫荧光染色法及western blot观察THP-1细胞表达IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的情况。荧光定量PCR及western blot观察Toll样受体4(TLR4)途径抑制物(TAK-242)干预抗β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的刺激作用。结果抗β2GPI/β2GPI复合物(100μg/mL)刺激THP-1细胞不同时间,可使细胞表达IL-6、IL-8及TNF-αmRNA水平逐渐上升,于刺激2 h时IL-6、IL-8及TNF-α达到峰值(P<0.01),免疫荧光染色及western blot证实细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也明显增加。TAK-242(5μmol/L)可显著抑制抗β2GPI/β2GPI复合物诱导的细胞IL-6、IL-8及TNF-α表达。结论抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4途径,激活THP-1细胞表达炎性细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α,参与抗磷脂综合征的病理机制。

Toll样受体4在抗β_2GPⅠ-β_2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均<0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均<0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。

β_2糖蛋白1多肽抗体的制备与应用

目的 利用人工合成β2糖蛋白1（β2GP1）多肽制备针对人源、鼠源β2GP1的多克隆抗体, 并鉴定抗体的特异性及致病性。方法 应用Fmoc法化学合成β2GP1 N端第35~51位氨基酸的多肽, 将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联, 免疫新西兰大白兔制备抗血清, 蛋白G纯化得到抗β2GP1多肽抗体, 利用ELISA和Western blot法鉴定其效价和特异性。体外实验使用抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物刺激C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞一定时间, 收集细胞总RNA和总蛋白, 实时定量PCR、Western blot法分别检测细胞组织因子（TF）mRNA和蛋白表达; Western blot法检测细胞p38、磷酸化p38、核因子κB p65（NF-κB p65）及磷酸化NF-κB p65表达情况; 体内实验采用C3H/HeN小鼠腹腔注射抗β2GP1多肽抗体建立实验性抗磷脂综合征（EAPS）模型, 检测小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度及部分凝血活酶时间（APTT）。结果 化学合成β2GP1多肽的纯度为94％, 达到免疫用抗原标准。偶联KLH后免疫新西兰大白兔, 其抗血清效价大于1∶32 000。Western blot结果显示抗β2GP1多肽抗体可特异性识别人源和鼠源β2GP1条带, 双抗夹心ELISA检测表明该多肽抗体可与β2GP1隐蔽表位特异性结合。体外实验显示抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物能够增强小鼠腹腔巨噬细胞p38、 NF-κB p65磷酸化, 诱导细胞TF mRNA及蛋白表达。体内实验成功建立EAPS小鼠模型, 小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度大于1∶3200, APTT明显缩短。结论 所制备的抗β2GP1多肽抗体可识别人源和鼠源β2GP1分子, 能与β2GP1隐蔽抗原特异性结合且具有致病效应。

MAPKs在anti-β_2 GPI/β_2 GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。