LINC00467高表达通过抑制AMPK/mTOR通路抑制细胞自噬促进肺腺癌细胞的增殖和转移

目的探讨LINC00467对肺腺癌增殖和转移的影响及参与细胞自噬的机制。方法体外培养人支气管上皮细胞16HBE和人肺腺癌细胞A549和H1299,A549和H1299细胞经慢病毒shlinc00467和shNC感染、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和AMPK抑制剂BML-275处理。分别设置shNC组、shlinc00467组、shNC+3-MA组、shlinc00467+3-MA组、shNC+BML-275组和shlinc00467+BML-275组。实时荧光定量PCR检测细胞中LINC00467的表达,TCGA数据分析组织中LINC00467的表达以及对肺腺癌患者生存率和临床分期的影响,克隆形成实验检测细胞增殖情况,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力,免疫荧光染色检测LC3的表达,Western blotting检测蛋白表达,GSEA富集分析LINC00467与自噬通路的相关性。结果与16HBE细胞相比,LINC00467在A549和H1299细胞中表达增加(P<0.001)。与癌旁组织相比,肺腺癌组织中LINC00467高表达(P<0.001)且随着临床分期增加表达量增加(P<0.05),LINC00467高表达导致患者不良的总体生存率(OS,P=0.049)和第一阶段进展率(FP,P=0.026)。与shNC组相比,shlinc00467感染的A549和H1299细胞中LINC00467表达降低(P<0.001)。与shNC组相比,shlinc00467导致A549和H1299细胞克隆形成数(P<0.01)、迁移细胞数(P<0.001)、侵袭细胞数(P<0.001)减少、p-mTOR/mTOR(P<0.05)及p62(P<0.01)蛋白表达减少;p-AMPK/AMPK(P<0.05)和LC3II/I(P<0.05)增加;GSEA提示了LINC00467对自噬通路的抑制作用(|NES|>1,P<0.05,FDR<0.25)。结论LINC00467能促进肺腺癌细胞增殖和转移,可能是通过抑制AMPK/mTOR信号通路介导的自噬实现的。

长链非编码RNA-LINC00467调控代谢重编程对肺腺癌增殖及迁移的影响

目的:探讨敲降长链非编码RNA00467(LINC00467)调控代谢重编程对肺腺癌(LAD)增殖及迁移的影响。方法:qRT-PCR验证H1299、A549细胞和正常支气管上皮细胞(16HBE)中LINC00467的表达情况。H1299、A549细胞中使用慢病毒(shRNA)敲降LINC00467,通过平板克隆、Transwell、流式细胞术检测细胞增殖、迁移和凋亡率。使用慢病毒敲降的H1299、A549细胞验证己糖激酶2(Hexokinase2)和葡萄糖转运体1(Glucose transporter1)的表达含量。使用乳酸试剂盒和ATP试剂盒检测被慢病毒敲降LINC00467的H1299、A549细胞的乳酸含量和ATP含量。结果:LINC00467在H1299和A549细胞中的表达上调(P<0.001);在H1299和A549细胞中敲降LINC00467后能明显抑制细胞的增殖和迁移能力,并促进细胞的凋亡。Hexokinase2和Glucose transporter1在被敲降LINC00467的H1299和A549细胞中表达降低(P<0.001)。被敲降后的H1299和A549细胞的乳酸含量和ATP含量与对照组相比降低(P<0.001)。结论:敲降LINC00467可以降低LAD细胞的能量代谢水平,从而影响LAD增殖及迁移能力。