银杏叶提取物对糖尿病的药效学研究

观察了银杏叶提取物 ( EGb)对糖尿病大鼠的治疗作用。结果表明 EGb能降低正常大鼠血糖 ,但无明显的量效关系 ;使四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖下降 ,血清胰岛素升高。对糖尿病大鼠的血脂代谢有显著的改善作用 ,使 HDL升高而 TG、TC、LDL值显著降低 ( P<0 .0 1 )。EGb也能显著降低血清和组织中的脂质过氧化产物丙二醛 ( MDA)含量 ( P<0 .0 1 )。因此 EGb对糖尿病有一定的治疗作用 ,其作用可能与 EGb促进胰岛 β细胞分泌胰岛素增多 ,清除自由基 ,改善血脂代谢等有关。

间硝地平对左室肥厚大鼠左室舒张功能及心脑线粒体和血管组织钙含量的影响

用肾性高血压左室肥厚（ＬＶＨ）大鼠模型，观察了间硝地平（ｍ－Ｎｉｆ）和硝苯地平（Ｎｉｆ）长期给药（ｉｇ２０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１持续９周）对左室舒张功能、左心室肌和大脑线粒体及血管钙含量的影响。与假手术组相比，ＬＶＨ组左室顺应性明显下降，僵硬度增高，左心室肌和大脑线粒体及尾动脉和主动脉钙含量增加。与ＬＶＨ组相比，ｍ－Ｎｉｆ和Ｎｉｆ各组左室顺应性改善，僵硬度降低（Ｐ＜０．０１），左心室肌线粒体及尾动脉和主动脉钙含量较ＬＶＨ组显著降低（Ｐ＜０．０１）。两药在作用强度上无显著差异。

c-Ha-ras转基因小鼠的构建与鉴定

采用 ＰＣＲ和定点突变的方法获得 ｃ－Ｈａ－ｒａｓ突变基因，将其克隆到ｐｃＤＮＡ３载体上，得到含有 ｃ Ｈａ－ｒａｓ６１密码子突变和核苷酸 ２７１３突变的质粒 ｐｃＤＮＡ３－ｒａｓ２。对重组质粒进行瞬时表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测到强阳性条带。酶切重组质粒，回收含有ＣＭＶ启动子－目的基因－下游调控序列的４．３ｋｂ片段，然后将其显微注射到１ＣＲ小鼠受精卵中。将注射后的受精卵移入假孕母鼠的输卵管进行母体孕育。小鼠出生３周后，ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测证实有４只小鼠基因组中整合了外源ｃ－Ｈａ－ｒａｓ突变基因。上述结果表明已成功构建了 ４只 ｃ－Ｈａ－ｒａｓ转基因小鼠。

间硝苯地平对老龄肾性高血压大鼠心肌和脑微粒体Na~＋，K~＋－ATP酶，Ca~

间硝苯地平（ｍ－Ｎｉｆ，ｉｇ２０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ１持续给药９周）可显著降低老龄肾性高血压大鼠（ＲＶＨＲ）血压和左室重量（Ｐ＜０．０１），增高心、脑微粒体Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性（Ｐ＜０．０１），降低Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性，体外量效关系研究发现，ｍ－Ｎｉｆ在较高剂量（１０～１０００μｍｏｌ·Ｌ－１）时可增高ＲＶＨＲ心脑微粒体Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性，且随剂量增加而增高。上述结果表明，ｍ－Ｎｉｆ可改善老龄ＲＶＨＲ心脑微粒体Ｎａ＋，Ｋ＋泵和Ｃａ２＋泵功能。

间硝苯地平对左室肥厚大鼠左室功能的保护作用

观察间硝苯地平（m-Nif，ig20mg／kg·d^（-1），持续9w)长期治疗对老龄肾性高血压左室肥厚（LVH）大鼠左室功能的影响，与假手术大鼠相比，LVH大鼠左室顺应性和左室发展压（LVDP）显著下降，左室僵硬度常数显著增高（P＜0.01），m-Nif可显著改善老龄LVH大鼠左室顺应性，使左室僵硬度常数降低，LVDP值增加。表明m-Nif对老龄LVH大鼠左室舒缩功能具有改善作用。

重组人肿瘤坏死因子-α衍生物在小鼠体内的药代动力学和组织分布

采用放射性测量法检测了小鼠血浆和组织中人肿瘤坏死因子 α衍生物 (rhTNF B)的浓度。以Iodogen法制备12 5I rhTNF B ,将其静注小鼠后呈二房室模型处置特征 ,分布半衰期平均为 2 .81± 0 .6 2min ,消除半衰期平均为 2 5 .3± 5 .0min ,中央室分布容积为 17.8± 2 .3ml。静注后12 5I rhTNF B可很快向机体的各组织分布 ,大多数组织在 3min即达到较高浓度 ,其中以肝脏浓度最高 ,肺 ,肾 ,心 ,胃 ,脾 ,小肠 ,皮肤等组织也有较高的浓度 ;而肌注12 5I rhTNF B后大多数组织在给药 6 0min后达高峰。各组织脏器的 4h放射性累积量在iv组依次为肝 >肾 >肺 >小肠 >胃 >脾 >心 >皮肤 >肌肉 >脑 ,在im组依次为 :肾 >胃 >肝 >肺 >皮肤 >小肠 >心 >脾 >肌肉 >

培养学生创新思维的几点思考

21世纪,人类已步入一个以知识经济为特征的时代.知识经济是以先进的科学技术为第一生产力,以人才资源为主要原动力的新型经济.由此可见,知识经济依赖于科学技术的不断创新以及创新人才的大量涌现;创新是知识经济的核心.近年来,江泽民总书记曾反复强调创新的重要性,指出:"知识经济、创新意识,对我们21世纪的发展至关重要","面对世界科技飞速发展的挑战,我们必须把增强民族创新能力提到关系中华民族兴衰存亡的高度来认识,教育在培养民族创新精神和培养创新性人才方面肩负着特殊的使命".

可溶性肿瘤坏死因子受体的纯化及其性质研究

从肝癌病人尿液中提取和纯化出可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNF R)并对其生物学活性进行了检测。尿液经超滤浓缩 ,分级盐析和亲和柱层析后得到纯化的sTNF R ,经SDS PAGE显示为两条蛋白带 ,Mr 分别为 2 8× 10 4 和 5 0× 10 4 ,与国外文献报道的sTNF R1和sTNF R2 Mr 相吻合。激光扫描显示Mr2 8× 10 4 和5 0× 10 4 分别占蛋白总量的 83 44 %和 16 5 5 %。生物学研究表明 :纯化的sTNF R不仅可中和TNF和放线菌素D诱导的L92 9细胞的细胞毒性 ,并能拮抗TNF对U93

丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,以水溶性的丹参酮ⅡA纳米制剂灌胃给药 ,观测其对脑缺血大鼠的神经行为、脑梗塞范围和脑含水量以及脑组织SOD活力、MDA含量和NO水平的影响。结果 :丹参酮ⅡA(2 5mg/kg)能使脑缺血大鼠的神经行为明显改善 ,脑梗塞范围和脑含水量显著降低 ;丹参酮ⅡA亦能拮抗脑缺血再灌注引起的SOD活力的下降及MDA含量的升高 ,并使脑组织NO水平显著下降。结论 :丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用。

灵芝蛋白质的分离及其免疫活性研究

利用凝胶层析法对灵芝子实体和破壁孢子粉的蛋白初提液进行了分离,通过体外免疫反应初步检测了各蛋白质成分的免疫调节活性。小鼠脾淋巴细胞转化试验表明其中有三种灵芝蛋白体外具有较强的促进淋巴细胞增殖的活性,分别命名为LZP-1,LZP-2和LZP-3,其中来自于灵芝孢子粉的LZP-2和LZP-3用量为50μg/ml时,它们体外促进淋巴细胞的增殖率可达（41.3±3.1）％和（38.7±4.8）％,并且呈现出一定的剂量依赖效应,而来自于灵芝子实体的LZP-1促进淋巴细胞的增殖率较低（18.2±3.9％,使用剂量为50μg/ml）。SDS-PAGE测得它们的相对分子质量分别为67,000,43,000和45,700。该蛋白有可能是灵芝中具有免疫调节活性的成分之一,具有潜在的临床应用价值。

灰树花多糖的研究进展

灰树花多糖是从贝叶多孔菌的子实体或菌丝体中分离到的一种真菌多糖 ,近 2 0年的研究表明其具有显著的抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV病毒以及改善免疫系统功能等功效 ,现已被开发成多种保健品。文章综述了国内外有关灰树花多糖分离纯化以及相关生物活性的研究工作。

海胆黄多糖的分离、纯化及免疫活性测定

目的从光棘球海胆中分离纯化海胆黄多糖(polysaccharidefromtheeggsofStrongylocentrotusnu-dus,简称SEP),确定其纯度和分子量,并现察其免疫活性。方法海胆黄先经丙酮脱脂,根据正交实验和活性分析确定最佳热水提取条件,然后热水提取、去蛋白、醇沉得海胆黄粗多糖。粗多糖经超滤、DEAESepharoseFastFlow及SephacrylS-400柱层析纯化得多糖精品SEP。经高效液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳及纸层析鉴定其纯度。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定其分子量。体外脾淋巴细胞增殖实验测定其免疫活性。结果从海胆黄中分离纯化得到的均一多糖组分SEP,经检测其分子量为1950KD左右。脾淋巴细胞增殖实验表明SEP可显著促进脾淋巴细胞的增殖。结论从海胆黄中分离纯化得到的均一多糖组分SEP具有较强的体外免疫活性。

SMYD3与细胞增殖相关性及其对细胞周期的影响

目的:研究SMYD3与细胞增殖间的相关性及其对细胞周期的影响。方法:应用RT-PCR对SMYD3基因在人不同组织来源肿瘤细胞系中的表达情况进行检测。通过RT-PCR从肝癌细胞SMMC7721中扩增获得人SMYD3基因并克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选建立稳定表达细胞株。RT-PCR检测转染后SMYD3的mRNA表达水平;MTT法测定细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布。结果:SMYD3在人类主要组织来源的癌细胞系中均高度表达,重组表达载体pcDNA-SMYD3构建成功。转染NIH3T3细胞后,外源SMYD3基因获得了有效的转录与稳定表达,并且S期细胞明显减少,而G2/M期细胞增多。结论:SMYD3可以通过加快细胞周期S期进程从而提高细胞增殖速度,其高度表达与细胞增殖具有广泛的相关性。

海胆黄多糖SEP的制备及其抗肿瘤作用研究

建立荷瘤小鼠模型,以不同剂量的SEP经腹腔注射给药后检测荷瘤小鼠的肿瘤生长情况、脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖和抗氧化酶活性研究海胆黄多糖SEP的抗肿瘤活性。结果:SEP高、中、低3个剂量组均可显著抑制S180实体瘤的生长,其抑瘤率分别为46.9%、41.7%和40.7%;SEP能显著提高荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数,明显促进脾淋巴细胞的增殖,显著降低小鼠血清中丙二醛含量和提高超氧化物歧化酶活性。结论:SEP具有明显的抗肿瘤活性,其作用可能是通过免疫调节和抗氧化作用实现的。

北极微生物的分离及抗菌抗肿瘤活性筛选

采用多种培养基对北极地区(海洋沉积物、湖泊沉积物及土壤)微生物进行分离,并采用琼脂平板打孔法和MTT法进行了抗菌、抗肿瘤活性菌株的筛选。共分离极地微生物151株,筛选结果显示,12.4%的菌株有抗菌活性,6.2%菌株有抗肿瘤活性,其中3株同时具有抗菌、抗肿瘤活性,表明极地有良好的微生物药用资源。

鲨肝刺激物质类似物cDNA片段的克隆及序列分析

目的 :从鲨鱼肝脏中分离纯化肝刺激物质 ,测定N 端氨基酸残基序列 ,根据序列分析结果 ,合成简并引物 ,获得鲨鱼肝刺激物质的cDNA序列 ,并对其进行序列分析 ,比较其与已报道序列的同源性。方法与结果 :通过离子交换和凝胶过滤层析方法 ,从鲨鱼再生肝组织中分离到一种可刺激肝癌细胞株SMMC 772 1增殖活性的多肽 ,命名为鲨鱼肝刺激物质 (sHSS)。进一步通过FPLCMonoQ柱纯化后 ,纯度可达 95 %以上 ,其得率为 4 0mg/kg肝脏 ,SDS PAGE分析表明 :sHSS的分子量约为 1 6 0 0 0Da。对sHSS的氨基酸组分及N 端氨基酸序列进行了分析 ,并根据其N 端氨基酸残基序列设计了一套简并引物 ,利用RT PCR方法从再生肝组织的总RNA中扩增到一大小为 5 0 4bp的cDNA片段 ,序列分析表明其与我们分离到的天然鲨肝刺激物质有一定的差异 ,而与已报道的肝再生增强因子 (ALR)差异较大 ,而与人、鼠以及果蝇中的一种未知功能的蛋白质在氨基酸水平上的同源性较高 ,分别为 84 % ,83%和 5 7% ,这类物质可能在生物机体中发挥重要的生理功能。结论 :通过RT PCR扩增 。

海洋放线菌WBF7的鉴定及其抗肿瘤代谢产物的初步研究

目的对海洋放线菌WBF7进行菌种鉴定,并对其抗肿瘤代谢产物进行初步研究。方法通过形态学观察、培养特征和生理生化特性检测、细胞壁组分以及16S rDNA基因序列分析,鉴定菌株;将其发酵液pH调至2、7或10后100℃加热处理1h,研究活性物质的稳定性;用石油醚、乙酸乙酯及其水饱和正丁醇对其发酵液依次进行萃取,研究活性物质的极性;通过MTT法对处理后样品进行抗肿瘤活性研究。结果通过菌种鉴定,将菌株WBF7归属为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens);其抗肿瘤活性物质具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,并且易于被乙酸乙酯萃取。结论海洋放线菌WBF7是第一次从海洋中分离得到的灰略红链霉菌,其抗肿瘤代谢产物稳定性好,大部分极性中等,具有较好的开发前景。

聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系。结果 :PCR扩增反应在第 2 0～ 2 5个循环 ,起始模板量为 0 8～ 2 4 μg时 ,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系。 结论 :通过控制起始模板量 ,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术 。

海洋放线菌M326活性代谢产物的初步研究

目的对海洋放线菌M326活性代谢产物进行初步研究。方法以抑菌活性为指标，采用不同的培养基与培养时间研究代谢产物活性与培养条件的关系，用不同温度、pH处理了解活性产物的稳定性，用有机溶剂，大孔树脂对活性物质进行提取分离。结果人工海水、蒸馏水配制的GBP培养基产物活性较强。抗菌物质在pH2～11时较稳定，强酸性条件下热稳定性好，难以用一般有机溶剂萃取，碱性条件下可被AB8大孔树脂吸附。结论代谢产物对G^-菌有较强的抑菌活性，对G^-菌、耐药菌均有不同程度的抑菌活性，且抗菌物质的极性较强。

毛蚶多糖的分离纯化和免疫活性测定

目的从毛蚶体内分离纯化得到毛蚶多糖精品(polysaccharide from Arca subcrenata Lischke．简称ASLP),分析其纯度和单糖组成,同时考察免疫活性。方法经除蛋白、DEAE-52和sephadex-G50柱层析得多糖精品。糖醇乙酸酯法测定单糖组成。体外脾淋巴细胞增殖测定ASLP的免疫活性。结果从毛蚶体内提取到一种均一的多糖组分,其单糖组成只有葡萄糖,ASLP能够显著地促进脾淋巴细胞的增殖。结论从毛蚶中分离纯化得到一种均一的多糖组分,具有显著的体外免疫活性。