郴州“五化”管理保护古树名木

郴州市普查登记古树名木32235株、古树群133处,古树名木资源在湖南省居前列。依托古树名木资源,郴州市打造省级古树名木公园3个,在全国“双百”古树推选活动中,永兴寿佛樟入选全国“100株最美古树”,资兴司马垅古树群和桂阳红豆杉古树群入选全国“100个最美古树群”。

肠炎沙门菌hcp基因对生物被膜形成的影响分析

细菌生物被膜的形成主要受细菌AI-2群体感应和菌体表面黏附素调控和影响,本实验室前期研究表明肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因缺失能下调SEF14菌毛和鞭毛的表达。为研究hcp基因对肠炎沙门菌生物被膜形成能力的影响和潜在机制,本实验通过结晶紫染色法测定肠炎沙门菌两个代表株50336株和SD-2株的hcp突变缺失株及相应回补株的生物被膜形成能力,并与sefA和fliC缺失突变株的生物被膜形成能力对比显示,50336Δhcp和SD-2Δhcp与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低67%和69%。而50336ΔfliC和SD-2ΔfliC与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低49%和54%,sefA缺失对生物被膜形成无显著影响。此外,实验还通过对野生株及hcp缺失株AI-2分子活性检测显示,AI-2群体感应系统并未受到显著影响。本研究结果表明,hcp基因缺失显著影响肠炎沙门菌生物被膜的形成。

沙门菌Ⅵ型分泌系统研究进展

沙门菌病（Salmonellosis）是重要的人畜共患病，严重危害人类的健康和畜禽养殖业。该病原沙门菌属具有超过2500种已知的血清型沙门菌（Salmonella），这些血清型菌的致病性与其宿主特异性不一。细菌和宿主之间的相互作用受通信／信号相互影响，作为接触依赖型致病菌，沙门菌分泌系统影响宿主反应，其分泌装置分泌的蛋白质和毒素，是对靶细胞中产生毒性和其胞内生存的关键。

肠炎沙门菌hcp基因缺失株的体内致病性研究

将肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因缺失株CMCC(B)50336Δhcp和SD-2Δhcp分别皮下接种6周龄BALB/c小鼠和1日龄清远麻鸡,通过半数致死量(LD50)测定比较它们与野生株50336、SD-2以及相应回补株50336Δhcp/phcp和SD-2Δhcp/phcp的致病性差异。结果表明:缺失hcp基因后,肠炎沙门菌50336Δhcp和SD-2Δhcp对小鼠的LD50分别为79.43和125.89cfu,对雏鸡的LD50分别为89.13×107和158.49×107 cfu;回补hcp基因后,50336Δhcp/phcp和SD-2Δhcp/phcp对小鼠的LD50分别为50.12和19.95cfu,对雏鸡的LD50分别为56.23×107和39.81×107 cfu;而亲本株50336和SD-2对BALB/c小鼠的LD50分别为19.95和7.94cfu,对雏鸡的LD50分别为25.12×107和14.13×107 cfu。试验证明相应回补株在BALB/c小鼠和1日龄清远麻鸡的致病力及体重影响指标上与亲本株基本接近,肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因对肠炎沙门菌的致病性具有增强作用。

细菌Ⅵ型分泌系统结构与调控的研究进展

VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)具有转运效应蛋白分子到多种类型靶细胞的能力,广泛存在于革兰氏阴性菌,其结构复杂。当前T6SS结构模型表明其装置至少包含两个复合物:细胞膜跨膜相关装置和动态的噬菌体样结构。本文主要围绕T6SS分泌装置的结构、结构元件相互作用功能以及影响装置表达和活性的条件和信号来进行简要综述。

肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因的克隆、表达及多抗制备

利用PCR方法扩增2株肠炎沙门菌参考株CMCC(B)50336和SD-2 SPI-19毒力岛内的hcp基因,将其序列鉴定后克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-hcp,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组细菌高效表达;表达产物以包涵体的形式存在,变性条件下用镍亲和柱纯化得到重组蛋白,以每只50μg剂量免疫小鼠3次,间接ELISA测定抗体效价,用Western blot验证免疫血清的特异性。测序结果显示,2个参考株hcp基因的核苷酸序列与已发表序列的同源性为100%。SDS-PAGE显示20 ku重组蛋白,主要以包涵体形式存在,通过镍亲、层析和尿素变性/复性获得了可溶性的纯化蛋白;免疫小鼠第5周抗体效价达1∶8 000,且能特异性检测出SPI-19 hcp+肠炎沙门菌和鸡伤寒沙门菌中表达的Hcp蛋白。上述结果表明,制备的外源性重组蛋白具有较好的免疫原性和反应原性,为进一步研究Ⅵ型分泌系统Hcp蛋白在肠炎沙门菌中的功能提供了重要的生物素材。

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛亚单位sefA和sefD基因缺失株的致病性研究

为研究SEF14菌毛在肠炎沙门氏菌中的致病作用,本实验将SEF14菌毛亚单位编码基因缺失的肠炎沙门氏菌突变株50336△sefA和50336△sefD分别接种6周龄BALB/c小鼠和1日龄清远麻鸡,比较它们与其亲本菌株50336的致病性差异。结果显示,亲本菌株50336以及突变株50336△sefA、50336△sefD对小鼠的半数致死量分别为19.95 cfu、7.94 cfu和7.94 cfu,表明两个突变株对小鼠的致病性显著增强;而且对雏鸡的致病性结果也显示,突变株50336△sefA致病力较强,其感染雏鸡组死亡率为15%,而亲本菌株组死亡率为8.6%;另外50336△sefA和50336△sefD感染组7日龄时平均增重分别为15.38 g和18.39 g,亲本菌株组为19.06 g,对照组为26.43 g。研究结果表明SEF14菌毛亚单位基因缺失对肠炎沙门氏菌的致病性具有增强作用。

抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的研制

将含有牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该3D8株单抗能识别BVDV1标准毒株(NADL、OregonC24V)、BVDV2标准毒株(890、104)、2株BVDV1分离株和3株BVDV2分离株,而不能识别牛轮状病毒、牛疱疹病毒1型,显示出良好的特异性。阳性杂交瘤细胞的上清液、腹水ELISA抗体效价分别为29和10×27,为IgM亚类。其单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得,为建立单抗介导的检测BVDV1和BVDV2抗原和抗体的血清学方法和实现标准化诊断奠定基础。

肠炎沙门菌间接ELISA检测方法的建立

本试验建立和优化了重组蛋白rSEFA介导的间接ELISA方法以特异性检测肠炎沙门菌感染血清。确定其抗原最佳包被量为7.5μg/mL,血清最适稀释度1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗最适稀释度为1∶4 000,作用时间为60 min;判定标准为OD值≥0.346。基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,能特异性识别肠炎沙门菌和都柏林沙门菌感染血清,不能识别相近的鸡白痢沙门菌感染血清,此方法与菌体凝集反应同时检测临床血清样品100份,二者阳性率分别为67%和54%,结果符合率为80.6%。这一方法的建立对肠炎沙门菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。

猪胸膜肺炎放线杆菌致病性生物Ⅰ型PCR诊断方法的建立

根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）apxⅣ毒素基因序列的保守区域设计1对特异性引物，建立检测致病性APP1～12血清型标准菌株的PCR方法。在双盲试验中，血清1型（2株）、3型、5型和7型临床分离株与致病性APP1～12血清型标准菌株一样，均能扩增出预期大小为876bp的apxⅣ片段，可检出最低活菌数为2×10^2cfu·mL^-1，最低检出DNA含量为9pg·μL。检测疑似传染性胸膜肺炎感染猪的10份病变肺组织样品，阳性6份，与细菌分离鉴定结果一致。而副猪嗜血杆菌1～15型（缺失8型）、猪放线杆菌、猪源多杀性巴氏杆菌、猪霍乱沙门氏菌、奇异变形杆菌、猪源支气管败血波氏菌、猪丹毒杆菌的PCR检测结果都为阴性。结果表明：该PCR方法可用于致病性APP生物Ⅰ型的快速特异性检测和诊断。

生源竞争与高校招生宣传工作原则及策略研究

社会对高等教育期望值的提高、高等教育格局的悄然改变、高等教育规模的稳步扩大,必然会引起激烈的生源竞争。生源质量直接关系着学校的生存、前途和命运。加强招生宣传工作已为许多高校所重视。只有遵循若干原则和规则,合理运用各种策略,招生宣传工作才能有序有效。

抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用

据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体（McAb）。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以（NH4）2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素（rApxⅣ）的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。

北京鸭淋巴结中淋巴窦的超微结构

采用透射电镜对6周龄健康北京鸭淋巴结中淋巴窦超微结构进行了研究,结果显示：被膜下淋巴窦窦壁由单层扁平淋巴内皮细胞及突起所组成,相邻细胞突起间呈重叠状并出现紧密连接。索间淋巴窦窦壁除呈现上皮性紧密连接外,还存在15～24 nm细胞间隙。淋巴窦内可见如下细胞：淋巴细胞（以小型为主,中型淋巴细胞较少）、浆细胞（包括浆母细胞和幼浆细胞）、网状细胞、巨噬细胞、有粒白细胞（包括嗜酸性白细胞和异嗜性白细胞）、红细胞（包括早幼红细胞、中幼红细胞及成熟红细胞,可见细胞分裂中期、染色体形成期的中幼红细胞,说明北京鸭红细胞在淋巴窦内存在成熟过程）、类分泌细胞（该细胞具有特殊颗粒,颗粒内有细小微粒,被界膜包裹,或颗粒内小管,有的小管呈现同心圆式排列;在淋巴窦和淋巴索内均有该细胞）。

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究

为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中以TSB肉汤25℃震荡培养24 h后转接20℃继续震荡培养24 h,最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6.0)于37℃静置培养50 h^60 h的SEF14菌毛表达量最高。RT-PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefA mRNA表达水平最高,在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS-PAGE结果显示,所抽提的菌毛蛋白大小为14.3 ku,与相关报道一致,而且等量菌泥的抽提量最大。

人的全面发展理论视野下农科类大学生创业教育思考

本文从人的全面发展理论入手,通过探讨农科类大学生创业教育的现状、面临的问题,就如何发展农科类大学生创业教育,以人的全面发展理论为基点,结合农科类大学生的实际对创业教育提出意见,以进一步提高农科类大学生创业教育水平,鼓励农科类大学生进行创业,从而提升大学生创业就业质量和层次。

“三抓”换新颜——记湖南省郴州市西山国有林场场长李党仁

西山国有林场曾经一度处于停摆状态,李党仁场长上任后推行“三抓”,林场旧貌换新颜,先后荣获中国林场协会“十佳林场”、湖南省“十佳林场”和“秀美林场”称号,李党仁也于2022年荣获全国森林防火工作先进个人称号。抓管理改革促队伍稳定2012年7月,李党仁任西山国有林场副场长,后任场长。

女大学生职业选择困境分析与对策探讨

经济新常态下,产业结构升级调整,就业岗位供求矛盾仍未缓解,高校毕业生就业形势依然严峻,女大学生就业问题更为突出。本文从分析女性的就业现状特点出发,对造成女性就业困境的因素进行了分析,并就解决当前女大学生就业难的对策进行了探讨。

生物工程(制药类)专业大学生生产见习模式的构建与实践

生产见习是高等学校工科专业人才培养计划的重要实践环节,是理论与实践相结合的有效方式。结合扬州大学生物工程专业生产见习实际情况,分析了生物工程(制药类)专业大学生生产见习的必要性和面临的困难,以及生产见习模式的构建与实践管理过程,以期为生物工程及其相关专业的见习活动提供参考。

高校增强学生党员教育实效性的几点思考

当前的形势时高校学生党员教育提出了新的挑战,需要我们采取加强基层党支部建设,选择有针对性和时代性的内容,发挥学生党员的主观能动性,以先进性教育为抓手等必要的措施,来增强大学生党员教育的实效性。在开展教育过程中,要坚持理论与实际相结合,坚持教育与自我教育相结合,坚持教育、管理、监督相结合,坚持继承与创新相统一等原则。

健全基层动物防疫网 推动生猪产业发展

养猪业是我国畜牧业的重要组成部分，近年来随着全国养猪业的发展，扎赉特旗的养猪业也取得了长足的发展，笔者走进内蒙古兴安盟扎赉特旗的生猪养殖专业乡，这里的养猪形势十分喜人，发展政策、发展潜力、发展目标十分宏伟，到2007年底，全旗生猪饲养量将达200万头，畜牧业生产安全最关键的防疫体系建设问题亟待完善。下面，就调查情况进行简要的分析，并提出几点建议。