鱼胶品种的DNA条形码鉴定方法研究

目的建立鱼胶种属鉴别的DNA条形码方法。方法使用不同试剂盒对鱼胶核酸提取效果进行评价和优化,筛选出适用于鱼胶的核酸提取方法,选取3对引物进行扩增对比,建立鱼胶种属鉴别的DNA条形码方法。基于建立的方法,对44份鱼胶样品进行特异性扩增,并根据生命条形码系统(barcode of life data system,BOLD)进行物种鉴定,同时进行系统进化分析。结果对44份鱼胶样品的鉴定结果显示,样品分属8科,11属,15种,石首鱼科(15个)和尖吻鲈科(20个)占比79.5%。系统发育分析表明,同物种的不同个体都聚在了一起,同属以及同科不同属的物种也聚在一支,界限分明。序列比对和系统发育分析较一致确认鱼胶所属的鱼类种类。结论建立的方法能高效、准确地对鱼胶进行种属鉴定,研究结果可有效预防和降低鱼胶产品交易中的欺诈行为,也为促进我国鱼胶产品的高质量发展和进出口贸易的稳定发展提供有利的技术支持。

高效液相色谱-串联质谱测定饮料基质中10种卡西酮类新精神活性物质

建立高效液相色谱-串联质谱法测定饮料基质中多种卡西酮类新精神活性物质的含量。样品中10种卡西酮类新精神活性物质采用乙腈提取,样品提取液经QuEChERS方法净化后,采用Shim-pack XR-ODS(100 mm×2.0 mm,3μm)色谱柱分离,以2 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子模式多反应监测,外标法定量。10种卡西酮类新精神活性物质的质量分数在0~500μg/kg范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数大于0.999,方法检出限为0.1~2μg/kg。样品在50、100、200μg/kg三个添加水平浓度下的平均回收率为77.9%~94.1%,测定结果的相对标准偏差为3.3%~11.5%(n=5)。该方法准确、简便、灵敏度高,可满足多种饮料基质中多种卡西酮类新精神物质的含量测定。

L-肉碱对水产动物生长免疫与水体生态环境的影响

在水产动物饲料中添加适量的L-肉碱,可以促进生长发育,改善身体组分;还能提高饵料中蛋白的利用率,增加氮的沉积,减少氨氮的排放,改善水体生态环境;同时对提高机体的免疫功能和抗应激能力也有促进作用。

ArA,EPA和DHA在水生动物中应用的研究进展

ArA,EPA和DHA是水生动物卵巢中卵磷脂、精子中的磷脂酰乙醇胺以及卵母细胞等的主要组成成分,能够影响产卵率、受精率、卵径大小、卵黄囊的体积、孵化率及存活率等,这三种必需脂肪酸在细胞结构、物质代谢和能量调节等方面具有重要作用,能够维持细胞通透性,增强消化酶活性,从而促进水生动物的生长;还能够影响细胞吞噬能力及呼吸爆发强度,并可以通过控制与免疫相关的酶活性以及类二十烷的产生而增强水生动物机体的免疫能力;其中的ArA可以通过调节皮质醇以及其他未知途径调节水生动物抵抗各种应激的能力。对这三种高度不饱和脂肪酸对水生动物生长、繁殖、免疫功能的影响和抗应激能力以及三者之间的关系作了综述并提出了问题和展望,以期对水产养殖提供理论参考。

精炼食用植物油中DNA高效提取方法研究

针对精炼食用植物油中DNA含量低且破坏严重的问题，以CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法为基础进行DNA提取方法的优化，建立了可以从精炼食用植物油中有效提取DNA的方法。通过与标准方法SN／T1203-2010相比较，该方法可有效检测出内源基因tRNA Leu，但对标示有转基因成分的精炼食用植物油却无法检测到外源基因CaMV 35S，推测其原因可能为目的基因片段不够稳定，在食用植物油加工过程中被破坏，导致无法检出，在后续研究中需设计更加稳定的目的基因片段。

真空包装低温熟制鸽子货架期预测模型的建立

目的 研究低温熟鸽货架期模型,降低生产成本,验证Gompertz方程在该类肉制品中预测的可行性。方法 对真空包装低温熟制鸽子在不同温度条件下贮藏的菌落总数、大肠菌群、总挥发性盐基氮及感官品质变化进行评价。利用熟制鸽子菌落总数指标,通过Gompertz方程和平方根方程进行拟合,建立低温熟鸽货架期模型。结果 贮藏在4、10、15、20、25℃样品的菌数总数、总挥发性盐基氮均随着贮藏天数增加有不同程度的增加,在10~25℃条件下,贮藏后期菌落总数变化趋势高于贮藏初期;与4℃和10℃的样品相比,其他3组温度下的感官变化更加明显。此外,所有样品的总大肠菌群平板计数均小于10CFU/g,且不同贮藏温度下无差异。因此,选择菌落总数作为建立货架期模型的指标。结论 该模型的预测数值与实践测定值的相对误差在±10%范围内,表明该模型可靠。

重组酶介导等温扩增法检测食品中铜绿假单胞菌

目的建立重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)法快速、灵敏、特异检测食品中铜绿假单胞菌的分析方法。方法针对铜绿假单胞菌lasB基因的特异性保守区域,设计RAA特异性引物和exo探针,筛选出最优组合;对提取的目标基因组DNA进行检测,确定方法的特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,比对不同检测方法对食品样品的检出限。结果建立的铜绿假单胞菌lasB基因RAA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有扩增曲线,对其他致病菌无交叉反应;方法对纯菌液的灵敏度为1.7 pg/μL。人工污染实验表明,方法对肉类样品中铜绿假单胞菌的检出限与传统方法一致,达1.0×103CFU/mL;RAA方法检测时间仅需20min。结论本研究建立的铜绿假单胞菌实时荧光RAA检测方法特异性强、灵敏度高、反应时间短,可用于食品中铜绿假单胞菌的快速检测。

冰鲜鸽加工过程中微生物关键控制点研究

[目的]在冰鲜鸽加工过程中,控制微生物污染以提高冰鲜鸽的加工品质。[方法]对冰鲜鸽加工企业生产过程中的微生物污染情况进行普查,分别对车间空气、接触面、工人手、刀具、预冷水及加工过程中的鸽胴体进行取样,运用传统微生物培养方法培养和计数,找出冰鲜鸽加工过程中的潜在污染源及关键控制点。[结果]冰鲜鸽加工过程中微生物控制的关键点主要有车间空气(开膛间、风冷间)、包装间接触面、工人手及预冷工艺过程。[结论]根据试验结果制定相应的控制措施,即加强生产过程中的卫生控制,制定实施严格的卫生标准操作程序,同时优化预冷过程减菌工艺、设备,以有效控制冰鲜鸽初始微生物污染水平。

贝类中GII型诺如病毒的微滴式数字PCR定量检测方法

采用微滴数字PCR(ddPCR)技术,建立RT-ddPCR快速定量检测GⅡ型诺如病毒的方法。反应条件的退火温度为55℃,反应体系引物探针浓度分别为1、 0.25μM。建立的GⅡ型诺如病毒RT-ddPCR方法的特异性和稳定性好;在单位体积内拷贝数20~60 000区间内呈现良好的线性关系, R2=0.997。本方法可以对单位体积拷贝数为20的样品进行稳定的定量检测,对单位体积拷贝数为6.6的样品进行稳定检测。精密度结果表明, 4组浓度的样品所得到的组内RSD值为2.86%~23.59%之间,均<25%;对23个贝类样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致。本研究建立的GⅡ型诺如病毒的RT-ddPCR定量检测方法可用于贝类样品诺如病毒的快速定量检测。

冰鲜鸽肉贮藏过程中的微生物菌群多样性

采用Ion Torrent PGM高通量测序技术,从分子水平上对冰鲜鸽肉贮藏过程中的细菌在4℃与37℃2种增菌温度下的细菌群落结构、丰度及演替规律进行深入研究。结果表明:在整个贮藏过程中,4℃与37℃增菌处理的结果表明:在门水平上,冰鲜鸽肉中的微生物菌群均以变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门为优势菌门,其中变形菌门占比达78%;在科水平上,4℃增菌条件下,假单胞菌科、莫拉氏菌科、假诺卡氏科及肠杆菌科为优势菌科,37℃增菌条件下,气单胞菌科、动球菌科、肠杆菌科及假单胞菌科为优势菌科,占比最多的为假单胞菌科。2种增菌温度下细菌群落的多样性及菌群结构变化反映了冰鲜鸽肉潜在的安全风险,可用于冰鲜鸽肉冷藏过程或贮藏过程中温度失控情况下的质量管理。

LAMP实时浊度法快速检测食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌

针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC的LAMP实时浊度法快速检测方法。LAMP反应在实时浊度仪63℃恒温下1 h可完成。对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并在实际样品检测中进行应用。经优化该方法的检测灵敏度可达150拷贝/反应,4株STEC菌株LAMP扩增结果与其基因型一致,其他21株非STEC菌株均未出现非特异性扩增。395份食品样品检出STEC阳性68份(阳性率为17.2%),所检食品类别中畜产品阳性率最高(达31.3%),禽产品、水产品和可生食蔬菜均有少量阳性样品检出,阳性样品中以stx2基因阳性型为主。结果表明,LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便的优势,适用于食品中STEC的快速筛查。

食品中大肠埃希氏菌O121荧光PCR检测方法的研究

针对大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)O121的O抗原基因簇的vio A基因的特异性序列设计引物和探针,通过对荧光聚合酶链式反应(real-time PCR)扩增条件的优化,建立检测E.coli O121的血清型特异性荧光PCR方法。E.coli O121标准菌株呈现扩增曲线,其它22株非O121 E.coli和19株非E.coli细菌的菌株均无扩增,检测的灵敏度可达155拷贝/反应。339份食品样品用EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出E.coli O121阳性9份,阳性率为2.7%,其中市场上采购获得的生猪肉和生牛肉阳性率达4.1%。上述试验结果表明,本方法特异性强、操作简便,食品中E.coli O121检测全过程可在1.5 d内完成,适用于食品中E.coli O121的快速检测。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在乳品微生物中的应用进展

微生物污染贯穿乳品工业的各个环节,对经济发展和人类健康构成威胁。对微生物的有效控制是乳品质量与安全重点关注的问题,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在乳品安全监管工作中,具有快速、准确、稳定、灵敏以及成本低等特点,因而受到广泛的关注与应用。深入了解MALDITOF MS技术在乳品微生物中的应用途径与策略,可以有效提升乳品安全监管质量与效率。本综述旨在讨论MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的实际应用,对MALDI-TOF MS技术在乳品微生物中的发展趋势和应用前景进行分析和探究,为应用MALDI-TOF MS技术深入研究乳品微生物相关问题提供了理论依据。

基于新国标的两种微生物法测定乳粉中叶酸的比对研究

[目的]对即将实施的《GB5009.211—2022食品安全国家标准食品中叶酸的测定》中两种微生物法测定乳粉中叶酸进行比对研究。[方法]验证试管法和微孔板法测定叶酸的准确度和重复性,根据数据的差异与试验操作过程对两种方法进行比较分析。[结果]由准确性试验可知,两种方法所测结果均与标准物质真值相符,相对标准偏差(RSD)分别为2.7%和2.9%,无明显差异。由重复性试验结果可知试管法RSD值为1.3%~3.1%,微孔板RSD值为1.6%~2.9%。[结论]新国标的两种微生物法的准确性和重复性都较好,均能对乳粉中叶酸进行有效测定;微孔板法效率更高,成本更低,适用于大批量样品的检测需求。

超高效液相色谱-串联质谱法检测中草药中赭曲霉毒素A

本研究通过优化液相色谱条件和质谱条件,并结合碳酸氢钠溶液提取稀释的方法法有效克服了基质效应的干扰,建立了中草药中赭曲霉毒素A的超高效液相色谱-串联质谱法快速检方法。试样经碳酸氢钠溶液提取,超声波提取,再经过免疫亲和柱净化后,用C18液相色谱柱分离,多级反应选择离子正离子模式检测。经方法学验证,赭曲霉毒素A质量浓度在0.1-50.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,r〉0.99;样品在1.0、2.0和10.0μg/kg三个添加水平下的回收率为78.5%-98.0%;相对标准偏差为2.6%-11.8%;方法检出限为1.0μg/kg。将该方法应用于实际8批样品的检测,结果显示8批样品中检出1批的赭曲霉毒素A检测结果呈阳性（7.3μg/kg）。实际样品检测结果表明,本方法可实现中草药中赭曲霉毒素A灵敏、准确的定性定量分析。

食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR检测方法研究

利用沙门氏菌fim Y基因设计特异性引物、探针,优化叠氮溴化丙锭(propidium azide bromide,PMA)染料浓度及相关反应条件,使用高亮度蓝色发光二极管(Light Emitting Diode,LED)光解仪代替卤素光源,建立了食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR快速检测方法。实验表明,设计的引物、探针特异性强,能特异性扩增7株沙门氏菌,其他非沙门氏菌均无扩增,对沙门氏菌纯培养物检测灵敏度可达102 CFU/m L。经反应条件优化后,在PMA浓度为20μmol/L,暗反应5 min,曝光反应10 min条件下,对106 CFU/m L的沙门氏菌热致死菌抑制效果最好,活菌的扩增不受影响。利用优化的PMA处理方法结合Taq Man实时荧光PCR和不经PMA处理的Taq Man实时荧光PCR,分别检测3种不同浓度(5 CFU/25 g、50 CFU/25 g、500 CFU/25 g)活菌和高浓度死菌(106 CFU/25 g)的沙门氏菌人工混合污染样品,以及仅高浓度沙门氏菌死菌污染的人工污染样品。结果显示,2种方法检测沙门氏菌活菌和沙门氏菌死菌的人工混合污染样品的结果均为阳性,只添加沙门氏菌死菌的人工污染样品PMA处理组扩增结果为阴性、不经PMA处理对照组为阳性,表明优化后的PMA处理方法排除了沙门氏菌死菌对Taq Man实时荧光PCR假阳性的影响,并可以有效检出食品样品中的沙门氏菌活菌。食品样品增菌后的沙门氏菌活菌检测过程只需4~5 h,本研究为食品中沙门氏菌活菌的快速检测提供了一种科学有效的方法。

基于双重微滴式数字PCR对转基因油菜RF1品系的定量方法

基于微滴式数字PCR平台,建立了一种在同一个微滴反应体系中同时检测油菜样品中两种靶标序列的双重微滴式数字PCR(duplex-ddPCR)定量分析方法。试验结果表明,内参基因和品系特异性基因均能特异性扩增出来,所建立的RF1品系duplex-ddPCR方法特异性好。在单位体系内参和外源基因拷贝数位于18~23077的区间内可以呈现出良好的线性,r2=0.999。经验证,本方法的定量检测限(LOQ)和最低检测限(LOD)分别为18拷贝/反应和3.7拷贝/反应。精密度试验结果表明两组浓度的DNA样品所得到的平行试验结果的标准偏差(relative standard deviations,RSD)介于8.40%~24.50%,准确度试验结果显示标准偏差RSD值介于5.97%~12.64%,均达到了对方法精密度RSD和准确度RSD小于25%的要求。综上所述,本研究所建立的duplex-ddPCR定量分析方法可用于转基因油菜RF1的定量检测。

Taqman探针荧光PCR法检测食品中的大肠埃希氏菌O145

针对大肠埃希氏菌O145的O抗原基因簇的wck D基因的特异性序列设计引物和Taqman探针,建立检测大肠埃希氏菌O145的荧光PCR方法,对其灵敏度、特异性进行验证,并将其用于食品样品的检测。结果表明,本研究中的方法可实现对大肠埃希氏菌O145的特异性扩增,其它27株非O145大肠埃希氏菌和20株非大肠埃希氏菌细菌的菌株均无扩增;检测的灵敏度可达165拷贝/反应;339份食品样品EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出大肠埃希氏菌O145阳性31份,阳性率为9.1%。实验结果表明,本研究成功建立了可用于食品中大肠埃希氏菌O145的Taqman探针荧光PCR方法,食品样品采用EC肉汤增菌24 h、热裂解法提取核酸,增菌后检测所需时间由至少3 d^7 d缩短为仅需2 h^3 h,食品检测全过程仅需约28 h,经证实本方法特异性强、操作简便,为食品中大肠埃希氏菌O145提供了一种的快速检测手段。

沙门氏菌活菌实时PCR检测方法研究

建立一种叠氮溴化乙锭结合荧光PCR(Ethidium monoazide bromide real-time PCR,EMA-RT-PCR)快速检测沙门氏菌活菌的技术。以沙门氏菌f imY基因为靶点设计特异性引物,通过菌液浓度及叠氮溴化乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)相关反应条件的优化,建立沙门氏菌活菌的EMA-RT-PCR方法。经反应条件优化后,当EMA浓度为2.5μg/mL,暗反应5 min,曝光反应10 min条件下对10^(6)CFU/mL的沙门氏菌抑制效果最好,活菌的扩增没有影响,死菌的扩增受到抑制,所构建的沙门氏菌EMA-RT-PCR方法的检测灵敏度为2.5×10^(2)CFU/mL。用该方法检测8批次受沙门氏菌人工污染的阳性样品,结果显示该方法均能正常检出带活菌的样本,检测时间为4~5 h,比传统检测时间大大缩短。EMA-RT-PCR方法能准确区分活死菌,适合作为沙门氏菌的快速初筛方式。

基于高通量测序分析进口大麦真菌多样性

文章介绍了高通量测序技术在食品安全及植物病害真菌检疫中的应用。利用Illumina-Hiseq测序技术,对进口和国产大麦的真菌多样性进行了研究。从澳大利亚、法国、加拿大和国产大麦样品中共获得331054个ITS序列,系统分类学分析将其归类为6门、25纲、50目、80科、115属、158种,表明样品的真菌多样性较高。进口大麦和国产大麦的优势真菌均以子囊菌门Ascomycota和担子菌门Basidiomycota为主,两者之和占到全部真菌的97.46%~99.97%;优势菌属为李维菌属Lewia、隐球菌属Cryptococcus、Udeniomyces菌属、埃里格孢属Embellisia、锁掷酵母属Sporidiobolus、赤霉属Gibberella、蜡蚧菌属Lecanicillium、链格孢属Alternaria、红酵母属Rhodotorula、曲霉属Aspergillus、格孢腔菌属Pleospora等。韦恩图分析结果显示法国、加拿大、澳大利亚和中国的大麦真菌群落种类差异较大,每个产地的大麦真菌群落有各自的特性真菌。文章利用高通量测序建立了进口和国产大麦真菌多样性生物信息学数据库,不仅能够指导以大麦为原料的食品工业的安全生产、产品质量保障,也为进出口大麦的生物安全监测预警、风险防范及管控提供了科学的数据支持。