木犀草素对对乙酰氨基酚诱导肝损伤的保护作用

【目的】基于内质网应激(ERS)和氧化应激途径,探讨木犀草素(luteolin)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝损伤的保护效果及其潜在的作用机制。【方法】将48只昆明小白鼠随机分为6组,分别为正常对照组(NC)、木犀草素对照组(MD)、APAP肝损伤模型组(APAP)以及木犀草素低、中、高剂量组(ML、MM、MH),每组8只小鼠,NC和MD组腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠按300 mg/kg的剂量腹腔注射APAP注射液,每天2次,连续注射4 d,给药4 d后NC组和APAP组灌胃生理盐水,MD、ML、MM、MH小鼠分别按照100,25,50,100 mg/kg的剂量灌胃木犀草素药液,每天2次,连续灌胃3 d,最后一次灌胃12 h后,分别检测小鼠血液中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性以及肝脏中的氧化应激指标(超氧化物歧化酶(SOD)活性及过氧化氢(H 2O 2)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量),在显微镜下观察各组小鼠肝组织的病理变化,并采用探针药物法测定肝脏微粒体细胞色素P4502E1酶(CYP2E1)活性,采用qRT-PCR检测CYP2E1 mRNA表达水平,用Western Blot检测肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、增强子CCAAT结合蛋白同源蛋白(CHOP)、CYP2E1蛋白表达水平。【结果】与NC组相比,APAP模型组的ALT和AST活性极显著升高,MD组上述2种酶活性无显著变化。与APAP模型组相比,MM、MH组ALT和AST活性显著或极显著下降。与APAP模型组相比,ML、MM、MH组的GSH含量和SOD活性均明显增加,MDA和H 2O 2含量均明显降低。小鼠肝组织病理形态显微观察结果表明,MM、MH组可以改善APAP导致的肝索消失以及肝细胞排列散乱和细胞核溶解等病理症状。探针药物法测定结果显示,0.1,0.01和0.001 mg/mL的木犀草素可以显著降低CYP2E1活性。qRT-PCR和Western Blot结果显示,木犀草素可以显著或极显著降低CYP2E1基因及其蛋白的表达水平,极显著降低GRP78和CHOP蛋白表达水平。【结论】木犀草素具有明显的抗APAP诱导的肝损伤作用,其作用机理可能是通过抑制CYP2E1的表达、减轻氧化应激和内质网应激水平,从而减轻APAP诱导的肝损伤。

孕马血清促性腺激素对小鼠肝脏组织CYP17A1和PXR表达的影响

旨在了解孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)对小鼠肝脏细胞色素P45017A1(cytochrome P45017A1,CYP17A1)和孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达的影响。将48只雌性昆明系小鼠随机分为PMSG处理组和对照组,PMSG组小鼠腹腔注射PMSG 10 IU,注射后12、24、48 h处死12只小鼠,采血分离血清并采集肝脏组织样本;对照组腹腔注射等体积生理盐水,在注射后12、24、48 h时采集4只小鼠的血液和肝脏组织样本。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清PMSG含量,苏木精-伊红染色(HE)观察PMSG对肝脏组织的影响,RT-qPCR和Western blot检测肝脏组织CYP17A1和PXR表达水平,免疫组织化学染色检测CYP17A1和PXR在肝脏组织中的定位。结果显示,PMSG注射后12 h小鼠血清中PMSG含量显著升高(P<0.05),24 h和48 h时逐渐降低,但仍显著高于NC组(P<0.05);PMSG注射后12、24、48 h时,肝脏细胞水泡变性明显;注射PMSG后肝脏组织中CYP17A1和PXR基因和蛋白表达均显著下调(P<0.05);CYP17A1和PXR主要定位于肝索肝实质细胞质中。研究结果证明,PMSG能够显著抑制肝脏CYP17A1和PXR表达。

基于网络药理学研究连翘叶提取物通过AMPK抗恩诺沙星诱导肝损伤的作用

【目的】运用网络药理学并通过体内试验研究连翘叶提取物(Forsythia suspense leaves extract,FSLE)治疗恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)诱导的肝损伤(enrofloxacin induced liver injury,EILI)的作用机制。【方法】采用乙醇-酶法提取连翘叶有效成分,通过液相-质谱法(LC-MS)鉴定FSLE主要的化学成分。利用PubChem、Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库分析预测FSLE有效活性成分及作用靶点,通过GeneCards疾病数据库搜索EILI的作用靶点。运用STRING在线网站及Cytoscape 3.8.0软件构建FSLE治疗EILI的核心靶点,借助Metascape网站进行GO功能及KEGG通路富集分析,并用Cytoscape 3.8.0软件绘制“成分-靶点-信号通路”可视化网络。通过体内试验验证FSLE抗EILI的药理作用,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测不同处理组腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的表达,通过商业化试剂盒检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。【结果】结合LC-MS与各数据库分析得出FSLE活性成分有20种,对应靶点338个;EILI疾病靶点913个;药物-疾病交集靶点124个,包含FSLE治疗EILI核心靶点12个,KEGG通路20条,其中AMPK通路与FSLE治疗EILI密切相关。动物试验结果显示,FSLE可显著降低EILI小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transferase,AST)活力(P<0.05)。FSLE可显著升高小鼠肝脏AMPK的基因和蛋白表达量水平(P<0.05)。与正常对照组相比,FSLE可显著降低小鼠肝脏组织中MDA和H_(2)O_(2)含量(P<0.05),显著升高GSH含量和SOD活力(P<0.05),抑制EILI诱导的肝脏氧化应激。【结论】FSLE可通过上调AMPK的表达抑制肝脏氧化应激发挥抗EILI的作用,对肝损伤药物的开发具有重要的意义。