急性早幼粒细胞白血病诱导治疗阶段不同辅助治疗方案的疗效比较

目的比较急性早幼粒细胞白血病(APL)诱导治疗阶段不同辅助治疗方案的疗效。方法回顾性分析44例APL初治患者的临床资料,将患者分为高危组15例及中低危组29例,均接受全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(ATO)双诱导治疗,再根据诱导治疗过程中采用的辅助治疗方案将每组分为单加蒽环类药物(柔红霉素)组和蒽环类药物与阿糖胞苷联用组(DA组)。观察各组患者完全缓解(CR)率、早期死亡情况、化疗结束时PLT及凝血功能的好转情况以及诱导期间不良反应的发生情况。结果 44名初治APL患者均无早期死亡。低中危组和高危组中,单加蒽环类药物组与DA组的CR率、外周血PLT水平回升率、凝血功能好转率、WBC峰值、分化综合征发生率、感染率、肝功异常率以及凝血象恶化率,比较差异均无统计学意义(均P>0.05),但单加蒽环类药物组达CR所需时间明显短于DA组(P<0.05)。低中危组中,单用蒽环类药物组3~4级骨髓抑制率低于DA组(P<0.05)。结论在ATRA和ATO双诱导治疗的基础上,单用蒽环类药物进行辅助治疗较DA方案可获得更好的疗效,且可以降低低中危患者的3~4级骨髓抑制率。

拉帕替尼抑制HL60细胞增殖和促进细胞凋亡的机制

目的探讨拉帕替尼对急性髓细胞白血病HL60细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制。方法用(5、10、15)μmol/L的拉帕替尼处理HL60细胞24 h,光学显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记法结合流式细胞术检测细胞凋亡,Wright改良染色(LIU染色)和Hoechst33342荧光染色观察细胞核形态;Western blot法检测Bax、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)、蛋白磷酸酶2A细胞增殖调节抑制因子(CIP2A)、c-MYC、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白水平。结果与对照组相比,拉帕替尼能以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞产生核碎裂、染色质凝聚。下调Bcl2蛋白的表达,上调Bax、c-caspase-3、c-caspase-9和c-PARP蛋白水平,下调CIP2A、p-AKT和c-MYC蛋白水平。结论拉帕替尼能够抑制HL60细胞增殖并促进细胞凋亡,这一作用可能与下调CIP2A/AKT/c-MYC信号通路有关。

低中危组急性早幼粒细胞白血病患者双诱导治疗后加入细胞毒性药物时机的早期临床分析研究

目的比较低中危组急性早幼粒细胞白血病(APL)患者进行双诱导治疗后,在不同外周血白细胞计数(WBC)时予以细胞毒性药物的疗效和不良反应。方法选取2011年3月—2017年4月重庆医科大学附属第一医院收治的初诊APL患者36例,对其进行全反式维甲酸(ATRA)+三氧化二砷(ATO)双诱导治疗。根据加入细胞毒性药物时外周血WBC,以不同的标准对患者进行分组:(1)(10~20)×10~9/L组和>20×10~9/L组;(2)(10~25)×10~9/L组和>25×10~9/L组;(3)(10~30)×10~9/L组和>30×10~9/L组。分析各组患者完全缓解(CR)率、达CR所需时间、凝血功能异常持续时间,以及诱导期间的不良反应发生情况。结果 36例患者诱导期间无一例死亡。(10~20)×10~9/L组达CR所需时间短于>20×10~9/L组(P<0.05);(10~20)×10~9/L组和>20×10~9/L组CR率、凝血功能异常持续时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(10~25)×10~9/L组和>25×10~9/L组、(10~30)×10~9/L组和>30×10~9/L组CR率、达CR所需时间、凝血功能异常持续时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(10~20)×10~9/L组、(10~25)×10~9/L组、(10~30)×10~9/L组平均WBC峰值分别低于>20×10~9/L组、>25×10~9/L组、>30×10~9/L组(P<0.05);(10~20)×10~9/L组和>20×10~9/L组、(10~25)×10~9/L组和>25×10~9/L组、(10~30)×10~9/L组和>30×10~9/L组分化综合征(DS)发生率、感染发生率、肝功异常率、3~4级骨髓抑制发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论低中危组APL患者进行ATRA-ATO双诱导治疗后,外周血WBC在(10~20)×10~9/L时加用细胞毒性药物可获得相对较佳的早期疗效。

Sysmex XN-9000血液分析流水线复检规则的建立与评价

目的 建立适合实验室的Sysmex XN-9000血液分析流水线复检规则,保证实验结果的准确性。方法 收集2019年5月6-31日该院住院、门诊及体检全血标本18 863份,其中6-10日4 400份,11-31日14 463份。对触犯复检规则的标本进行复检。结果 4 400份标本复检的灵敏度为100.00%,特异度为96.78%,阳性预期值为57.10%,阴性预期值为100.00%,总有效率为96.91%。根据复检规则要求,对4 400份标本中617例标本进行了人工复检,其中真阳性295例,假阳性22例,真阴性297例,假阴性3例,阳性预期值为93.10%,阴性预期值为99.00%,假阴性率为1.00%。每天抽查60例未触犯复检规则的阴性标本涂片镜检,5d共抽查300例,出现3例假阴性。14 463份标本复检的灵敏度为100.00%,特异度为95.81%,阳性预期值为56.24%,阴性预期值为100.00%,总有效率为96.02%。结论 在保证假阴性率小于5%时,特别是白血病不漏检的前提条件下,该实验室设置的Sysmex XN-9000血液分析流水线复检规则有效降低了复检率,减轻了工作量,具有明显优势。

EGCG通过PTEN增强ATRA对早幼粒白血病细胞株的分化作用

探讨PTEN在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）增强维甲酸（ATRA）诱导的急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化中的作用。我们分别将ATRA、EGCG及两种药物联合应用于NB4与HL-60细胞72 h,从形态学上观察细胞核的变化;Western blotting检测PTEN及髓系分化标志CD11b的表达;免疫荧光检测PTEN的入核情况;CCK-8检测细胞增殖率。结果显示,ATRA与EGCG联合作用于NB4与HL-60细胞后,PTEN与CD11b的表达较单独应用ATRA时增加。PTEN特异性抑制剂SF1670作用于NB4后,细胞分化明显减少;PI3K抑制剂LY294002作用后,PTEN及CD11b表达增加。这些均表明EGCG能够增强ATRA诱导APL细胞株的分化作用,且这种促进作用与PTEN的增加是相关的。

盐霉素抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导分化

该文旨在探讨盐霉素(salinomycin,SAL)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和分化的影响及其可能的机制。采用CCK-8(cell counting kit-8)实验检测细胞增殖,瑞氏染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测粒细胞分化标志物CD11b的表达,Western blot检测相关蛋白质水平变化。结果显示,SAL抑制了细胞增殖;SAL作用72 h后,细胞呈现典型分化形态学改变。随着SAL的浓度升高,CD11b阳性的细胞比例以及CD11b、C/EBPβ蛋白质水平逐渐增加。此外,SAL降低了β-catenin以及下游分子C-myc、Cyclin D1的蛋白质水平。该研究还探讨了联合使用Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂IWR-1与SAL对细胞分化的影响。结果显示,与单独使用SAL相比,联合使用SAL和IWR-1促进了SAL诱导的NB4细胞分化。该研究结果提示,SAL可抑制NB4细胞的增殖,并可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导细胞分化。

拉帕替尼通过激活p38MAPK信号通路促进NB4细胞凋亡

该文探讨了拉帕替尼对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。用p38MAPK抑制剂和不同浓度的拉帕替尼处理NB4细胞24 h,CCK-8(cell counting kit-8)实验检测细胞增殖,FITC-Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,光学显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞形态,Western blot检测Bcl-2(B cell leukemia-2)、Bax(Bcl-2 associated X protein)、caspase-3、PARP(poly-ADP-ribose polymerase)、PML-RARα(promyelocytic leukemia-retinoic acid receptor alpha)、p38MAPK(p38 mitongen-activated protein kinase)和p-p38MAPK(phosphorylated p38 mitongen-activated protein kinase)等蛋白质水平。结果显示,随着拉帕替尼药物浓度的增加,细胞增殖率显著降低,细胞凋亡数量明显增加,Hoechst 33258染色可见染色质浓缩、碎裂等凋亡现象。同时,拉帕替尼能降低Bcl-2和PML-RARα蛋白质水平,增加Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-p38MAPK等蛋白质水平。用p38MAPK抑制剂预处理后,细胞增殖率升高,凋亡率降低,p-p38MAPK、Bax、cleaved caspase-3和cleaved PARP等蛋白质水平降低。该文结果提示,拉帕替尼能够抑制NB4细胞增殖并促进细胞凋亡,并且p38MAPK信号通路可能参与这些过程。

维替泊芬通过抑制YAP诱导白血病NB4细胞凋亡

探讨维替泊芬对人类白血病NB4细胞活性、凋亡的影响及其作用机制。我们用CCK-8实验检测NB4细胞的增殖活性;集落形成实验检测NB4细胞的集落形成能力;细胞周期和凋亡用流式细胞术来检测;凋亡形态学用Hoechst33342染色来观察;以及Western blotting检测细胞中蛋白的表达水平。结果显示,NB4细胞经维替泊芬处理后,集落数量减少,集落大小减小;CCK-8结果提示细胞增殖活性受到显著抑制,且呈现出剂量和时间依赖性（p〈0.05）;Hoechst 33342染色后观察到细胞凋亡形态;流式检测到G0/G1期细胞明显增多,细胞凋亡率明显增加（p〈0.05）;Western blotting检测到YAP、GSK3β、p-AKT、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平明显下调,Bax、p-GSK3β表达明显增加,裂解的PARP蛋白明显增加（p〈0.05）。因此本研究提示,维替泊芬能抑制人类白血病NB4细胞的增殖,诱导细胞凋亡。其机制是通过抑制YAP蛋白的表达诱导细胞凋亡,AKT/GSK3β信号参与了这一过程。

MiR-15b促进急性早幼粒细胞白血病细胞分化并抑制增殖

该文探讨了miR-15b在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)过程中发挥的作用。采用实时荧光定量PCR检测miR-15b的表达;流式细胞术检测细胞的分化情况;CCK-8实验检测细胞增殖;双荧光素酶报告实验检测miR-15b与CCNE1 3′UTR端的结合能力;Western blot检测下游靶基因CCNE1的表达。结果显示,ATRA促进miR-15b的表达;过表达miR-15b增强了ATRA对APL细胞的分化作用,而抑制miR-15b表达后则出现相反结果;miR-15b抑制了APL细胞的增殖能力;双荧光素酶报告实验显示miR-15b与CCNE1的3′UTR端结合;Western blot显示mi R-15b可以抑制下游靶基因CCNE1的表达。这些结果表明, miR-15b通过抑制CCNE1的表达促进APL细胞分化,抑制细胞增殖。

miR-382-5p通过靶基因PTEN阻滞NB4细胞分化

该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化; Western blot检测PTEN及髓系分化标志物CD11b的蛋白质水平;实时荧光定量PCR检测miR-382-5p的表达水平;过表达PTEN的慢病毒载体分别感染NB4细胞和HL-60、THP-1细胞;脂质体转染miR-382-5p的模拟剂(mimics)和特异性抑制剂(inhibitors)NB4细胞。结果显示, PTEN促进ATRA诱导的NB4细胞分化,而在HL-60和THP-1细胞中并无明显促分化效应。NB4细胞中,脂质体转染miR-382-5p mimics在mRNA和蛋白水平均抑制了PTEN的表达,并且抑制了ATRA诱导的分化;转染miR-382-5p inhibitors则恢复了PTEN表达,同时促进了ATRA诱导的急性早幼粒细胞NB4细胞的分化。该文结果提示, miR-382-5p靶向抑制了PTEN的表达从而抑制ATRA诱导的NB4细胞分化。