固定化双酶耦联体系制备手性胺

胺脱氢酶(amine dehydrogenase, AmDH)能够在辅酶的作用下不对称还原前手性酮制备手性胺,并与甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase, FDH)构建耦联双酶反应体系,通过酶活检测与高效液相色谱法得出, AmDH和FDH浓度比为4∶1、底物浓度为10 mmol/L、辅酶浓度为0.025mmol/L时,是游离双酶耦联体系最优反应条件。为提高双酶耦联体系的稳定性,将聚乙烯亚胺-双酶复合物作为模板和催化剂,诱导钛前驱体Ti-BALDH(titanium(IV)bis-(ammoniumlactato)-dihydroxide)缩聚,形成固定化耦联体系.与游离酶体系相比,辅酶可在固定化酶体系的微环境中高效循环再生,大大提高了多酶耦联体系的催化效率。

耐有机溶剂氨基酸脱氢酶基因挖掘与非天然氨基酸的非水相合成

可在非水相体系高效催化不对称还原反应制备手性化合物的氧化还原酶具有重要科学意义与工业应用前景。基于基因挖掘技术,获得了17个耐盐氨基酸脱氢酶的基因,并分析了其进化同源性和蛋白质稳定性热力学参数。选取来源于Natranaerobius thermophilus的苯丙氨酸脱氢酶(PheDH),进行了基因合成和表达、分离和纯化,获得了耐盐氨基酸脱氢酶,并检测了其有机溶剂耐受性。结果表明,对于催化L-苯丙氨酸的氧化脱氨体系,反应的最适温度为60℃,最适pH为12。在含有30%的二甲亚砜反应体系中,催化活性是水相体系的1.2倍。而对于催化还原胺化制备L-高苯丙氨酸的体系,最适温度为70℃,最适pH为8.5。在含30%的甲基叔丁基醚和二甲亚砜反应体系中,催化活性分别是原始活性的101.3%和99.2%。研究表明,该耐盐酶具有较好的耐热、耐有机溶剂等抗逆性能。