Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达

目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18～72小时(18～72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24～72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18～48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。

野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mRNA的表达谱

目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2+-hoxd3重组子经EcoRⅠ酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了pCS2+-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼受精后24 h～72 h胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。

珠江网河二维水动力数值计算研究

通过ECOMSED数学模型对珠江网河广州区域进行数值模拟计算。计算区域为老鸦岗、沙洛围、大石、黄埔水位站组成的闭合区域,采用贴体自适应网格技术。计算结果显示,水位、流速、流量计算值与观测值都吻合较好,结果令人满意。并应用到广州地铁过江隧道建设的水文特征分析中。

野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mRNA的表达谱

目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoR I、Xba I双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2+-hoxd3重组子经EcoR I酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了pCS2+-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼24 hpf-72 hpf胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。

对比观察血管支架植入术与药物治疗青年脑梗死合并大脑中动脉狭窄效果

目的对比观察脑血管支架植入术与药物治疗青年脑梗死合并大脑中动脉狭窄的效果。方法71例(30~44岁)脑梗死合并大脑中动脉重度狭窄(狭窄率>70%)患者,分别接受常规口服药物治疗(药物组,n=39)和支架植入术(支架组,n=32),比较2组相关指标。结果支架组手术成功率100%,共植入32枚支架。2组患者入组时及随访3、6、12、24个月,改良Rankin量表(mRS)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分组内比较差异均有统计学意义(P均<0.01),mRS、NIHSS评分组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。随访期间药物组终点事件发生率、卒中再发率及再发卒中致残率(mRS评分≥2分)分别为20.51%(8/39)、20.51%(8/39)及20.51%(8/39),支架组分别为6.25%(2/32)、3.13%(1/32)及3.13%(1/32),2组间终点事件发生率差异无统计学意义(P=0.17),支架组卒中复发率(P=0.04)及再发卒中致残率(P=0.04)均低于药物组。结论相比药物治疗,植入支架可降低青年脑梗死合并大脑中动脉狭窄患者卒中复发率及致残率。

替罗非班动静脉联合序贯治疗大脑中动脉支架内急性血栓形成效果观察

目的探讨动静脉联合序贯应用替罗非班治疗大脑中动脉支架内急性血栓形成的效果。方法对11例大脑中动脉支架扩张成形术中急性血栓形成但未造成血管闭塞患者经动静脉联合序贯应用替罗非班治疗,观察患者血栓形成部位前向血流变化,是否出现治疗后新发梗死灶和新发临床症状。结果 11例患者治疗后前向血流均有所恢复。5例恢复正常前向血流患者中有2例出现新发神经系统症状并伴有支架相关区域新发梗死灶,6例未能恢复正常血流患者中有5例出现新发神经系统症状并伴有支架相关区域新发梗死灶。结论替罗非班动静脉联合序贯应用可有效治疗大脑中动脉支架内急性血栓形成。

多途径介入手术与单纯抗凝治疗颅内静脉系统血栓

目的对比多途径介入手术与单纯抗凝治疗颅内静脉系统血栓(CVST)的疗效。方法回顾性分析88例CVST患者,其中47例接受多途径介入手术治疗(手术治疗组)、41例接受单纯抗凝治疗(对照组);术后随访6个月,比较2组疗效。结果手术治疗组出院时、3个月和6个月随访时改良Rankin量表(mRS)评分和美国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分别为1(1,2)、1.43±0.50,1(0,2)、1.04±0.33,1(0,1)、0.87±0.28,均低于对照组[2(1,2)、2.20±0.62,2(1,2)、1.59±0.49,1(0,2)、1.37±0.37,P均<0.05]。结论多途径介入手术治疗CVST疗效优于单纯抗凝,可降低致残率,改善患者生活质量。

Navien导管抽栓术治疗颅内静脉窦血栓形成效果观察

目的探讨Navien导管抽栓术治疗颅内静脉窦血栓形成(CVST)的效果。方法回顾性分析河北医科大学第二医院采用Navien导管抽栓术治疗的13例阻塞范围较广泛的CVST患者,并随访6个月,观察治疗效果。结果13例患者中12例治愈,1例死亡。有8例患者术前伴有不同程度意识障碍,至出院时除1例死亡外,7例均意识清楚。12例患者出院时、术后6个月美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分别为11(1.5,16)分、5(0,2.75)分,与术前14(2.5,18)分相比,差异均有统计学意义(P<0.01);改良Rankin量表(mRS)评分分别为3(0,3.75)分、0(0,1.75)分,与术前5(2,5)分相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论应用Navien导管抽栓术治疗CVST有效,可改善患者神经功能,提高生活质量。

cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式

目的:探讨cdh 5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中的表达模式。方法:收取tuebingen野生型斑马鱼多个发育时间节点的胚胎,提取其总RNA,体外逆转录后RT-PCR扩增cdh 5基因片段,将cdh 5基因片段插入pCS^2+质粒载体中,挑选阳性单克隆菌落,通过双酶切、测序等方法鉴定pCS^2+-cdh 5重组质粒;重组质粒单酶切后用T3RNA体外转录体系制备地高辛标记的cdh 5基因的反义mRNA探针,对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,显微镜下观察各发育节点胚胎cdh 5-mRNA杂交信号并拍照。结果:构建并鉴定了pCS^2+-cdh 5重组质粒,各发育节点胚胎经全胚胎原位杂交后发现在tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育至3.7~12 hpf时cdh 5-mRNA呈低丰度泛在表达,18~36 hpf时在后脑及血管处表达、在造血系统高表达,48 hpf后仅在脑部和血管处低表达。结论:在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中可以检测到cdh 5-mRNA在后脑和血管处有表达,并且在造血组织高表达。

高表达hoxb4转基因斑马鱼胚胎定向造血阶段cdh5-mRNA的表达

目的:探讨高表达hoxb 4转基因系斑马鱼胚胎定向造血发育中cdh 5-mRNA的表达。方法:实验分为野生型(WT)对照组、增强绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎,收取定向造血阶段32、36、40、44、48 hpf的胚胎各30枚;将pCS^2+-cdh 5重组质粒进行单酶切,用T3 RNA体外转录体系转录得到地高辛标记的cdh 5基因的反义mRNA片段,以其为探针对各组胚胎进行全胚胎原位杂交,显微镜下观察32、36、40、44、48 hpf的造血组织区域cdh 5-mRNA杂交信号并拍照记录灰度值。结果:32、36 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织AGM区、PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05),EGFP对照组与WT对照组差异无统计学意义(P>0.05);40、44 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05),EGFP对照组与WT对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);48 hpf时3组斑马鱼胚胎在造血组织区域均未见cdh 5-mRNA杂交信号。结论:在高表达hoxb 4转基因斑马鱼胚胎中,cdh 5-mRNA在定向造血阶段相应造血区域高表达。

HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

目的探讨HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的作用机制,从而为进一步研究其在造血发育中的功能奠定基础。方法提取斑马鱼总RNA,利用RT-PCR克隆得到HOXC4基因片段,将克隆得到的基因片段和载体pCS2+用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,把基因片段插入pCS2+中,重组质粒经双酶切及测序鉴定后,采用T3RNA聚合酶体外转录体系制备地高辛标记的HOXC4基因反义mRNA探针,然后行全胚胎原位杂交。结果构建HOXC4-pCS2+重组质粒,获得地高辛标记的反义mRNA探针并且完成其在野生型斑马鱼中的全胚胎原位杂交,显示HOXC4基因在Tuebingen野生型斑马鱼神经系统高表达。结论得到HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的基本表达情况,为进一步研究该基因在造血发育过程中的功能奠定了基础。

椎基底动脉取栓术中支架卡顿一例报道

患者女性,50岁,主因"头晕伴左侧肢体麻木20 h,加重伴四肢不能活动4 h时"于2015年12月15入河北医科大学第二医院神经内科。患者20 h前头晕,伴视物旋转及左侧肢体麻木。头部CT未见明显异常,给予阿司匹林等药物治疗,4 h前突然出现呼吸急促,四肢无力,不能言语,不能吞咽,复查头部CT仍未见明显异常,住院治疗。患者既往有高血压史、糖尿病史及冠心病史。体检:神志清楚,闭锁状态,双侧瞳孔直径3 mm,双侧对光反射灵敏,双侧眼球尚可活动,四肢肌力0级,双侧巴氏征阳性。诊断:(1)急性脑梗死(进展型卒中);(2)高血压3级(极高危);(3)2型糖尿病;(4)冠心病。