单链核糖体失活蛋白的核糖核酸酶活性

以芹菜４．５ＳＲＮＡ为底物，在ｐＨ５．０的条件下，５种纯核糖体失活蛋白：天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白均显示出核糖核酸酶活性，放射自显影图显示出它们对ＲＮＡ分子中的各种碱基具有不同的敏感性．

D.radiodurans kat A和kat B基因的结构分析与功能鉴定

以简并引物PCR获得的Cat酶基因片段为探针 ,结合生物信息学方法 ,探明了耐辐射奇球菌 (D .radiodu rans)基因组中存在两个编码过氧化氢酶 (Catalase,Cat)的基因 :katA和katB .katA和katB基因长 2 2 77bp和 16 11bp,各编码 75 8和 5 36个氨基酸 .用pKK2 2 3 3表达载体连接katB基因 ,转入Cat酶缺陷型大肠杆菌 (E .coliUM2 )进行表达 .katB基因表达产物具有Cat酶活性 ,电泳迁移位置与D .radioduransCatB酶位置相符 ,并可重建E .coliUM2对低浓度H2 O2 损伤的耐受力 .图 4参

天花粉蛋白等五种核糖体失活蛋白的5′－AMP－磷酸酯酶活性

用ＨＰＬＣ和薄层层析等方法，分析了不同反应时间天花粉蛋白（ＴＣＳ）和５＇－ＡＭＰ的反应产物成分，结果显示在０．５ｈ内生成腺嘌呤核苷，随着反应时间的增加，同时有腺嘌呤核苷和腺嘌呤生成，４８ｈ后则反应产物主要是腺嘌呤，α－苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白等单链核糖体失活蛋白也有类似结果，紫外差光谱研究结果也表明ＴＣＳ与５＇－ＡＭＰ相互作用显示出明显的时间过程，提示单链核糖体失活蛋白除了Ｎ－糖苷酶活性外，还具有５＇－ＡＭＰ磷酸酯酶活性．

天花粉蛋白基因克隆、序列分析及在E.Coli中表达

天花粉蛋白为单链核糖体失活蛋白,具糖苷酶活性,对 HIV 和多种动植物病毒有明显的抑制作用,有广泛的理论价值和应用前景.本文在国内首次采用聚合酶链式反应(PCR)方法,以栝楼染色体 DNA 为模板、合成的寡聚核苷酸为引物,扩增出了编码成熟天花粉蛋白的 DNA 片段(称 gene 1)和编码含23个氨基酸组成的分泌型信号肽、成熟天花粉蛋白以及羧基端延伸因子在内的 DNA 片段(称 gene 2).两 DNA

天花粉蛋白基因克隆、序列分析及在Ecoli中表达

采用聚合酶链式反应方法(PCR)以栝楼(Trichosanthin Kirilowii Maximowicz)基因组DNA为模板,扩增出了两DNA片段:一个为编码成熟天花粉蛋白的DNA片段(0.741 kb称gene_2);另一个则包含gene_2和编码23个氨基酸组成的分泌型信号肽及19个氨基酸组成的羧基端延伸因子的DNA片段(0.867 kb称gene_1).将gene_1gene_2分别克隆到载体pUC18上并进行序列分析.与已报道的序列相比其同源性达99.3%.Western blotting检测证明gene_2在E.coli中能表达天花粉蛋白的融合蛋白,gene_1则不能表达,原因在进一步研究之中.

用简并引物扩增与克隆D.radiodurans超氧化物歧化酶和过氧化氢酶基因片段

依据超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 和过氧化氢酶（Ｃａｔ） 的保守性氨基酸序列，设计简并引物，自Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ 基因组ＤＮＡ扩增并克隆了ＳＯＤ和Ｃａｔ 基因片段．ＳＯＤ 和Ｃａｔ 基因片段分别长４５３ ｂｐ 和６７３ ｂｐ，各编码１５１和２２４ 个氨基酸，氨基酸序列与不同生物来源的ＳＯＤ或Ｃａｔ

人血清中糖基磷脂酰肌醇－特异性磷脂酶D活性的测定

我们用含糖基磷酯酰肌醇疏水膜锚结构（ＧＰＩ－ａｎｃｈｏｒ）的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）作为底物，建立了稳定可靠的测定血清中ＧＰＩ专一的磷酯酶Ｄ（ＧＰＩ－ＰＬＤ）活性的条件，活性用ＡＬＰ由疏水性到亲水性的转化率（％）表示。经测定，健康人群的活性水平在转化率为２０～６０％之间者占９５％以上，低于２０％者仅占０．９％。在普查了多种疾病患者血清的酶活性的基础上，统计了几种疾病患者血清的酶活，其中肾衰、肠癌、肝癌、肝硬化以及甲型和乙型肝炎病人血清的酶活有所下降，活性低于２０％者较正常人高１５至４０倍，而急性肝炎恢复期的病人，酶活水平恢复正常。另外发现，高血脂患者的酶活性则明显高于对照值。造成血清中ＧＰＩ－ＰＬＤ活性水平改变的原因尚不清楚，但可能不是由单一器官功能不全所致。