UF-100尿液分析仪细菌计数对泌尿道感染的诊断性能评价

目的:对UF-100尿液分析仪细菌计数结果进行诊断性能评价。方法:360例门诊与住院患者经初诊疑为泌尿道感染者的清洁中段晨尿先作细菌培养,然后尽快在UF-100尿液分析仪上检测细菌数及白细胞数。结果:以中段尿细菌培养结果为标准对UF-100尿液分析仪细菌数进行评价,ROC曲线下面积为0.895,细菌数的阳性阈值为≥3227/μL,敏感性为83.3%,特异性为83.3%,假阳性率为31.8%,假阴性率为7.8%,准确率为83.3%。将细菌计数和WBC数联合进行评价时,敏感性为81.5%,特异性为90.1%,假阳性率为22.1%,假阴性率为8.1%,准确率为87.5%。结论:UF-100尿液分析仪细菌计数与泌尿道感染诊断标准有较好的一致性,但有一定的漏检率,结合白细胞计数可作为临床泌尿道感染早期诊断的实验室检查指标之一。

银翘散联合克拉霉素对蜃楼弗朗西斯菌的抑制作用研究

目的探究银翘散、克拉霉素对蜃楼弗朗西斯菌的体外抑制作用。方法选取蜃楼弗朗西斯菌ATCC25015为实验菌株,采用微量肉汤稀释法测定银翘散和克拉霉素的最低抑菌浓度(MIC);采用微量棋盘稀释法进行银翘散和克拉霉素的联合药敏试验;利用紫外分光光度法及RT-PCR测定银翘散和克拉霉素单用或联用时对蜃楼弗朗西斯菌生物膜形成的影响及greA基因mRNA表达的变化。结果银翘散、克拉霉素单药对蜃楼弗朗西斯菌MIC分别为6.40、0.32 mg/mL,二者联合用药时分级抑菌浓度指数(FIC)为0.75,提示两药配伍具有相加作用。与空白对照组比较,银翘散(1.6 mg/mL)、克拉霉素(0.08 mg/mL)可抑制蜃楼弗朗西斯菌生物膜的形成能力(P<0.05),而两药联合使用可增强抑制生物膜形成的能力,且较相同浓度单药组MIC浓度下降。与空白对照组比较,RT-PCR表明一定浓度的银翘散、克拉霉素单药或联用后菌株greA mRNA表达水平均呈现下调(P<0.05),但联合用药组较相同浓度的克拉霉素单药组下调更显著(P<0.05)。结论银翘散与克拉霉素联用时对蜃楼弗朗西斯菌的体外抑菌呈相加作用,同时可以增强对其生物膜形成及greA mRNA表达的抑制作用。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对非结核分枝杆菌的鉴定与分型

目的以CLSI－MM18A（病原菌DNA测序鉴定的解释指南）推荐的RPOB（利福平耐药）基因为参考标准，评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI－TOF MS）技术对非结核分枝杆菌的鉴定和分型的水平的能力。方法收集2012年至2016年从临床分离的不同感染部位的55株NTM菌株，利用RPOB进行管家基因测序，并对测序结果进行系统发育进化分析；同时利用MALDI－TOF MS技术对菌株进行鉴定，并对蛋白指纹图谱进行聚类分析；评价两种方法对NTM鉴定和分型的一致性。结果RPOB基因对55株NTM显示了很好的鉴定（测序结果TM值均大于99%）和分型（可区分到复合群内的种或亚种）能力；法国BioMerieux MALDI－TOF MS技术对55株NTM的鉴定到属的水平为89.1%，鉴定到种的水平为78.2%，鉴定水平良好；利用SARAMS Premium软件对蛋白指纹图谱的聚类分析也显示出了良好的分型能力。结论MALDI－TOF MS技术可以有效的对非结核分枝杆菌进行鉴定和分型，其检测周期短，操作简便，在实验室中与RPOB基因联合应用有着很好的互补性。

OrthoANI联合MALDI-TOF MS在胎儿弯曲菌鉴定与分型中的应用

目的 建立新型弯曲菌—＂胎儿弯曲菌龟亚种（C.fetus subsp.testudinum）＂质谱超级图谱库,为临床提供新的检测平台.方法 对收集的建库菌株采用Illumina二代测序平台2000/miSeq进行高通量全基因组测序,JAVA 8运行环境,进行直系同源基因的全基因组平均核苷酸一致性（average nucleotide identity,OrthoANI）分析;对收集的实验菌株、标准菌株及对照菌株进行质谱分析,建立＂C.fetus subsp.testudinum＂的超级图谱并验证.结果 OrthoANI分析得出：建库菌株与模式菌株C.fetus subsp.testudinum03-427的OrthoANI值为：99.30%~99.96%,而其与C.fetus subsp.venerealisNCTC10354、C.fetus subsp.fetus82-40的OrthoANI值在91.05%~92.26%.参考OrthoANI≥95%作为同一菌种的判定依据,故将建库菌株最终鉴定为＂胎儿弯曲菌龟亚种＂.新建的超级图谱库鉴定准确率100%（与基因测序一致）,可信度区间为：82.3%~99.9%,同一菌株鉴定重复性100%.结论 基于高通量测序及全基因组学分析的微生物分类新＂金标准＂为实验室质谱自建库提供了理想的参考价值,而建立准确、客观的＂C.fetus subsp.testudinum＂质谱超级参考图谱,为临床快速诊断胎儿弯曲菌感染提供了新的平台.