稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定

目的构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能。方法以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养,ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1×10^(8)转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中,CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后,IL-2、IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加。结论稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞。

间充质干细胞移植治疗新型冠状病毒肺炎的思考

目前2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染疫情已造成了全球大流行.尽管科研人员已经对2019-nCoV展开了深入研究,并解析出了分子结构,进行了进化树分析,但对于其具体的致病机制还缺乏足够认识,导致目前尚缺乏特异有效的治疗药物与手段.由于2019-nCoV感染会引发过度炎症反应,进而导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和脓毒症是其致死的主要并发症,因此,在抗病毒和对症治疗的同时减轻炎症反应,才能有更好的治疗效果.间充质干细胞(MSCs)不仅具有显著的免疫调节功能,还能发挥再生修复的作用,修复受损肺组织,可以考虑作为治疗新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)的一种新的有效手段.本文通过分析2019-nCoV的主要致病机制以及发展为ARDS的过程,并结合MSCs的研究现状,探讨其用于治疗新冠肺炎的意义与可行性,为临床治疗提供充实的理论依据.

胍丁胺通过AMPK途径诱导间充质干细胞的凋亡

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有强大的组织再生修复及免疫调节功能,广泛应用于损伤性和免疫相关性疾病的治疗,但其过早凋亡会降低临床疗效,且机制不明。研究发现,胍丁胺(agmatine,AGM)可通过抑制一氧化氮(nitric oxide,NO)生成发挥抗炎功能,对脓毒症小鼠具有保护效应。移植MSCs治疗脓毒症也是一种有效的治疗方式,但二者是否存在相互作用及AGM是否影响MSCs生存却未见报道。该研究旨在探讨AGM对MSCs生存的影响及其分子机制。研究MSCs之前,该研究通过检测细胞表面marker(CD29、CD34、CD44、CD45、CD90和CD105)及三系分化(成脂、成骨、成软骨)对其进行了鉴定。为了深入探究AGM对MSCs的作用,使用流式细胞术检测AGM处理后MSCs的凋亡率(Annexin V)以及Western blot检测经AGM处理后MSCs的凋亡相关信号通路蛋白p-AMPK、p-mTOR、p-S6K1、Cl-Caspase3的表达水平。之后进一步添加AMPK siRNA检测AGM诱导MSCs凋亡的分子机制。结果显示,AGM在体外以剂量依赖性的方式,通过抑制mTOR信号通路诱导AMP活化蛋白激酶(AMPK)活化,导致凋亡相关蛋白表达上调,从而介导MSCs凋亡。而AMPK siRNA处理能明显恢复mTOR通路,并抑制AMPK活化,使凋亡相关蛋白表达降低,进而减弱AGM诱导的凋亡效应。该文揭示了AGM可通过AMPK途径诱导MSCs的凋亡。

胆碱能炎症反射与炎症消退研究进展

迷走神经在调节全身的炎症稳态中起着重要作用。体内的炎症信号经由神经反射传递给迷走神经传出纤维,后者产生的信号通过巨噬细胞、表达胆碱乙酰转移酶的T细胞等免疫细胞在各种炎症疾病中发挥抑炎作用。但是炎症的解决不仅仅是促炎性细胞因子与抗炎细胞因子的相互角力,更是一个生物合成的主动过程,其中包括各种促分解介质的合成以及它们的生理效用过程。此外,胆碱能炎症反射在炎症消退过程中同样发挥着重要作用。本综述回顾并总结了胆碱能炎症反射及其在炎症消退过程中的重要作用。