限制酶介导整合技术:一种克隆新基因的新策略

限制酶介导整合(REMI)技术是近年发展起来的一种研究新基因的方法,已被用于盘基网柄菌、酵母和丝状真菌等微生物细胞与发育过程的研究。结合质粒拯救技术,可快速分离质粒两侧未知的基因组DNA序列,进而对该序列做进一步分析和研究。我们简要介绍了REMI技术的基本原理、影响因素、缺点及其应用。

分子伴侣对可溶性肿瘤坏死因子相关促凋亡配体在巴斯德毕赤酵母中表达的影响

目的:提高外源蛋白可溶性肿瘤坏死因子相关促凋亡配体(sTRAIL)在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达。方法:根据GenBank公共数据库中公布的模式生物酿酒酵母的分子伴侣(Ssa1p、YDJ1、Kar2p和PDI)基因序列设计引物,利用PCR方法从酿酒酵母基因组中得到各基因片段,并将单独Ssa1p或Kar2p、组合YDJ1+PDI、Kar2p+PDI或YDJ1+PDI+PDI分别构建到pPIB2Z表达载体中,并整合到外源蛋白sTRAIL工程菌(毕赤酵母GS115)中进行筛选和诱导表达。结果:SDS-PAGE分析表明,sTRAIL的表达量明显提高,特别是整合了分子伴侣组合YDJ1+PDI的工程菌。Western印迹分析整合的分子伴侣基因后,分子伴侣蛋白在工程菌中的表达量得到了提高。结论:提高细胞内分子伴侣的表达,可以增加外源蛋白的分泌表达,为进一步研究巴斯德毕赤酵母奠定了基础。

巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因GR1的分离克隆与鉴定

目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因。方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经SalⅠ线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,构建GS115-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMI)技术使GS115-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻遏的GS115-LacZΔ菌体;Southern blot鉴定GS115-LacZΔ基因组,用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序。结果:得到甘油去阻遏的GS115-LacZΔ菌体,经Southern blot分析,突变仅发生在1个基因中;通过质粒拯救和TAIL-PCR,分离得到阻遏相关基因GR1,共2863bp,经在线BLAST,发现其编码一种过氧化物酶体自吞噬相关蛋白。结论:分离得到阻遏相关基因GR1,与过氧化物酶体自吞噬相关,提示过氧化物酶体自吞噬相关基因可能对醇氧化酶启动子AOX1的转录活性有影响。

人转铁蛋白受体基因慢病毒表达载体的构建和鉴定

目的将人转铁蛋白受体(hTfR)基因克隆到慢病毒表达载体pLENTI6.3,并鉴定其正确性,为活体干细胞MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增hTfR基因,并克隆到pLENTI6.3载体;经过菌落PCR初步筛选、Bam H1酶切鉴定和测序鉴定构建的pLENTI6.3-hTfR-IRES-EGFP重组载体。结果通过PCR技术成功扩增了hTfR基因;hTfR基因片段重组到pLENTI6.3载体;菌落PCR和酶切鉴定,凝胶电泳结果均显示得到和理论大小相符的片段;DNA测序结果与Genbank序列完全一致。结论 pLENTI6.3-hTfR-IRES-EGFP慢病毒表达载体构建成功,为下一步进行活体干细胞MR分子成像实验研究奠定基础。

PCR克隆新基因策略研究进展(英文)

自从PCR被开发及其基本反应条件被优化以来,这项技术已被应用于分子生物学研究的各个方面。其中应用最多的是从给定的有机体中扩增和克隆新基因。那些从事新基因的结构和功能分析研究的工作者必须获得第一手资料,也就是新基因的序列。而且快速方便地克隆这些新基因序列在很大程度上依赖于那些由PCR技术演变而来的方法。本文综述概括了建立在PCR基础上的方法在新基因分离克隆中的各种应用。

浅谈粮食检验工作与民生

民以食为天,粮食问题是民生问题,粮食的质量关系于国民的健康水平,所以以保障粮食质量安全为目的粮食质量检验和监督工作也就显得至光重要。针对我国粮食质量的现状,以及结合我国现在粮食检验工作,分析现在我国粮食检验与监管体系所存在的问题,并提出对加强粮食监管和保障粮食质量安全的建议。

不同分泌信号对豹蛙酶在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响

目的:研究不同分泌信号对豹蛙酶(ONC)在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响。方法:根据已知天然ONC的氨基酸序列,结合酵母偏爱密码子,设计并合成了ONC基因序列,通过融合PCR获得了不同分泌信号与ONC的融合基因,将其克隆至表达载体pPIC9k中,然后将线性化的重组表达载体电击转化GS115毕赤酵母感受态细胞,通过SDS-PAGE检测目的蛋白表达量。结果:糖基化ONC表观相对分子质量为(14～16)×103,且其糖基化不均匀,非糖基化蛋白肽链的相对分子质量约为12×103;采用不含EAEA结构的α交配因子作为分泌信号时ONC没有表达,利用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号时均能够显著提高其表达量。结论:采用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号均能够显著提高ONC在巴斯德毕赤酵母中的表达量。

饲料用α化淀粉生产工艺及品质管理

饲料用α化淀粉生产工艺及品质管理汪斌姚学勤α化淀粉在饲料工业尤其在鳗、鳖、虾等特种水产养殖中应用十分广泛。由于鳗、鳖、虾生长、生活习性的特异性，对α化淀粉的质量提出了较高的要求。这里仅就生产饲料用α化淀粉常用的转鼓式干燥机生产工艺及质量控制谈谈我们的...

用活性饲料酵母代替鱼粉饲养试验初报

随着养猪业的不断发展,饲料的供应矛盾越来越大,尤其是蛋白质饲料不足已成为发展畜牧业的主要制约因素,为开辟新的蛋白质饲料资源,我们用武汉市新洲饲料研究所研制的饲料酵母菌种,生产活性饲料酵母代替秘鲁鱼粉配制成猪配合饲料。

腹腔镜胆囊切除术对急性胆囊炎患者的影响

目的探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)对急性胆囊炎(AC)患者的影响。方法回顾性分析2018年3月至2020年3月医院治收治的84例AC患者的临床资料,依据手术方法的不同分为两组,各42例。对照组接受开腹胆囊切除术(OC)治疗,试验组接受LC治疗,比较两组围手术期指标及并发症发生情况。结果试验组术中出血量少于对照组,手术时间、下床活动时间、住院时间均短于对照组,并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LC用于AC患者中可减少术中出血量,缩短下床活动时间,促进恢复,且并发症少。

甲基乙烯基二氯硅烷水解物裂解工艺改进

对传统甲基乙烯基二氯硅烷水解物裂解工艺进行了改进。新裂解工艺在裂解釜中加入了溶剂油,可有效降低体系黏度,使传热均匀,裂解釜的开车周期提高至60~80 h,碱耗量降至0.05%~0.1%,环体中四甲基四乙烯基环四硅氧烷(V4)质量分数提高至77%~80%,裂解残渣质量分数降至0.5%~0.8%,环体收率提高至93%~95%。新工艺还减少了水洗步骤,简化了裂解工艺流程。

管理运筹学中最短路径问题Dijkstra算法改进研究

Dijkstra算法是求解运筹学最短路问题的重要方法之一。文章在分析传统Dijkstra算法思想的基础上寻求其优化途径,发现可以使用堆结构来优化传统算法在查找最小值时重复查找标记的遍历过程。经理论分析与具体实验测试,改进后的算法在时间效率方面明显优于传统算法,提高了该算法的效率和性能,具有较好的适用性。

钬激光联合纤维胆管镜治疗膀胱盲区浅表肿瘤14例

目的：评价钬激光联合纤维胆管镜治疗盲区位置浅表膀胱肿瘤的临床意义和效果。方法：采用钬激光联合纤维胆管镜治疗盲区位置浅表膀胱肿瘤14例。结果：14例均成功切除肿瘤，随访6～30个月，1例复发，为膀胱颈侧壁层多发肿瘤，行二次切除。结论：纤维胆管镜与膀胱输尿管软镜有共性，并能调节视角范围。将纤维胆管镜应用到泌尿外科治疗盲区膀胱浅表肿瘤，确保了手术的精确性与安全性，该方法在县区级医院有推广使用意义。

脑损伤修复与功能重建干预策略

脑是人体的生命中枢,脑功能损害将严重影响人的生存与健康.脑损伤是造成脑功能损害的直接原因,具有发病率高,致死、致残率高的特点.无论是脑创伤、脑部缺血或出血,其共同病理特点都是神经元严重受损、缺失或死亡,造成神经功能障碍,患者出现偏瘫、失语、视力丧失、智力及意识障碍等症状,严重影响患者生活质量.在临床上,脑损伤主要包括颅脑损伤和卒中,前者因机械性损伤所致,后者因脑血管梗死或出血引起,其中缺血性卒中（缺血性脑损伤）最为多见,占80%[1].

hTfR报告基因慢病毒载体构建及其在神经干细胞的表达研究

目的探讨人转铁蛋白受体（hTfR）基因慢病毒载体构建方法及其在神经干细胞（NSCs）中的表达情况,为NSCs的MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术伊CRl扩增hTfR基因，并克隆到pLenti6.3载体，构建出慢病毒表达载体pLentil6．3-hTfR-IRES-EGFP。利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP-VSVG和pLenti6．3-hTfR-IRES-EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装，48h后收集病毒上清，体外感染NSCs。细胞流式筛选稳定表达hTfR的细胞，通过实时定量PCR和Westernboltting检测hTfR的表达，细胞免疫荧光技术对过表达的hTfR进行亚细胞的定位。结果成功构建危珊基因慢病毒表达载体，包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs。实时定量PCR和Westernboltting鉴定出hT瓜在NSCs中过表达，hTfR基因表达相对值为2．275±0．281。细胞免疫荧光检测到过表达的hTfR主要在细胞膜上表达。NSCs分化后，hTfR在胶质细胞和神经元中稳定表达。结论本研究所用方法能成功构建hTfR慢病毒表达载体并筛选出稳定表达hTfR的NSCs系,为下一步活体内移植NSCs行MR分子成像实验研究奠定了基础。

科学基金对颅脑创伤研究的促进作用

颅脑创伤，又称创伤性脑损伤（traumatic braininjury，TBI），是由外伤引起的脑组织损害。在世界范围内，TBI已成为继心脏病、恶性肿瘤、脑血管意外之后的第4位死因。美国TBI发生率约为538／10万，其中．约有32％是因为坠落造成的，19％是交通意外，18％归咎于斗殴或运动伤害。值得注意的是，交通意外是造成青壮年重型TBI的首要原因，