利用Illumina MiSeq高通量测序技术分析原料乳的菌群分布

为测定原料乳中的菌群分布情况,应用Illumina MiSeq高通量测序方法,主要对14个奶牛场的原料乳进行采集,通过DNA测序确定菌群的多样性及致病菌的分布情况,进行操作分类单元聚类分析、Alpha多样性分析、物种分类分析3方面的测定。结果表明不同牧场的菌群存在多样性,位于前列的分别是肠球菌属(Enterococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、乳球菌属(Lactococcus),同时表明,个别牛场原料乳中有金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺菌(Shigella)的存在。

乳清蛋白肽对自然衰老小鼠抗氧化效果及脑内乙酰胆碱脂酶的影响

利用碱性蛋白酶水解制得的乳清蛋白肽(WPP),以青年小鼠、自然衰老的小鼠和灌胃脑复康的自然衰老的小鼠作对照,以灌胃低中高剂量乳清蛋白肽即100,200和400 mg/(kg·d)自然衰老的小鼠为实验组,通过体内抗氧化指标(SOD、MDA、GSH-Px、蛋白质羰基)和脑内乙酰胆碱脂酶来研究乳清蛋白肽对自然衰老的小鼠抗氧化效果及乙酰胆碱脂酶活力的影响,并探究WPP对老龄小鼠学习记忆的影响。灌胃乳清蛋白肽自然衰老小鼠的SOD和GSH-Px活性显著增加,MDA和蛋白质羰基浓度显著降低,同时乙酰胆碱脂酶的活性也有所降低,高剂量组与脑复康对照组结果相近;实验结果表明乳清蛋白肽能显著提高自然衰老小鼠抗氧化能力,并能调节脑组织乙酰胆碱酯酶的活性,提高衰老小鼠学习记忆认知功能。

行为学研究乳清蛋白肽对衰老小鼠学习记忆的影响

行为学实验是评价动物学习记忆能力的主要方法之一,本文选择跳台、穿梭箱和Morris水迷宫三种常用的行为学实验,利用碱性蛋白酶水解制得的乳清蛋白肽,研究乳清蛋白肽对老龄小鼠学习记忆能力的影响。通过动物行为学实验得出,灌胃乳清蛋白肽可以增加跳台潜伏期和减少跳台错误次数;减小电击时间和次数;减少定位航行实验中的逃避潜伏期、游泳路程、速度和朝向角,增加空间探索实验中的目标象限停留时间、时间百分比、路程百分比、经过平台次数和减少初次穿越平台的时间,同时游泳轨迹也向趋向型和直线型发展。实验结果表明,乳清蛋白肽能够提高衰老小鼠的被动回避和空间学习记忆能力,所以通过本试验可以为开发具有改善学习记忆能力的乳清蛋白肽产品提供理论依据。

MALDI-TOF-MS对原料乳中产β-内酰胺酶菌株的鉴定

为研究原料乳中产β-内酰胺酶细菌的来源,通过杯碟法检测原料乳中的β-内酰胺酶,并鉴定出原料乳中有金黄色酿脓葡萄球菌;随后,通过对原料乳产地的空气、牛体臀部、牛体腹部、牛体乳房、榨乳罩杯、输乳管路外侧、盛装原料奶的空贮罐等进行了大量细菌采集和分离,并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry technology,MALDI-TOF-MS)技术对分离出的菌株进行鉴定。结果表明,牛体乳房5号菌与原料乳中检测出的产β-内酰胺酶的菌株相似,均为金黄色酿脓葡萄球菌,由此推断原料乳中的金黄色酿脓葡萄球菌可能来源于牛体乳房。

Illumina MiSeq高通量测序技术研究原料乳及环境中细菌多样性和致病菌的分布情况

利用Illumina MiSeq高通量测序方法测定原料乳及其环境中的细菌微生物的多样性及致病菌的分布情况。提取DNA和PCR扩增后测序,主要测定稀释性曲线、OTU相对丰度曲线以及菌群分布图。结果表明:菌群具有多样性,在输乳管路外侧和盛装原料奶的空贮罐中均检测出金黄色葡萄球菌。应严格监控奶牛生活环境及储奶设施的卫生情况,从而保障原料乳质量安全。

高效液相色谱法检测乳中β-内酰胺酶抑制剂——克拉维酸

建立了乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测方法。样品采用乙腈除蛋白,正己烷脱脂的方法。色谱条件:Hypersil ODS-2 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾(pH 4.5)-甲醇溶液(95∶5,V∶V),检测波长217 nm,流速1 mL/min。试验结果表明:克拉维酸在5~200μg/mL质量浓度范围具有良好的线性关系,相关系数为0.9992。采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正,克拉维酸的平均回收率在83%~92%之间,相对标准偏差小于1.185%。该方法具有操作简单,灵敏度高,结果准确等特点,适用于乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测。