丹参酮ⅡA通过抑制HDAC3影响巨噬细胞极化的作用研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过抑制组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)影响巨噬细胞极化的作用。方法应用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选TanⅡA药效靶点和动脉粥样硬化作用靶点,并将二者的交集基因进行KEGG通路分析,采用Cytoscape 3.7.1软件对主要交集基因-信号通路进行可视化分析。选用THP-1单核细胞株经佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)诱导为贴壁的巨噬细胞后,分为M0组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、TanⅡA+ox-LDL组及ox-LDL+HDAC3 siRNA组。采用流式细胞术、免疫荧光实验及qRT-PCR技术检测TanⅡA对ox-LDL诱导的巨噬细胞极化方向的改变及HDAC3 mRNA表达水平的变化。结果生物信息学分析得到TanⅡA药效靶点和动脉粥样硬化作用靶点有23个交集基因,选取排序靠前的20条信号通路进行可视化分析,发现主要富集于动脉粥样硬化、流体剪切力和TNF信号通路等。其中,JUN、FOS、RELA、NFKBIA四个交集基因参与巨噬细胞极化的信号通路调控。流式细胞术、免疫荧光实验及qRT-PCR结果显示ox-LDL可诱导M0巨噬细胞CCR7和CCL2表达显著升高;与ox-LDL组相比,TanⅡA预处理的M0巨噬细胞经ox-LDL诱导后HDAC3、CCR7及CCL2 mRNA表达均下降,和ox-LDL+HDAC3 siRNA组结果一致。结论TanⅡA能有效地阻止ox-LDL诱导巨噬细胞往M1方向极化,其机制可能是通过调控巨噬细胞HDAC3表达介导的。

血浆mi R-195对早期急性心肌梗死的诊断价值及可能机制的生物信息学分析

目的探讨血浆微小RNA-195(miR-195)对早期急性心肌梗死(AMI)的诊断价值及可能机制的生物信息学分析。方法选取AMI患者100例作为AMI组,同期选择健康志愿者60例作为对照组,抽取静脉血并分离血浆。用固相免疫层析法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI),用实时定量PCR法检测血浆miR-195表达;用受试者工作特征曲线评价cTnI、miR-195对AMI的诊断效能;用miRDB和miRWalk数据库预测miR-195的靶基因,并筛选与AMI相关基因,取交集进行基因本体数据库(GO)富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果 AMI组胸痛发生4 h即可在血浆中检测到miR-195表达,且随胸痛时间延长血浆miR-195表达呈升高趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。miR-195诊断AMI的曲线下面积为0.94,敏感度、特异度分别为90.0%、94.7%;miR-195联合cTnI诊断AMI的曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.96、91.0%、93.0%。miR-195的靶基因与AMI相关基因的交集基因多富集于细胞凋亡的负向调控通路。结论血浆miR-195对AMI具有较好的早期诊断效能,其机制可能是miR-195靶基因参与了心肌细胞凋亡的调控。

二至丸对结肠癌细胞增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨二至丸对结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:以化疗药奥沙利铂(L-OHP)为阳性对照,采用MTT法检测二至丸联用L-OHP前后对HCT116细胞生长的抑制情况、流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布及Annexin V-FITC试剂盒检测对HCT116细胞凋亡的影响。结果:MTT实验显示:20%二至丸含药血清能抑制HCT116细胞增殖,以10%二至丸含药血清联用5. 19μg/ml奥沙利铂组最佳,达(70. 31±0. 58)%;周期实验显示:单用5%、10%、20%二至丸含药血清作用于HCT116细胞主要阻滞在G1和S期,而在S期均产生明显阻滞,分别为(44. 5±11. 2)%、(48. 4±8. 5)%、(50. 5±3. 1)%; 5. 19μg/ml奥沙利铂组在G1期产生明显阻滞,为(90. 8±6. 5)%; 5. 19μg/ml联用10%二至丸含药血清组主要阻滞在G1期,与余组相比最高,达到(93. 8±1. 4)%,且各组细胞周期G1、G2、S期分布两两比较均有差异;凋亡实验显示:二至丸联用L-OHP前后均能诱导HCT116细胞凋亡,以10%二至丸含药血清联用5. 19μg/ml奥沙利铂组最佳,达(44. 2±4. 7)%; Western blot蛋白实验显示:除20%二至丸含药血清组外,其余各组与空白对照组比较,Bax蛋白表达量均呈显著差异,以5. 19μg/ml L-OHP联用10%二至丸含药血清组蛋白表达量最高;各给药组与空白对照组相比,Bcl-2蛋白表达量均显著降低,以5. 19μg/ml L-OHP联用10%二至丸组蛋白表达量最低。结论:二至丸能抑制人结肠癌HCT116细胞增殖、诱导细胞凋亡、改变细胞周期分布、增加Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达,联合L-OHP效果更优。