酶处理细胞检测低效价Rh抗体的研究

目的探讨用不同的试验方法来检测低效价Rh抗体。方法采用盐水法、抗球蛋白法、聚凝胺三步法对不同效价的抗-D、-E、-C、-c、-e试剂对酶处理和非酶处理细胞进行检测,观察各自的灵敏度。结果在上述3种方法中,经酶处理的细胞能够检测出低效价的Rh抗体,聚凝胺方法比抗球蛋白方法更灵敏。结论在抗体筛选、交叉配血、新生儿溶血病等的检测中只使用非酶处理细胞来检测,可能会出现假阴性的结果,漏检部分含有低效价的Rh系统抗体。

稀有抗体抗-Jk^3的发现及Jk(a-b-)血型家系遗传背景研究

目的研究抗-Jk3的血清学特异性及产生该抗体的Jk(a-b-)稀有血型的遗传途径,了解该血型在广州地区人群的分布。方法患者血清与试剂谱红细胞在盐水介质,低离子介质凝聚胺和coomb's微柱凝胶中反应,分析鉴定其抗体特异性;对kidd血型进行家系调查,分析Jk(a-b-)稀有血型的遗传背景;采用2mol/L尿素溶血试验初筛,coomb's微柱凝胶试验确认,对广州地区32 000名献血者的红细胞作Jk(a-b-)血型筛查。结果患者血清与试剂红细胞在低离子凝聚胺介质和coomb's微柱凝胶介质中的反应格局显示患者血清中含有抗-Jk3,kidd血型家系遗传研究提示母方带有Jkb/Jknull基因,推测父方至少带有1条Jknull基因;在32 000名献血者中发现8名Jk(a-b-)个体。结论该例同种抗体为IgG抗-Jk3特异性抗体;隐性基因Jknull可以遗传,当该基因为纯合子时表现为Jk(a-b-)表型个体,该血型在广州地区人群分布频率为0.025%,解决稀有血型患者输血问题的有效措施是建立本地区的稀有血型献血者队伍。

红细胞输注效果影响因素的Logistic回归分析

目的分析影响红细胞输注效果的相关因素,为临床科学、有效输血提供依据。方法对洛阳、内蒙古、乌鲁木齐及甘肃4省市的多家省、市、县级医院在2005年1月-2006年6月的红细胞输注病例进行大规模回顾性调查,用Logistic回归分析的方法分析红细胞输注后影响其效果的有关因素。结果4 622份红细胞输注病例共输注红细胞7 040次,无效输注1 089次,占15.47%。用Logistic回归分析影响红细胞输注效果的因素有4个:输血次数、女性妊娠次数、伴随发热以及恶性肿瘤性疾病。结论输血次数、女性妊娠次数、伴随发热以及恶性肿瘤性疾病可能是红细胞输注效果的单独影响因素,输血次数及妊娠次数可能与免疫因素有关,而发热及恶性肿瘤影响红细胞输注效果的发生机制尚需进一步研究。针对相关影响因素制定个体化的输血治疗措施,以更好的提高临床输血治疗有效性。

弓形虫SYBR-Green1荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立SYBR-Green1荧光定量PCR检测弓形虫的方法,并进行实验室方法学评价。方法常规PCR扩增弓形虫RH株高度保守的B1基因部分序列,经TA克隆后转化入大肠埃希菌JM109中。提取重组质粒,PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green1荧光定量PCR标准曲线,并做重复性试验,对桂弓、B36虫株及恶性疟原虫、血吸虫基因组DNA、30份孕产妇标本1、221份无偿献血者标本进行检测。结果用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数0.997,平均试验间变异系数0.81%,检测桂弓、B36虫株均为阳性,而检测血吸虫、恶性疟原虫基因组DNA均为阴性;孕产妇检测阳性率16.7%,平均拷贝数为1.19×105cop-ies/μl;无偿献血者阳性率为0.74%,平均拷贝数为1.17×105copies/μl。结论成功建立了检测弓形虫B1基因的SYBR-Green1荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更快捷、敏感、准确,适合临床实验室及无偿献血者的筛查使用。

中国部分地区献血者中乙型肝炎病毒的基因型和亚型分布特征

目的研究中国献血者中感染HBV的基因型及亚型的分布特征，分析献血者中HBV基因型、亚型与献血者HBV血清学特征及病毒学特征的关系。方法从2008—2010年5家合作血液中心（血站）HBsAg确证阳性献血者中随机选取245份样本进行研究；通过S区扩增测序结合多对型特异性引物巢式PCR法分析HBV基因型，通过PreS／S区扩增测序或全基因组扩增测序分析HBV基因亚型。用s＇PSS11．0统计软件分析备地HBV基因型、基因亚型的分布，比较献血者中HBV基因型和亚型分布与慢性乙型肝炎患者的区别，分析HBV基因型、基因亚型与人口特征，病毒学特征和血清学特征的关系。结果245份样本中成功确定基因型228例，成功确定基因亚型200例。5地献血者感染中HBV的主要基因型为B型和C型，B型流行率高于C型，未见E．H型；基因亚型依次为B2，c2，D1，A1；在昆明献血者中发现了B基因型的1种新亚型B9；C型和c2亚型中的HBeAg阳性率分别显著高于B型和B2亚型中的HBeAg阳性率。结论我国献血者中感染的HBV的主要基因型为B型和c型，B型高于C型，且具有流行率增高的趋势，c型献血者中HBV复制活性高于B型。c型中的主要亚型为c2，B型中的主要亚型为B2。

昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者的HBV基因型分布

目的调查昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者HBV基因型的分布情况。方法采用多对型特异性引物,以套式PCR的方法对两地367份献血者HBsAg筛查阳性样本分型,根据HBV前s1基因和s基因区域内的保守序列设计出10条引物(2条外引物、8条内引物),并将其中8条内引物分为Ⅰ、Ⅱ组,分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV基因片段;将第2轮PCR产物做琼脂糖电泳,根据PCR产物片断大小判定基因型;分型结果以s基因直接测序法验证。结果昆明279份样本中成功分型214例,分型成功率76.7%,其中B型69例(32.2%),C型103例(48.1%),B、C混合型41例(19.2%);D型1例(0.5%);洛阳献血者的88份样本中成功分型72例,分型成功率81.8%,其中B型10例(13.9%),C型46例(63.9%),B、C混合型16例(22.2%)。经s基因测序法验证,该分型方法准确可靠。结论昆明、洛阳两地献血者人群中HBV携带者HBV基因型均以C型为主,并有一定比例的B型和B、C混合型,仅在昆明献血者中发现1例D型,未见A、E、F型。

4种交叉配血方法的试验效果比较

目的比较4种交叉配血方法的试验效果。方法采用抗球蛋白法、蛋白酶法、聚凝胺法及抗球蛋白卡式法,将1人份效价为1的IgG抗-D、-E、-C分别与若干带有相应抗原的红细胞做交叉配血试验,将33人份效价均为1的IgG抗-A、-B分别与1人份带有相应抗原的红细胞做交叉配血试验,将不含ABO以外抗体的血浆60人份、血清36人份分别与1人份O型红细胞做交叉配血试验。结果抗球蛋白法有3次、聚凝胺法及抗球蛋白卡式法各有1次试验出现假阴性结果;蛋白酶法、聚凝胺法及抗球蛋白卡式法各有2次试验出现假阳性结果;各种交叉配血方法的其它交叉配血试验结果均与预期结果相符。结论4种交叉配血方法的试验效果略有差异;采用不同方法同时对1个样本做交叉配血试验,可提高交叉配血试验结果的准确性,确保输血安全.

临床红细胞输注不良反应及其对输注效果的影响

目的分析红细胞输注不良反应发生的现状及影响因素,探讨不良反应的发生对输注效果的影响,为临床红细胞安全、有效输注提供依据。方法回顾性调查2005年1月-2005年10月洛阳地区红细胞输注病例的不良反应发生情况,分析其红细胞输注效果。结果2 205名患者共输血3 317次,发生输血反应39次。发生率为1.18%0有不良反应的红细胞输注有效率仅为61.54%,远远低于无不良反应的输注有效率84.53%,P<0.01。不同不良反应类型其红细胞输注有效率亦有差别,P<0.05。结论红细胞输注不良反应的发生影响输注效果,不同类型的不良反应影响程度不同,其发生机理有待进一步研究。

基因分型技术应用于疑难ABO血型的分型

目的研究基因分型技术在疑难ABO血型鉴定中的应用。方法采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型方法,对医院送检的16例患者疑难ABO血型抗原进行基因分型。结果 16例ABO基因分型分布为5例O1O1、1例O1O2、3例BO1、4例A1O1型、3例A1A。结论作为一种辅助方法,ABO血型基因分型技术可应用于检测ABO疑难血型。

昆明地区无偿献血者HIV感染的流行特征

目的分析昆明地区无偿献血者中HIV的流行状况,为招募和选择无偿献血者提供依据。方法收集昆明地区2000年以来献血者的相关资料,对确认HIV阳性献血者进行统计分析。结果昆明地区无偿献血人群中HIV呈高流行态势,且逐年上升,包括大学生在内的无偿献血主要社会群体中,均发现了相当数量的感染者。结论昆明地区HIV已经从高危人群向普通人群传播,并呈现扩散趋势;做好献血者招募和选择,对确保输血安全非常重要。

云南省无偿献血者弓形虫感染状况

目的了解云南省无偿献血者弓形虫感染情况,为制定科学的防治措施提供依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测献血者血清弓形虫IgM和IgG抗体,对血清学阳性和随机选取的200份血清学阴性血样进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并对两种方法的检测结果进行相关性分析。结果云南省无偿献血者弓形虫IgM、IgG阳性率分别为0.47%和20.15%,IgM与FQ-PCR阳性结果的相关性有显著性,IgG与FQ-PCR阳性结果的相关性无显著性。结论云南省无偿献血者弓形虫IgG阳性率较国内其他地区高,考虑成本因素,可采用检测弓形虫IgM的方法进行献血者筛查。

云南汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA基因多态性的分析

目的研究云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B基因和HPA1-17基因多态性,建立已知型血小板献血者基因数据库。方法分别采用PCR-SSOP和PCR-SSP方法对1 000名云南地区无血缘关系的汉族血小板献血者做HLA-A、B和HPA1-17系统基因分型,计算基因型频率、基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出HLA-A位点14个,HLA-B位点35个。A*02(35.81%)、A*11(35.42%)和A*24(17.72%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.87%)、B*40(60)(10.83%)和B*15(62)(9.78%)3个等位基因为云南汉族人群HLA-B座位的主要等位基因。每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a、17a基因;HPA-4a、7a-14a、16a、17a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、2、5、6主要以a/a纯合子居多,a/a基因型频率分别是0.989、0.960、0.990、0.980,没有b/b纯合子出现。在HPA1-17中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.392、0.360、0.248;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.339、0.467、0.194。经χ2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结论云南地区汉族血小板献血者HLA-A、B和HPA1-17基因频率与南方汉族接近,也呈现其自身特点。应建立本地区的血小板供者分型数据库。

云南地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因遗传多态性的分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库云南省分库HLA-A、B、DRB1基因多态性,分析云南地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因频率特征。方法采用流式序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probes,PCR-SSOP)结合直接测序法(PCR-sequence based typing,PCR-SBT)方法,对来自中国造血干细胞捐献者资料库云南分库的1 000名无血缘关系的捐献者进行基因分型,运用方根法计算HLA-A、B、DRB1基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出68种HLA基因特异型。其中HLA-A位点18个,HLA-B位点37个,HLA-DR位点13个。A*11(34.66%)、A*02(34.2%)和A*24(19.63%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-A座位的主要等位基因;B*46(12.83%)、B*40(60)(10.9%)和B*15(62)(9.78%)为HLA-B座位的主要等位基因;HLA-DRB1座位以DRB1*12(16.7%)、DRB1*15(16.46%)、DRB1*09(13.46%)和DRB1*04(12.77%)4个等位基因频率为高。最常见的A-B-DRB1单倍型是A*02-B*46-DRB1*09,频率是3.76%。结论云南地区人群的HLA基因多态性与南方汉族接近,但有其自身的一些特点。有必要在本地区开展造血干细胞捐献者的招募工作。

浅谈采供血机构记录(档案)管理程序的建立及实施

依据《血站管理办法》（简称《办法》）及《血站质量管理规范》（简称《规范》）要求，采供血机构应保存从献血者筛选、登记到血液采集、检测、制备、储存、发放和运输整个过程中的记录及采供血过程所产生的结果和数据,保证其可追溯性；采供血机构各业务岗位工作记录应当依照有关规定执行，应建立、实施记录管理程序和档案管理程序，并实现文件记录信息归档规范化、系统化、科学化管理。

弓形虫病的实验诊断研究进展

弓形虫是一种可感染所有温血动物并导致弓形虫病的细胞内寄生原虫。对弓形虫病的诊断可采用血清学试验、核酸检测(如PCR)、组织学检测寄生虫和/或其抗原(如免疫过氧化酶染色)或组织分离。其他较少使用的方法包括细胞培养、动物接种、弓形虫皮肤试验和抗原特异性淋巴细胞转化试验。现对细胞培养、动物接种、血清学方法和核酸检测方法检测弓形虫作一综述。

中华骨髓库云南分库HLA基因多态性分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库云南省分库HLA-A、B、DRB1基因多态性,及等位基因频率特征。方法采用流式PCR-SSOP方法对来自中国造血干细胞捐献者资料库云南分库的1000名无血缘关系的捐献者进行基因分型,运用直接计数法计算HLA-A、B、DRB1基因频率,并与其他人群进行比较。结果在云南地区人群中共检出了68种HLA基因特异型。其中HLA-A位点18个,HLA-B位点37个,HLA-DR位点13个。A*02(37.31%)、A*11(34.96%)和A*24(21.13%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-A座位的主要等位基因;B*46(13.1%)、B*15/62(11.8%)和B*40/60(9.7%)3个等位基因为云南分库捐献者HLA-B座位的主要等位基因;HLA-DRB1座位以DRB1*12(20.06%)、DRB1*04(14.44%)、DRB1*09(13.51%)和DRB1*15(13.11%)4个等位基因频率为高。结论云南造血干细胞捐献者资料库人群的HLA基因多态性与南方汉族接近,也有其自身的一些特点。