汉滩病毒糖蛋白G1 G2和核蛋白NP在痘苗病毒天坛株中的联合表达

将汉滩病毒７６／１１８株Ｍ、Ｓ片段分别插入转染质粒ｐＪＳＢ１１７５的Ｐ１１和Ｐ７．５启动子下游，构建成重组质粒ｐＪＳＢ１１Ｍ７．５Ｓ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染技术将重组质粒分别与痘苗病毒天坛株ＴＫ＋ｖｖ和表达Ｓ片段的重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５Ｓ进行共转染，免疫酶斑和蓝白斑法筛选并纯化，得到了重组病毒ｖＪＳＢ１１Ｍ７５Ｓ。Ｂｕｄｒ的选择压力试验表明，外源基因确实插入在ＴＫ基因区；ＰＣＲ及打点杂交证实了两个片段的插入；重组痘苗病毒基因组的部分序列分析显示，两个片段与各自的启动子连接正确；间接免疫荧光及放免沉淀证明了糖蛋白Ｇ１、Ｇ２和核蛋白ＮＰ的表达。

汉滩病毒 A9 株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定

为发展国产化肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒基因工程疫苗，选择了汉滩病毒Ａ９株Ｍ基因片段为目的基因，构建转染质粒ｐＪＳＢＡ９Ｍ。以携带Ｌａｃ基因的重组病毒为亲本，使表达载体ｐＪＳＢ－Ａ９Ｍ上的Ｍ片段与痘苗病毒内的Ｌａｃ基因重组，将Ｌａｃ置换成Ａ９Ｍ片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒，经ＰＣＲ扩增证实Ａ９Ｍ片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞，用抗糖蛋白单克隆抗体（ＨＣＯ２、１１Ｅ１０、３Ｄ５、１６Ｄ２）间接免疫荧光法检测，呈阳性反应；放射免疫沉淀法（ＲＩＰ）证实，表达产物可与抗Ｇ２的糖蛋白单克隆抗体出现特异性沉淀带；间接免疫荧光染色法检测表明，重组病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的血清与Ａ９株感染的ＶｅｒｏＥ６细胞有较好的特异性反应（１：３２０），说明Ａ９Ｍ片段在痘苗中表达成功。

汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较

采用逆转录－ＰＣＲ方法，用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列，发现二者均由１９７８个核苷酸组成，比７６／１１８株少６个核苷酸，并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较，发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示，在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域，弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同，而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测，Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关，而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代，同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。

基于系统仿真的医院消防疏散预案优化分析

医院的消防安全管理工作是医院管理工作的重要内容,也是医院QSHE管理模式的核心点。文章以某大型三级甲等医院为例,在医院建筑平面图的基础上,采用系统仿真的方法对于医院的消防环境进行建模,通过仿真软件模拟医院火灾后的疏散过程,并基于统计分析,对现有消防应急预案进行优化。该研究成果对于医院的消防安全管理具有积极的意义。

超声显像在输尿管结石治疗中的指导价值

目的 :探讨输尿管结石的超声显像在临床治疗中的指导价值。方法 :将资料完整的 98例输尿管结石的超声显像及其排石疗效进行总结、分析。结果 :有 71例排石治疗成功 ,2 7例排石治疗失败。宽径 >8mm结石几乎不能排出 ,<6mm的均能排出 ,介于 6～ 8mm的结石能否排出与其形态、边缘有密切关系。结论 :超声显像对输尿管结石的详细准确报告 ,可作为临床医师制定和选择治疗方案。

汉滩病毒PS-6株的分离及其生物学性状研究

目的 从病人血清分离汉坦病毒Ⅰ型毒株 ,为双价疫苗的配伍提供更好的候选株。方法 从陕西HFRS患者血清 ,按常规法分离汉坦病毒。用系列单克隆抗体、空斑减少中和试验、RT PCR及部分核苷酸序列分析等检定 ,确证所分离毒株的血清 (或基因 )型别。结果 从 17份HFRS患者血清中成功地分离到 1株汉坦病毒 ,定名为PS 6株。经上述方法全面鉴定确定其为汉滩病毒 (即Ⅰ型病毒 )。该毒株有较强的繁殖力 (毒力 )及较好的抗原性 ,其免疫血清对来源于不同地区的Ⅰ型病毒有较好的中和活性。结论 PS 6毒株有可能成为Ⅰ型病毒疫苗候选株 ,为双价或多价疫苗配伍。

汉坦病毒弱毒株的选育

为了研制肾综合征出血热减毒活疫苗,研究病毒毒力,改进了汉坦病毒感染环磷酰胺处理地鼠动物模型,即检测地鼠感染病毒后出现的类似于人发病过程的四期经过。利用该动物模型从汉坦病毒(Ⅰ型)A9毒株中,采用空斑选育法筛选,获得1株对乳小鼠丧失脑内致死力及对环磷酰胺处理地鼠丧失致病力的弱毒株。弱毒株感染乳小鼠及环磷酰胺处理地鼠后,在肝、脾、肾、肺及脑中呈"一过性"繁殖,用免疫荧光法检测不到明显的病毒抗原,但采用逆转录-聚合酶链反应可检测到特异性病毒核酸。

汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达

采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。

试论市场经济条件下工商行政管理职能

建立社会主义市场经济体制,是一项艰巨而宏大的社会系统工程。构建起稳定的、成熟的市场经济体制,是一个全新的探索过程。从计划经济体制到市场经济体制转变的实质,就是要从计划配置资源为基础,转向以市场配置资源为基础,这是对传统经济体制的根本变革,它意味着政府、市场、企业的职能和行为都要重塑。在建立。