布鲁氏菌T4SS效应蛋白BspJ的生物学功能研究

为探究布鲁氏菌IV型分泌系统(T4SS)效应蛋白BspJ的生物学功能,本研究利用同源重组和载体回补方法,以粗糙型牛种布鲁氏菌(RB51)为亲本株,构建布鲁氏菌BspJ基因缺失菌株(ΔBspJ)与BspJ基因回补株(pBspJ),并经PCR和测序鉴定。将ΔBspJ与p BspJ连续传代至15代,经PCR鉴定ΔBspJ与pBspJ的遗传稳定性,结果显示,正确构建了ΔBspJ与pBspJ,且各代次ΔBspJ均未扩增出目的条带、p BspJ均扩增出目的条带,二者遗传稳定性好。将RB51、ΔBspJ、pBspJ分别于酸性(p H2.5/37℃)、碱性(pH11.5/37℃)、高盐(1.5 mol/L NaCl/37℃)及热休克(pH7.0/50℃)等不同体外条件下培养,统计各菌株生存率;将RB51、ΔBspJ、p BspJ分别以感染复数(MOI)100侵染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)后,采用q RT-PCR检测凋亡相关因子基因BAX、BCL2、CASP3、CASP8及炎症相关因子基因CDK2、m TOR、TRAF3IP2、P62、IL-8的转录水平;另外,于侵染后24 h、48 h时分别裂解上述3种侵染细胞,计数各菌株的细菌菌落总数(CFU),分析各菌株的胞内生存能力。结果显示,相比于RB51,ΔBspJ在pH2.5/37℃的TSB液体培养基中的生存率极显著下降(P<0.01),在pH11.5/37℃、pH7.0/50℃、1.5 mol/L NaCl/37℃的TSB液体培养基中的生存率极显著下降(P<0.001);相比RB51侵染的RAW264.7细胞,ΔBsp J侵染的RAW264.7细胞中BAX、CASP3、CASP8基因的转录水平极显著升高(P<0.001),BCL2基因的转录水平极显著下降(P<0.001),TRAF3IP2基因的转录水平极显著升高(P<0.0001),P62基因转录水平极显著升高(P<0.01),IL-8、mTOR基因的转录水平显著升高(P<0.05),CDK2基因的转录水平无显著差异(P>0.05)。相比RB51,ΔBspJ的胞内生存能力在侵染24 h后显著下降(P<0.01),48 h后极显著下降(P<0.001)。上述试验中亲本株RB51组与回补株p BspJ组检测结果均无显著差异(P>0.05)。综上所述,本研究首次证实BspJ参与调控布鲁氏菌酸碱稳态和渗透压稳态,揭示了BspJ通过抑制宿主细胞的凋亡与炎症反应显著提高布鲁氏菌的胞内生存能力,为T4SS效应蛋白BspJ对布鲁氏菌致病机制的研究奠定了基础。

数字化可摘局部义齿在肯氏Ⅲ类缺损中的临床评价

目的 采用口内扫描结合选择性激光熔融(selective laser melting,SLM)技术,制作肯氏Ⅲ类数字化可摘局部义齿(removable partial denture,RPD),并评价其适合性及疗效。方法 招募肯氏Ⅲ类牙列缺损患者11例,使用口内扫描仪制取数字化印模,结合计算机辅助设计以及SLM技术完成RPD制作。初戴完成后对就位情况、支托密合情况等10个项目进行检查和评分,并采用硅橡胶加衬法对义齿组织面与口内软组织间存在的间隙(即适合性)进行评估。结果 肯氏Ⅲ类数字化RPD大连接体、缺牙区基托部分的适合性分别为(366.3±152.4)μm以及(241.0±132.4)μm;义齿就位情况、稳定性及各部位密合程度良好,无压痛发生,但其中5副义齿固位力稍小,8副义齿需要调[牙合]。结论 口内扫描结合SLM技术制作的RPD疗效基本满足肯氏Ⅲ类缺损的临床需求。