牛初乳sIgA分离纯化及其检测方法的研究进展

利用牛初乳开发新的功能性食品和类母乳化食品是当前研究热点,而在牛初乳中,sIgA是一种重要的免疫球蛋白,因此分离及检测牛初乳中sIgA具有重大现实意义。目前分离纯化方法主要有亲和色谱法、嗜硫色谱法、离子交换法、超滤法、酶解法等,检测方法有高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法、辣根过氧化物酶标记凝集素法、免疫胶体金检测法等。文章对sIgA分离纯化及检测方法进行了简要介绍。

牛初乳sIgA的分离纯化

为进一步开发利用牛初乳sIgA等生物活性物质,采用盐析、超滤、凝胶过滤层析等技术从牛初乳中分离纯化获得sIgA,采用非还原SDS-PAGE和Westernblot对目标产物进行定性定量鉴定。结果表明,所制备sIgA纯度达85.3%,该制备方法为sIgA工业化生产提供了理论和实验依据。

反相高效液相色谱法检测牛初乳乳铁蛋白的方法研究

为了建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定牛初乳乳铁蛋白的含量,采用Kromasil C4色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水-三氟乙酸(80:20:0.1)流速0.6 mL/min;检测波长:220 nm;柱温:25℃。乳铁蛋白的检测线性范围为0.025-1 mg/mL,回归方程为Y=734105X-8035.9,相关系数r=0.999,平均回收率为99.58%,相对标准偏差为1.3%。此方法操作方便、快捷、精密度好、结果准确可靠、重复性好。

牛初乳sIgA等电点的测定

采用等电聚焦电泳法测定牛初乳sIgA的等电点。牛初乳sIgA的pI为5.02-5.67,比相关报道更加精确。回归方程:y=0.7543x+3.1635,相关系数r=0.9989,表明线性关系良好,为牛初乳sIgA的离子交换层析制备条件的选择提供了可靠的理论依据。

牛初乳sIgA的制备与检测

牛初乳sIgA与人初乳sIgA具有相同的免疫源性,对提高机体的免疫力有着重要的作用。采用盐析、超滤、凝胶过滤层析和离子交换层析的方法进行分离sIgA,并用HPLC进行检测,制得的sIgA纯度为75.38%,收率约为54%,本研究为实现牛初乳sIgA的工业化生产提供了有益的探索。

牛初乳IGF-Ⅰ的制备工艺研究

从牛初乳中制备高纯度、高收率IGF-Ⅰ。以新鲜牛初乳为原料,采用除脂后酸法沉淀酪蛋白、盐析、超滤、离子交换层析等方法,制备牛初乳IGF-Ⅰ。结果表明,制备的牛初乳IGF-Ⅰ纯度为65.51%,收率为71.98%。本方法可以大量制备高纯度的牛初乳IGF-Ⅰ。

高效液相色谱法检测牛初乳sIgA方法研究

建立高效液相色谱法测定牛初乳sIgA含量。采用TSK-G3000PWxl凝胶色谱柱以0.02mol/L,pH6.8的磷酸盐缓冲液为流动相,流速0.6mL/min,检测波长280nm。结果表明,牛初乳sIgA纯度为52.56%,回收率为74%。说明此方法方便、快捷、准确、可靠、重现性好,可用于牛初乳sIgA含量的检测。