烟酸通过降低氧化应激水平提高绵羊精子低温保存效果

低温保存可有效延长精子体外保存时间,提高精液利用效率。但是长时间处于低温环境下会造成活性氧(reactive oxygen species,ROS)持续累积,诱发精子氧化应激,降低质膜完整性,造成精子活力下降。旨在研究绵羊精子4℃保存条件下,稀释液添加不同浓度烟酸(nicotinic acid,NA)对精子的保存效果,并探讨其作用机理。采集健康的成年德国美利奴种公羊精液(n=6),以基础稀释液中添加5、10、20 mmol·L^(-1)NA为保护剂,拟阐明NA对绵羊精子的保护作用。通过精子分析仪检测精子活力、运动性能,精子低渗膨胀试验检测质膜完整性,荧光染色检测精子中ROS水平、线粒体功能,试剂盒检测H_(2)O_(2)含量、抗氧化因子活性水平及ATP水平。结果表明:与10%BSA对照组相比较,添加NA处理后精子的存活时间可延长至120 h,其中10 mmol·L^(-1)NA NA处理后第72小时精子活力仍可达到70%以上;在NA处理后24~72 h时,绵羊精子可保持更高的活力、运动性能与及质膜完整性(P<0.05),而且降低了精子中的ROS水平(P<0.05)。在NA处理后第72小时,精子中H_(2)O_(2)含量显著低于10%BSA对照组(P<0.05),而精子中抗氧化因子(CAT、GSH-PX、T-SOD、T-AOC)活性水平、线粒体功能以及ATP水平均显著优于10%BSA对照组(P<0.05)。综上,在4℃保存条件下,绵羊精液低温稀释液中添加NA,可提高精子的活力、运动性能、质膜完整性和抗氧化能力,并改善精子线粒体功能和ATP生成,有效提升绵羊精子低温保存效果。

过表达TLR4基因绵羊瘤胃与肠道宏基因组分析

胃肠道微生物生态系统参与机体物质代谢、生物屏障、免疫调控等生理过程,对维持宿主健康具有重要作用。Toll样受体4(Toll-like Receptor 4,TLR4)除在机体天然免疫过程中扮演关键角色之外,胃肠道中TLR4基因的表达可能参与微生物区系结构的塑造。本研究利用前期获得的过表达TLR4基因绵羊,基于宏基因组测序技术探讨TLR4基因高水平表达对绵羊胃肠道微生物群体多样性、丰度及生物学功能的影响。结果表明:TLR4基因过表达后对绵羊瘤胃(P=0.35)和肠道(P=0.56)中微生物Alpha多样性无显著影响;胃肠道中微生物优势菌群(相对丰度>1%)在门、属、种不同分类水平上的区系结构无显著变化。进一步分析TLR4基因过表达对胃肠道中革兰氏阴性菌群(相对丰度<1%)组成的影响,在瘤胃和肠道中分别鉴定出8个和13个差异菌属(P<0.05),33个和32个差异菌种(P<0.05);其中,Helicobactersp.MIT05-5293(P=0.03)和Yersinia pseudotuberculosis(P=0.048)在瘤胃中存在显著差异,Campylobacter hominis(P=0.048)和Escherichia coli(P=0.04)在肠道中存在显著差异。同时,TLR4基因过表达对胃肠道中KEGG level 1和level 2途径的主要通路无明显影响,仅在肠道中KEGG level 2途径的神经变性疾病通路存在差异(P=0.04);而在KEGG level 3途径,瘤胃和肠道中分别有11条和6条非关键通路存在差异。综上,TLR4基因高水平表达对绵羊胃肠道微生物群体多样性、丰度及生物学功能未造成广泛影响,胃肠道微生物生态系统整体上仍处于稳定状态。

N-乙酰半胱氨酸对不同直径卵泡来源猪卵母细胞体外成熟效果的影响

旨在在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加N-乙酰半胱氨酸(NAC),揭示NAC对不同直径卵泡来源卵母细胞体外成熟效果的影响,解析其对氧化还原平衡的调控作用。本研究收集猪卵巢上大腔(4~6 mm)、中腔(2~4 mm)、小腔(1~2 mm)卵泡中的卵母细胞,在以上3种卵泡来源猪卵母细胞的体外成熟培养液中,均分别添加0、1、2、4 mmol·L^(-1)浓度的NAC处理,评价卵丘扩展指数、第一极体排出率等成熟指标,检测卵母细胞中ROS水平、谷胱甘肽(GSH)含量和抗氧化基因的表达水平。结果表明,NAC处理对大腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数和ROS水平无显著影响(P>0.05),对大、中腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率无显著作用(P>0.05);而适量浓度的NAC(2 mmol·L^(-1))处理可显著提高中、小腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数(P<0.05),降低ROS水平(P<0.05),提升小腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率(P<0.05)。同时,NAC处理对大、中腔卵泡来源卵母细胞中的GSH含量和抗氧化基因SOD、CAT、Prdx2、Prdx6的表达水平无显著影响(P>0.05),而适量浓度的NAC(2 mmol·L^(-1))处理可显著提高小腔卵泡来源卵母细胞中的GSH含量(P<0.05),上调抗氧化基因SOD、CAT的表达水平(P<0.05)。综上所述,适当浓度的NAC(2 mmol·L^(-1))处理可以通过缓解氧化应激提高小腔卵泡来源卵母细胞的体外成熟效果。

优良的BMPR-IB基因型可提高绵羊冷冻胚胎的受胎效果

以控制BooroolaMerino羊高繁殖力的BMPR-IB基因为候选基因,以小尾寒羊及其杂交羊、东北半细毛羊、澳洲美利奴羊、德国肉用美利奴羊、萨福克羊、特克塞尔羊、夏洛莱羊为试验对象,采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行基因单核苷酸多态性(SNP)检测和基因型分析,同时研究基因对高繁殖力的影响.研究结果表明:小尾寒羊及其杂交羊、东北半细毛羊和夏洛莱羊群体中发现了与BooroolaMerino羊相同的A746G碱基突变,而小尾寒羊及其杂交羊群体的B等位基因频率明显高于其他2个品种.另外4个品种中未发现此突变.携带B等位基因的群体较非携带B等位基因群体排出更多的卵子,排卵后黄体直径较小.移植入冷冻胚胎后,++、B+和BB3种基因型群体的妊娠率分别为38.78%、45.71%和66.67%.由此推断,BMPR-IB基因突变很有可能从增加卵巢排卵数和提高胚胎着床及妊娠建立效率两个方面同时影响绵羊高繁殖力性状.所得BB型群体冻胚移植妊娠率明显高于++和B+型群体,已接近鲜胚移植水平,通过PCR-RFLP方法进行基因型分析,选用合适基因型群体作为胚胎移植受体,有可能为提高绵羊胚胎移植受胎率提供新的方向.

过表达TLR4基因绵羊对口蹄疫疫苗(O型)免疫效应研究

利用过表达TLR4转基因绵羊模型,注射口蹄疫疫苗(O型),建立口蹄疫灭活疫苗(O型)免疫模型,通过TLR4表达水平、血常规、T淋巴细胞亚群分群、口蹄疫特异性抗体水平,阐明过表达TLR4基因绵羊(n=7)和对照绵羊(n=7)血液中免疫细胞组成和抗体水平动态变化趋势。研究发现,免疫后21 d内,TLR4基因表达水平先降后升;非转基因组白细胞数量逐渐减少,转基因组白细胞数量呈现波动变化,但两组间差异不显著(P>0.05);免疫后淋巴细胞占比略降,单核细胞、中性粒细胞占比在转基因组与非转基因组间差异不显著(P<0.05);免疫后第14天,转基因组CD4^+/CD8^+细胞比值显著高于非转基因组(P<0.05);免疫后49 d内转基因组抗体水平略高于非转基因组,但未达差异显著(P>0.05);研究结果将为解析TLR4基因在口蹄疫免疫应答过程中作用提供理论依据。

棕榈酸对绵羊单核巨噬细胞炎性因子和氧化应激水平的影响

棕榈酸(Palmitic acid,PA)是一种典型长链饱和脂肪酸,具有一定脂毒性,可引起细胞内过度炎症反应和氧化应激。研究旨在揭示PA对绵羊单核巨噬细胞中炎性因子表达和氧化应激水平影响,探讨TLR4基因介导作用,分析亚麻酸(Linoleic acid,LNA)可能存在的缓解效应。结果表明,在1 mmol·L^(-1)PA处理4 h后,TLR4基因的表达水平显著上调(P<0.05);IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-6等炎性因子表达水平显著高于对照组(P<0.05);ROS和iNOS等氧化相关指标显著升高(P<0.05),SOD、CAT、T-AOC等抗氧化相关指标显著降低(P<0.05)。利用TAK242抑制TLR4基因后,其表达水平显著下调(P<0.05),TNF-α和IL-6炎性因子表达水平极显著下调(P<0.01),ROS和iNOS表达水平下降、T-AOC表达水平升高(P<0.05)。PA与LNA共处理后,TLR4基因表达水平显著下调(P<0.05),TNF-α和IL-6炎性因子表达水平极显著下调(P<0.01),ROS和iNOS表达水平下降、T-AOC表达水平升高(P<0.05)。研究表明,PA处理后绵羊单核巨噬细胞炎性因子和氧化应激水平升高,TLR4基因在此过程中起重要介导作用,LNA可能在一定程度上缓解PA诱发的细胞炎症反应和氧化应激。

豌豆在畜禽饲料中的应用

本文针对豌豆的营养价值及其在猪、牛、羊及家禽饲料中的应用研究进行了综述。

绵羊群体中不同布鲁氏菌病血清学诊断方法比较研究

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌属细菌(Brucella)引起的人畜共患传染病,在世界范围内广泛分布,造成重大经济损失和严重公共健康问题。利用菌体细胞或光滑型脂多糖(S-LPS)作抗原,检测待检动物血清中抗体血清学诊断方法,是布鲁氏菌病检疫主要手段。但目前尚无完美的单一检测方法用于动物布鲁氏菌检测。本研究针对RBT,SAT,i ELISA和c ELISA四种常用检测方法,在绵羊群体中(n=204),利用敏感性、特异性、Youden指数、AUC值等参数评估其准确性。应用单一方法检测时,i ELISA敏感性最高(93.15%);SAT特异性最高(98.47%);i ELISA的Youden指数和AUC值最大,分别达到88.75%和0.94。四种不同检测方法中,i ELISA和c ELISA之间符合率最高(87.25%),SAT和i ELISA之间Kappa值最高(0.72)。两种方法组合作平行试验时,所有组合以SAT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到92.27%和0.96;系列试验时,RBT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到83.70%和0.92。研究结果将为布鲁氏菌病净化过程中检测组合的筛选提供参考,从而提高诊断准确性。

阉割对公猪生长性能和胴体品质的影响

【目的】探讨阉割对生长期公猪的生长、胴体性状和肌肉品质的影响。【方法】选取36头全同胞雄性仔猪,根据配对原则分成18对,每对随机抽出1头在5周龄时阉割,另1头作对照。5、12、21和30周龄时空腹称重,采集血液测定血清睾酮含量;21、30周龄屠宰测定胴体性状,采集背最长肌样品,用近红外扫描和气相色谱-质谱分析方法测定肌内脂肪含量和脂肪酸组成。【结果】12、21和30周龄时,未去势公猪的血清睾酮含量极显著高于去势公猪(P<0.01);21周龄时,去势公猪的体重高于未去势公猪(P>0.05),但在30周龄时,未去势公猪体重极显著高于去势公猪(P<0.01),21和30周龄时,去势公猪平均膘厚、板油重和脂肪率极显著高于未去势公猪,平均皮厚和瘦肉率极显著低于未去势公猪(P<0.01);30周龄时,未去势公猪胴体重、前蹄重和眼肌面积显著地高于去势公猪(P<0.05);21周龄时去势公猪肌内脂肪含量高于未去势公猪(P<0.05),背最长肌肌肉部分饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)极显著高于未去势公猪(P<0.01)、但多不饱和脂肪酸(PUFA)极显著低于未去势公猪(P<0.01),公猪血清睾酮含量和肌内脂肪含量之间无显著相关性(P>0.05),但与C16:0、C18:1、MUFA及C18:0和PUFA存在极显著负相关和正相关(P<0.01)。【结论】公猪阉割后,血清睾酮水平降低,从而影响公猪的生长和胴体性状以及肌肉脂肪酸组成。

微量元素铜在牛生长发育中的作用

微量元素铜是动物生命活动所必需的微量矿物元素之一。文章就铜在牛生长性能、脂代谢、免疫机能、繁殖性能、毛发代谢及骨组织代谢过程中发挥的作用进行了综述。

舍饲种公羊的选择、管理与利用

种公羊是羊场开展正常繁殖工作的基础,起的作用是放大效应,也就是种公羊饲养得好,其繁殖效果正向放大;如果种公羊出现问题则反向放大,所以种公羊的选择和管理利用至关重要。

舍饲绵羊人工授精的组织与实施

随着绵羊舍饲技术和养殖条件的逐步成熟,绵羊人工授精技术的作用越发凸现。就舍饲饲养模式下的绵羊人工授精组织和实施过程予以阐述。主要从母羊的饲养管理、公羊的采精、试情羊的利用和输精过程进行论述。以便使舍饲肉羊场更好地开展绵羊人工授精工作。

营养因素对母羊繁殖的影响

营养物质对绵羊正常的生理机能是必需的，一切的营养物质对羊的繁殖总有直接或间接的影响。在养羊生产上，常见的营养缺乏易引起的繁殖障碍，如饲料能量的缺乏、蛋白质缺乏、维生素缺乏和矿物质缺乏等引起母羊繁殖力下降。另外，营养过剩也会使绵羊的生育力下降，以致绵羊营养性不孕不育。

影响山羊超数排卵生产原核胚的因素

为了进一步提高并稳定山羊原核胚生产的效率，本文对影响山羊原核胚生产的左右卵巢、体重、FSH剂量、超排季节等影响因素进行了系统分析。结果表明：（1）山羊在超数排卵时，左右卵巢排卵数差畀不显著；（2）山羊体重在25～50kg对超排结果没有差异；（3）山羊超排FSH剂量与体重之比（IU／kg）在5．5～7．0之间效果差异不显著，可以取得比较好的超排效果；（4）山羊在春季和冬季的超排效果没有差异。

激素的不同给药方式对绵羊超数排卵的影响

胚胎移植技术是绵羊快速扩繁和引种的最好的技术方法，在解决胚胎来源的方面，比较多的还是超数排卵技术，而影响绵羊超数排卵效果的因素很多，迄今其获卵效果还不是十分稳定，其药物因素仍是很重要的影响因素之一。卵泡素（FSH）能够刺激有腔卵泡的继续生长和发育成熟，在母畜发情前期以减量法多次注射FSH，可有效促进准备退化的卵泡发育成熟，使排卵数量超过正常排卵数，尤其适用于单胎动物。大部分关于FSH激素药物的研究，都集中在药物纯度和其计量上，在于注射方案上的研究很少见。

绵羊IGF-Ⅰ基因剪接异构体克隆及生物信息学分析

胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor I,IGF-Ⅰ)是机体重要的生长因子,可作为培育高产、优质的毛用、肉用家畜新品种时重要的候选基因,但其在转录过程中存在着选择性剪接现象。本研究成功克隆得到了绵羊IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Ea型和Eb型两种剪接异构体,并结合生物信息学方法对其结构与功能进行分析。研究结果表明,克隆得到的绵羊IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Ea型与GenBank数据库信息相一致,预测编码154个氨基酸;IGF-Ⅰ基因Ⅰ类Eb型为新发现的剪接异构体,预测编码188个氨基酸。信号肽分析显示两剪接异构体均在49~50位氨基酸处存在潜在的信号肽切割位点;系统进化树分析显示两种剪接异构体在进化上均与哺乳动物更为接近,与灵长类、啮齿类和两栖类较远;蛋白理化性质分析显示,两剪接异构体在等电点及亲疏水性上存在部分差异,但总体上表明疏水性较弱,亲水性较强,为亲水性氨基酸;亚细胞定位结果表明二者均为分泌型蛋白质,主要存在于分泌途径;两剪接异构体均存在两个跨膜螺旋,但不存在明显的跨膜区,不是跨膜蛋白,二者含有不同数量的糖基化位点和磷酸化位点;蛋白质二级结构分析显示两剪接异构体均以α-螺旋为主,蛋白质三级结构分析显示为明显的弯曲状螺旋结构。

LPS诱发绵羊精子活力降低及TLR4基因的介导作用

精子在生殖道内运行过程中易受到革兰氏阴性菌侵染,导致精子活力下降,进而造成受精能力降低。本研究采用上浮法获得高活力、高纯度的绵羊精子样品(n=8),以LPS(1μg/mL)作为模拟物处理精子,阐明其对精子活力、线粒体结构及功能的影响,并揭示TLR4基因在此过程中的介导作用。结果表明:LPS处理后6 h时精子活力下降(P<0.001),TLR4基因表达上调(P<0.001),同时其表达位置由头部向尾部扩展;过表达TLR4基因对精子活力无显著影响,而利用TAK-242抑制TLR4信号通路缓解了LPS诱发的精子活力下降(P<0.001)。LPS处理后精子线粒体出现不规则排列、膜间隙肿胀、定向障碍和大量的液泡结构,同时膜电位水平降低和ATP减少(P<0.001);过表达TLR4基因对线粒体膜电位和ATP的产生无显著影响,而TAK-242处理改善了LPS诱发的线粒体膜电位水平降低(P<0.05)和ATP产生减少(P<0.001)。本研究表明革兰氏阴性菌细胞壁成分—LPS可诱发绵羊精子活力降低、线粒体结构及功能受损,TLR4基因在此过程中扮演着重要的介导作用。

绵羊IGF-Ⅰ基因Ⅱ类变异剪接体生物信息学及组织表达分析

为明确绵羊IGF-Ⅰ基因变异剪接体的生物学特性及其在生长发育过程中的功能,本研究成功获得了IGF-Ⅰ基因Ⅱ类的2种变异剪接体(Ea和Eb型),利用生物信息学方法预测分析2种变异剪接体的结构特性,并探讨其在不同组织中的表达规律。结果表明:Ea和Eb型由同一基因通过选择性剪切形成,均是绵羊中新发现的类型,预测其分别编码138 aa和172 aa,2种变异剪接体的信号肽剪切位点、进化同源性、亚细胞定位、蛋白质空间结构预测结果类似,但二者包含不同的共价修饰位点。组织表达分析表明,2种变异剪接体在肝组织中表达量均最高,其次为脂肪、胃、睾丸、肌肉和皮肤组织,心、脾、肺、肾、肠、膀胱组织的表达水平较低;在胃中,羔羊期2种变异剪接体表达水平均极显著高于成羊期(P<0.01),在睾丸中,羔羊期IGF-Ⅰ基因Ⅱ类Ea型表达水平显著高于成羊期(P<0.05)。总体上来看,在各种组织中IGF-Ⅰ基因Ⅱ类Ea型的表达水平高于Eb型,为优势转录本类型。

不同规格通风笼储存的玉米秸秆对体外发酵的影响

为测定不同规格的通风笼玉米秸秆对体外发酵的影响,选择最适规格的通风笼达到对玉米的优化存储,本试验选取了1、0.8、0.5 m宽通风笼的玉米秸秆为试验组,对照组为传统堆垛法玉米秸秆,每组有三个平行,分别在3、6、12、24、48、72 h测量玉米秸秆体外发酵产气量;在72 h测量不同规格通风笼玉米体外发酵p H、挥发性脂肪酸(VFA)与氨态氮的含量。试验结果表明:通风笼法和传统堆垛法的产气量在整体上有显著差异,1 m宽通风笼玉米秸秆的产气量与传统堆垛法玉米秸秆的产气量相比在6个时间点都没有显著差异(P>0.05);0.8 m宽通风笼玉米秸秆的产气量与传统堆垛法玉米秸秆的产气量相比在3 h和6 h分别提高28.6%和40%(P<0.05),其他时间点无显著差异(P>0.05);0.5 m宽通风笼玉米秸秆的产气量与传统堆垛法玉米秸秆的产气量相比3 h时产气量提高35.7%(P<0.05),其他时间点均无显著差异(P>0.05);三种规格的通风笼产气量相比,0.8 m宽通风笼玉米秸秆的产气量要高于其他两组;传统堆垛法玉米秸秆体外瘤胃发酵的p H极显著高于通风笼法(P<0.01),说明传统堆垛法不如通风笼的发酵效果好;不同规格通风笼储存的玉米秸秆体外瘤胃发酵的p H无显著性差异(P>0.05);氨态氮浓度以及乙酸、丙酸、丁酸的浓度,四种储存方法均没有显著性差异(P>0.05)。