醌型二氢生物喋呤还原酶基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞葡萄糖调节蛋白75表达的影响

目的探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(QDPR)基因对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52E葡萄糖调节蛋白75(GRP75)的影响及其在DN中的可能作用机制。方法构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E模型,分别予5.4 mmol/L和30 mmol/L葡萄糖培养基培养,Western blot检测GRP75在OLETF大鼠肾皮质及细胞模型各组的表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果与LETO鼠比较,OLETF大鼠肾皮质GRP75含量降低[(1.53±0.27)vs(0.79±0.26),P<0.01];与NRK-52E组比较,NRK-52E高糖组的GRP75含量降低[(0.62±0.03)vs(0.46±0.06)]、G0/G1期细胞增多[(39.80±1.31)%vs(50.35±0.33)%]、S期细胞减少[(48.55±1.85)%vs(37.17±0.10)%](P<0.05);过表达QDPR使高糖环境下GRP75含量降低[(0.85±0.10)vs(0.45±0.16),P<0.05]、G0/G1期细胞增多[(43.73±0.48)%vs(61.87±0.17)%,P<0.01],S期细胞减少[(42.42±0.66)%vs(25.29±0.12)%,P<0.01];敲低QDPR不影响GRP75表达量与细胞周期。结论 GRP75在DN模型中含量减少,QDPR基因可能通过GRP75及细胞周期影响DN发生发展。

Gαi2在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及意义

目的探讨Gαi2在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中的表达变化及意义。方法选用36只SD大鼠,随机分为UUO模型组(n=18)以及对照组(sham组,n=18)。分别于术后3、7、14d处死(每个时间点n=6),分成UUO3d组、UUO7d组和UUO14d组。取左肾组织留存。分别采用HE染色和Masson染色法观察每个时间点肾脏组织病理变化,用免疫组织化学法和Western blot法检测每个时间点肾脏组织中Gαi2和Ⅰ型胶原的表达。结果 HE和Masson染色结果显示,随着梗阻时间延长,大鼠肾组织损伤逐渐加重,胶原沉积逐渐增多。免疫组织化学染色结果显示随着梗阻时间延长,大鼠肾脏组织中的Gαi2和Ⅰ型胶原含量逐渐增多,UUO组各组之间以及与对照组相比差异显著(P<0.05)。Western blot结果显示,随着梗阻时间延长,大鼠肾脏组织中的Gαi2和Ⅰ型胶原表达逐渐增高,UUO组各组之间以及与对照组相比差异显著(P<0.05)。相关性分析结果显示,随着大鼠肾脏梗阻时间延长,Gαi2和Ⅰ型胶原表达均与UUO大鼠肾间质胶原沉积呈正相关,Gαi2与Ⅰ型胶原表达呈正相关。结论在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织中Gαi2和Ⅰ型胶原表达呈时间依赖性,随着梗阻时间延长二者含量逐渐增多,Gαi2可能在肾间质纤维化的发生发展过程中起到重要作用。