系统性红斑狼疮患者外周血中性粒细胞PD-L1表达和临床意义

目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中性粒细胞上的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测77例SLE患者和43例健康对照者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,比较SLE组和对照组之间以及SLE活动组和稳定组中性粒细胞表面PD-L1表达百分率,分析其与SLE临床表现及实验室检查指标的相关性,并检测10例SLE患者治疗前后中性粒细胞PD-L1的表达。结果① SLE组外周血PD-L1+中性粒细胞百分率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.000 1);活动组PD-L1+中性粒细胞百分率高于稳定组,差异有统计学意义(P=0.002 7)。② SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与SLE疾病活动性评分(SLEDAI)、抗核抗体(ANA)、免疫球蛋白G(IgG)、红细胞沉降率(ESR)呈正相关性,与红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)浓度、红细胞压积(HCT)呈负相关性,对这些呈线性相关的变量进行线性回归分析显示SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与ANA和ESR的线性回归差异有统计学意义(P=0.020、0.005)。以外,在低补体3(C3)组和低白细胞计数(WBC)组中,SLE患者PD-L1+中性粒细胞百分率与C3、WBC呈负相关性。SLE患者中低WBC、低血小板计数(PLT)、高中性粒细胞数、高中性粒细胞百分比阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。③ SLE患者发热、皮肤表现、低白细胞血症、低红细胞血症、低血小板血症、贫血和血尿阳性组PD-L1+中性粒细胞百分率均高于对应的阴性组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。④ SLE患者有效治疗后PD-L1+中性粒细胞百分率降低(P<0.01)。结论SLE患者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达异常,与疾病的活动性和严重程度以及抗体产生有关。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1对巨噬细胞极化影响的研究

目的研究长链非编码RNA(lnc RNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对巨噬细胞极化的影响。方法采用佛波酯诱导人THP-1细胞分化为成熟的巨噬细胞,IFN-γ/LPS刺激诱导M1型极化,IL-4刺激诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测各组细胞中MALAT1的表达。si RNA干扰巨噬细胞MALAT1表达,加入IL-4继续诱导M2型极化,RT-q PCR检测极化相关基因表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-12、CCL22、IL-10的水平。si RNA干扰M2型巨噬细胞MALAT1表达,研究其对M2极化表型的影响。结果 MALAT1在M2型巨噬细胞中表达显著升高,M1向M2极化改变MALAT1表达升高,而M2向M1极化改变MALAT1表达降低。MALAT1干扰后,IL-4诱导的M2型巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低;CXCL10、CXCL11、HLA-DR表达升高,CCL17、CCL18、CD163表达降低。M2型巨噬细胞MALAT1干扰后,TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低。结论 MALAT1参与调控巨噬细胞极化,干扰MALAT1表达有效抑制M2型巨噬细胞极化,促进M1型巨噬细胞极化。

肺结核患者外周血单个核细胞中lncRNA NEAT1的检测及临床意义

目的探讨肺结核患者外周血单个核细胞(PBMC)中长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测65例肺结核病患者(结核组)及30例健康体检者(健康对照组)PBMC中lncRNA NEAT1的表达量,分析其与结核病发生发展以及转归的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示lncRNA NEAT1在肺结核患者PBMC中的相对表达水平是健康对照组的4.90±0.72倍,差异有统计学意义(P<0.01)。LncRNA NEAT1在初治和复治病例中表达差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA NEAT1在肺部有无空洞及空洞数量分组之间表达差异有统计学意义(P<0.05),即lncRNA NEAT1随空洞累及范围的增加而升高。肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达量随着治疗时间逐渐下降,恢复至正常水平。结论肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达升高,且与肺结核的发展和转归有关,监测PBMC中lncRNA NEAT1表达或可以评估结核病患者预后情况。

肺结核患者外周血低密度粒细胞检测的临床意义

目的探讨肺结核(TB)患者外周血低密度粒细胞(LDGs)的比例变化及其意义。方法采用流式细胞术分析80例TB患者及25例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)层中CD14^(low)CD15^+LDGs的比例及变化情况,检测LDGs表面CD15、CD16、CD33、CD66b、CD62L的表达水平、凋亡坏死率及ROS水平。分析LDGs与TB发生发展以及转归的相关性。结果 TB患者外周血PBMCs层中LDGs的比例显著高于健康对照组(P<0.01);痰涂片抗酸阳性的TB患者LDGs的比例显著高于抗酸阴性者(P<0.01)。与TB患者正常密度粒细胞(NDGs)比较,TB患者LDGs表面CD15、CD33、CD66b表达量显著升高,CD62L的表达量显著下降,凋亡率上调,ROS水平上调。LDGs的比例在肺部有无空洞及空洞数量分组之间差异有统计学意义(P<0.05),即LDGs的比例随空洞累及范围的增加而升高。TB患者经抗痨治疗后,外周血LDGs的比例随治疗时间延长而下降,治疗3个月后,LDGs的比例显著降低,治疗6个月后与健康对照组无明显差异。结论 LDGs水平在TB患者外周血中显著上调,TB患者外周血中的LDGs为一群发生脱颗粒的活化中性粒细胞,且与TB的严重程度相关。

2015-2018年某地学生人群献血情况分析

目的分析某地学生人群献血情况,为提高学生人群血液安全提供参考数据。方法回顾性分析某地2015年到2018年大学生献血情况,统计学生人群献血率以及五项献血指标不合格率。酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗-HCV)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)、梅毒抗体(抗TP)和速率法检测谷丙转氨酶(ALT)。结果2015-2018年,学生人群献血率呈逐年上升趋势,且有统计学意义,(χ2=1025.219,P<0.01)。学生人群献血五项指标不合格情况在不同年间,HBsAg、抗HCV阳性率存在差异,有统计学意义(χ2=21.556、28.749,P值均<0.01),ALT、抗HIV和抗TP不合格率无统计学意义(P值均>0.01)。学生人群和非学生献血人群的五项献血指标不合格情况比较,学生人群的HBsAg和抗TP不合格率明显低于非学生人群,且差异有统计学意义(χ2=36.034、140.057,P值均<0.01),ALT、抗HCV和抗HIV异常率无统计学差异(P值均>0.01)。结论2015-2018年,本地学生献血比例逐年攀升,学生人群比非学生人群血液安全性高,但学生血液安全性仍有上升空间。掌握献血指标不合格项信息,加强高校科学献血宣传,有利于提高学生献血者自身血液安全意识并保障血液安全及献血事业的可持续发展。

肺结核病患者外周血单个核细胞中环状RNA circRNF10的表达及意义

目的检测肺结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)中环状RNA circRNF10的表达水平,探讨其在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用实时荧光定量PCR法对2016年3月至2017年3月江西省胸科医院收治的90例未经治疗的活动性肺结核患者、40例肺炎患者、40例肺癌患者及70例健康体检者PBMC中circRNF10的表达水平进行检测。应用受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析circRNF10诊断肺结核的敏感度和特异度。结果肺结核患者PBMC中circRNF10表达水平(2.11±1.13)显著高于健康对照组(1.00±0.38)、肺炎组(1.14±0.57)和肺癌组(0.93±0.31),差异有统计学意义(F=38.15,P<0.01)。肺结核患中肺部空洞组circRNF10水平显著高于无空洞组(t=7.02,P<0.01);肺部病灶范围≥2个肺野组circRNF10水平显著高于<2个肺野组(t=4.68,P<0.01)。与抗结核治疗前(2.31±0.72)相比,肺结核患者circRNF10表达水平在抗结核治疗后3月(1.27±0.41)(t=5.62,P<0.01)、6月(0.94±0.38)(t=7.54,P<0.01)均有显著降低。ROC曲线分析显示,circRNF10在鉴别肺结核与健康对照、肺炎患者及肺癌患者的曲线下面积(AUC)分别为0.837、0.782、0.861。结论 PBMC中circRNF10有望作为肺结核诊断和疗效监测的潜在生物标志物。

METTL14在CML细胞中的表达及其与PKM剪接体间的相关性分析

目的探讨METTL14在伊马替尼(Imatinib,IM)敏感和耐药慢粒(chronic myeloid leukemia,CML)细胞中的表达差异,并分析其与PKM剪接体间的相关性。方法收集南昌大学第二附属医院门诊的健康对照组、CML慢性期、CML急变期各5例外周血或骨髓,运用RNA转录组测序(RNA-seq)技术进行测序,筛选差异表达基因;另收集30例IM敏感的慢性期CML患者外周血或骨髓作为IM敏感组,10例IM耐药急变期标本作为耐药组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证40例临床样本中METTL14基因差异表达,并采用Spearman法分析METTL14和PKM剪接体的相关性,同时通过SRAMP网址预测PKM基因是否含有m6A修饰位点。结果RNA测序结果显示,分别与对照组和慢性期比,急变期基因表达谱有很大的差异,且差异基因显著富集的是剪接体功能通路;METTL14 mRNA在IM敏感组和耐药组中相对表达量分别是(13.720±2.512)和(21.450±1.426),差异有统计学意义(P=0.028)。qRT-PCR结果显示METTL14 mRNA在敏感组中的表达较耐药组显著降低(P<0.001);Spearman相关分析表明,METTL14 mRNA表达水平与PKM2/PKM1比值呈正相关(r=0.495,P=0.005);SRAMP网址预测PKM基因9号外显子区域高度富集m6A修饰位点。结论高表达的METTL14介导的m6A修饰PKM基因外显子9使其高度甲基化而不被剪接,PKM1生成减少,PKM2相应增多,从而促进CML耐药,为探讨CML耐药机制和治疗靶点提供新思路。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在结核感染中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）在结核感染中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR（ RT-PCR）技术检测75例肺结核病患者（结核组）及32例健康体检者（健康对照组）外周血单个核细胞（ PBMC）中MALAT1的表达量,分析其与结核病发生发展以及转归的相关性。采用RT-PCR技术检测感染结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis,Mtb）的人巨噬细胞（THP-1）中MALAT1的差异表达；用小干扰RNA诱导THP-1细胞中MALAT1沉默,检测Mtb感染后炎症因子TNF-α、IL-6的表达及THP-1细胞对Mtb杀菌功能的变化。结果 RT-PCR检测结果显示 MALAT1在肺结核患者 PBMC 中的相对表达水平是健康对照组的（4.05＆#177;0.86）倍,差异有统计学意义（P〈0.01）。 MALAT1在初治和复治肺结核病例中表达差异无统计学意义（P〉0.05）；MALAT1随结核病患者肺部空洞累及范围的增加而升高。肺结核患者PBMC中MALAT1表达量随着治疗时间逐渐下降,恢复至正常水平。 THP-1细胞感染Mtb后MALAT1表达显著上调（P〈0.01）；沉默MALAT1的THP-1细胞感染Mtb后TNF-α和IL-6水平显著升高（P〈0.01）。以Mtb感染后0 h时间点的细胞内荷菌量为基准,Mtb感染后72 h时沉默MALAT1的THP-1细胞内Mtb的存活率显著低于对照感染组（P〈0.01）。结论 MALAT1在结核感染过程中表达升高,且与结核的发展和转归有关。下调MALAT1表达可增强巨噬细胞对胞内Mtb的清除能力。

长链非编码RNA在脂多糖诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达变化

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）在脂多糖（LPS）诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达差异.方法 分离健康者外周血单个核细胞,采用贴壁法培养纯化为巨噬细胞并分为空白对照组和LPS刺激组.用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞12 h后收集细胞及其培养上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL-1β、IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;利用lncRNA基因芯片检测两组细胞中lncRNA表达谱的变化,筛选出差异表达lncRNA分子并进行分析.采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）对部分差异表达lncRNA分子进行验证;并以NR_028034为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中NR_028034的动态表达变化.结果 ① 与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中炎性细胞因子含量均明显升高〔IL-1β（ng/L）：562.93±61.17比59.74±15.68,IL-6（ng/L）：702.46±92.31比71.66±18.25,TNF-α（ng/L）：794.50±63.89比85.12±22.07,均P〈0.01〕,证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功.② 以LPS刺激组与空白对照组表达比值≥2倍且P〈0.05作为差异表达lncRNA.LPS刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA有1479条,上调2倍以上的lncRNA共953条,其中上调5倍以上的lncRNA有49条;下调2倍以上的lncRNA共526条,其中下调5倍以上的lncRNA有35条.③ 用qRT-PCR对部分lncRNA进行验证的结果与lncRNA芯片检测结果一致.④LPS刺激巨噬细胞后3、6、12 h,NR_028034表达水平较空白对照组分别上调了（4.41±0.65）、（11.56±2.04）、（18.58±1.36）倍（均P〈0.01）.结论 LPS诱导人巨噬细胞炎症反应后,lncRNA表达谱发生显著变化,lncRNA可能参与调控了巨噬细胞炎症反应.

血浆环状RNA hsa_circ_0009024表达在肺结核诊疗中的应用价值

目的 检测肺结核患者血浆中环状RNA（circRNA）hsa_circ_0009024的表达水平,探讨其在肺结核诊断中的应用价值.方法 病例对照研究.采用实时荧光定量PCR法对2016年1月至12月江西省胸科医院收治的90例未经治疗的活动性肺结核病患者（结核病组）、75名健康体检者（健康组）和84例其他疾病患者（其他疾病组）血浆中hsa_circ_0009024的表达水平进行检测.90例肺结核患者据肺部空洞情况分为无空洞组（55例）和有空洞组（35例）;据肺部病灶范围分为〈2个肺野组（49例）和≥2个肺野组（41例）.对41例接受抗结核治疗的肺结核患者治疗前及治疗后3个月血浆hsa_circ_0009024水平进行动态监测.应用ROC曲线分析hsa_circ_0009024诊断肺结核的敏感度和特异度.两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验.结果 肺结核患者血浆hsa_circ_0009024表达水平[1.98（1.42,2.71）]显著高于健康组[1.03（0.78,1.33）]和其他疾病组[1.13（0.77,1.51）],差异有统计学意义（H=76.58, P〈0.0001）.肺部空洞组血浆中hsa_circ_0009024水平显著高于无空洞组（U=392.50,P〈0.0001）;肺部病灶范围≥2个肺野组血浆中hsa_circ_0009024水平显著高于〈2个肺野组（U=590.50,P=0.0008）.与抗结核治疗前[2.01 （1.47,2.71）]相比,肺结核患者血浆hsa_circ_0009024表达水平在抗结核治疗后3个月[1.22（0.85, 1.47）]显著降低（U=292.50,P〈0.0001）.ROC曲线分析显示,血浆hsa_circ_0009024在鉴别结核病组与健康组、其他疾病组的曲线下面积（AUC）分别为0.841、0.811.结论 血浆hsa_circ_0009024有望作为肺结核诊断和疗效监测的潜在生物标志物.

血清长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在肺结核中的诊断价值

目的检测肺结核患者血清中长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）肺腺癌转移相关转录本1（metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1, MALAT1）的表达水平，探讨其在肺结核诊断中的应用价值。方法肺结核患者56例、结核潜伏感染者35例及健康对照者40名，采用实时荧光定量PCR检测其血清中MALAT1的表达水平。对16例接受抗结核治疗的肺结核患者治疗前及治疗后3、6个月血清MALAT1水平进行动态监测。应用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic, ROC）分析MALAT1诊断肺结核的敏感度和特异度。两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。结果肺结核患者血清MALAT1表达水平为2.10±1.05，显著高于结核潜伏感染者的1.16±0.51和健康对照者的1.02±0.44，差异有统计学意义（F＝28.53，P〈0.01）。痰涂片抗酸阳性的肺结核患者血清MALAT1表达显著高于抗酸阴性的肺结核患者，差异有统计学意义（2.42±1.03比1.43±0.74，t＝2.66，P〈0.01）。与治疗前（2.28±0.79）相比，肺结核患者血清MALAT1表达水平在抗结核治疗后3个月（1.35±0.39）及6个月（1.05±0.30）均显著降低，差异有统计学意义（t值分别为4.33、6.05，P〈0.01）。血清MALAT1诊断肺结核的ROC下面积（area under of ROC curve, AUC）为0.821，敏感度和特异度分别为0.732和0.850。结论肺结核患者血清MALAT1表达水平明显升高，MALAT1有望作为肺结核诊断的潜在生物标志物。

LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应中环状RNA表达谱变化分析

目的 分析环状RNA（circRNA）在脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应中的表达差异,初步探讨mmu_circ_0000790（以下简称为circ790）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌促炎性细胞因子的影响.方法 提取C57BL/6雌性小鼠腹腔巨噬细胞,用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞,12 h后收集细胞及上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;利用circRNA芯片检测LPS诱导组（n=3）和空白对照组（n=3）细胞中circRNA表达谱的变化.采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）对部分差异表达的circRNA进行验证,并以circ790为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中circ790的动态变化.用小干扰RNA诱导小鼠腹腔巨噬细胞中circ790沉默,检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达变化;运用生物信息学方法预测circ790相关的microRNA.结果 与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高（P〈0.01）,证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功.芯片筛查结果提示有34个circRNA的表达在LPS诱导组和对照组之间的差异有统计学意义（P〈0.05）,其中12个circRNA上调,22个circRNA下调.RT-PCR验证结果和芯片结果一致.LPS刺激巨噬细胞3、6、12 h后,circ790表达水平较空白对照组上调了（1.94＆#177;0.15）、（3.18＆#177;0.13）和（4.21＆#177;0.22）倍（P〈0.05）.在转染si-circ790后,IL-6的分泌水平明显降低（P〈0.05）,但对IL-1β和TNF-α的水平没有明显影响（P〉0.05）.生物信息学提示circ790可能通过与microRNA发生相互作用从而调控巨噬细胞炎症反应.结论 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应后,circRNA表达谱发生显著变化,circ790可能参与调控了巨噬细胞分泌IL-6.

lincRNA—cox2对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化，初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化，IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对lincRNA-cox2基因的siRNA及无关序列，脂质体转染RAW264.7细胞，48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞，采用酶联免疫试验（ELISA）检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞，检测其对M1极化表型的影响。结果RT-PCR结果显示，M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比，lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后，经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低，iNOS和TNF-α表达下降；而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加，Arg-1和Fizz1表达升高。lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后，IL-12分泌降低，IL-10产生增加，其特点向M2样巨噬细胞转换。结论lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化，促进M1型巨噬细胞极化，抑制M2型巨噬细胞极化。