脂多糖诱导持续血小板减少模型的建立及对血小板生成素的影响

目的建立脂多糖(LPS)诱导小鼠持续内毒素血症血小板减少(TCP)模型,观察小鼠模型平均血小板体积(MPV)、血小板生成素(TPO)的变化。方法 C57/BL小鼠随机分为4组,低剂量LPS5mg/kg连续给药组(LL-c组),低剂量LPS5mg/kg单次给药组(LL组),高剂量LPS50mg/kg单次给药组(HL组),对照组(C组);于给药前测定各组小鼠血小板计数(PLT)和MPV作为基线,观察给药后小鼠PLT、TPO、MPV水平及存活情况。结果 LL-c组小鼠注射LPS后PLT下降,并持续处于基线30%左右的水平,与基线相比较差异均有统计学意义(P<0.01),LL组与HL组均先降低后升高;LL-c组注射LPS后MPV持续处于增大水平,与基线相比较差异有统计学意义(P<0.01),HL、LL组MPV均先增大后减小;7d时LL-c组小鼠TPO高于C组(P<0.05);LL-c组、LL组与HL组小鼠造模7d时分别死亡5只、0只、14只。结论连续低剂量腹腔注射LPS可诱导小鼠持续TCP模型。

脂多糖诱导血小板凋亡及 Toll 样受体4的介导作用

目的：探讨脂多糖（ lipopolysaccharide ， LPS）对血小板凋亡的诱导作用及血小板Toll样受体4（Toll－like receptor 4， TLR4）在LPS诱导的血小板凋亡中的作用。方法取健康志愿者的新鲜静脉血，分离富含血小板血浆，制备洗涤血小板，随机分为对照组（ C组）、LPS组（ L组）、TLR4单克隆抗体（ TLR4 monoclonal antibody ， TLR4mAb）预处理组（ P组）及凝血酶组（ T组）4组。各组均加入FcγRⅡ单克隆抗体封闭20 min；P组预先加入TLR4mAb，其余各组加入等量MTB缓冲液，室温孵育30 min；随后，L组及P组均加入LPS，T组加入凝血酶，C组加入等量的MTB，各组于室温下孵育30 min；裂解液裂解血小板，提取血小板蛋白，凋亡因子抗体芯片法检测各组凋亡相关蛋白的表达水平。采用芯片分析软件进行数据分析。结果人血小板可以表达多种凋亡相关蛋白。与C组比较，L组显示36种血小板凋亡相关蛋白的表达升高（ fold change ＞1畅50），包括促凋亡蛋白16种，抗凋亡蛋白8种，双向调控蛋白12种；与C组比较，T组可以诱导29种凋亡相关蛋白表达增高（fold change＞1．50），其中促凋亡蛋白15种，抗凋亡蛋白6种及双向调控蛋白8种；与L组比较，P组凋亡相关蛋白中有29种表达下调（fold change＜0．67），但与C组比较，仍有17种凋亡相关蛋白的表达增高（fold change＞1．50）。结论体外条件下，LPS可以通过内源性及外源性凋亡通路诱导人血小板发生凋亡，拮抗LPS－TLR4通路可能减少LPS诱导的血小板凋亡。

rhTPO对脂多糖诱发血小板减少小鼠骨髓造血干细胞及免疫的影响

目的探讨重组人血小板生成素（rhTPO）对脂多糖（LPS）诱发血小板减少小鼠血小板计数（BPC）、骨髓造血干细胞、巨核细胞及免疫的影响。方法SPF级雄性C57／BL6小鼠100只，随机分为五组：健康对照（c）组，模型（LPS）组（腹腔注射LPS30mg／kg），低、中、高剂量rhTPO（L、M、H）治疗组（制模后连续皮下注射不同剂量rhTPO3d），观察每日小鼠外周血BPC的变化，ELISA法检测第4天小鼠血浆TNF-仪、IL-6、IL-10等炎性因子水平，流式细胞术测定骨髓造血干细胞CD34＋、巨核细胞CD41／CD61表达，计算胸腺、脾脏脏器指数，记录各组小鼠72h死亡率。结果各组小鼠注射LPS后BPC较C组不同程度下降（P〈0．05）；LPS、M、H组3d时BPC（×10^9／L）降至最低值（128．2±31．1、169．4±62．4、137．0±39．8），L组2d时BPC（×10^9／L）降至最低值（259．4±51．3），L组小鼠BPC最低值高于M、H、LPS组（P〈0．05）；3、4d时，L组BPC明显高于LPS、M、H组（P〈0．01），M、H组与LPS组比较无升高（P〉0．05）。注射LPS后4d时各组小鼠骨髓巨核细胞CD41／CD61高于c组（P〈0．01），L组小鼠骨髓巨核细胞CD41／CD61明显高于M、H、LPS（P〈0．01），M组、H组与LPS组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；4d时LPS、M、H组小鼠骨髓CD34＋表达较C组无变化（P〉0．05），L组较M、H、LPS组及C组CD34＋表达增高（P〈0．01），M组、H组与LPS组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。4d时各组小鼠TNF-α、IL-6水平与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05），L、M、H组与LPS组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；LPS、M、H组IL-10水平与C组比较差异均无统计学意义（P〉0．05），L组明显高于C、LPS、M及H组（P〈0．01）。4d时LPS、M、H组胸腺指数较c组均降低（P〈0．01），L组较LPS升高（P〈0．01），与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；LPS、L、M、H、C组小鼠脾指数无明显改变，组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。L组小鼠72h死亡率明显低于其他三组（P〈0．01）。结论低剂量rhTPO可能通过促进LPS诱发血小板减少小鼠骨髓干细胞及巨核细胞增殖、提高抗炎细胞因子水平、增强小鼠免疫达到升高小鼠BPC水平、降低72h死亡率的效果。

脓毒症血小板减少患者细胞因子表达的抗体芯片分析

目的探讨脓毒症血小板减少患者血清中炎性相关细胞因子的表达。方法收集脓毒症血小板减少患者10例，脓毒症不伴血小板减少患者7例，健康对照者7例，应用抗体芯片检测并分析其血清中34种炎性相关细胞因子表达的变化。结果①脓毒症不伴血小板减少组较健康对照组34种炎性细胞因子中一部分促炎及抗炎细胞因子表达上调，促炎细胞因子IL-17F、IL-21、IL-6sR及抗炎因子IL-10表达下调（foldchange〈0．67）。②脓毒症血小板减少组较健康对照组34种炎性细胞因子中大部分促炎及抗炎细胞因子上调，仅抗炎因子IL-10表达下调（foldchange〈0．67）。③脓毒症血小板减少组较脓毒症不伴血小板减少组34种炎性细胞因子中大部分促炎及抗炎细胞因子上调，仅抗炎细胞因子IL-13、IL-10、GM—CSF表达下调（foldchange〈0．67）。结论脓毒症血小板减少患者较脓毒症不伴血小板减少患者及健康对照者血清中大部分抗炎因子、促炎因子均上调，只有少部分抗炎因子下调，脓毒症患者发生血小板减少提示促炎反应加剧。

ICU机械通气患者气管切开时机的选择

目的评估气管切开时机对ICU长期机械通气患者的影响。方法回顾性分析2012年1月至2014年10月天津市第一中心医院ICU94例长期机械通气患者，根据气管切开时间分为两组：早期组（A组）定义为气管切开距气管插管的时间≤7d，晚期组（B组）为〉7d。比较两组患机械通气时间、人住ICU时间、总住院时间、呼吸机相关性肺炎（VAP）发生率和病死率，对气管切开距气管插管的时间与机械通气时间及入住ICU时间做相关性分析。结果早期气管切开组较晚期气管切开组机械通气时间、入住ICU时间及VAP发生率明显下降（均P〈0．05），两组患者总住院时间及病死率差异无统计学意义（均P〉0．05），气切时间与机械通气时间和入住ICU时间均有显著相关性（均P〈0．05）。结论早期气管切开可以缩短ICU患者机械通气时间、入住ICU时间和降低VAP发生率。

多器官功能障碍综合征

多器官功能障碍综合征（MODS）是严重创伤、感染、大手术、大面积烧伤等发病24h后相继或同时出现两个或者两个以上器官功能障碍。一旦组织细胞、微循环发生损伤，临床治愈将很困难，采取有效的预防措施比损伤反应被激活后的治疗更重要。本研究从MODS的流行病学、病理生理学、临床特征及治疗等方面进行述评，仅供广大学者参考。

大肠杆菌脂多糖体外诱导小鼠血小板凋亡的研究

目的：观察大肠杆菌脂多糖（LPS）是否可在体外诱导小鼠血小板凋亡的发生。方法制备洗涤血小板悬液，调整血小板终浓度至3x108/mL。根据刺激剂不同分为对照组〔无钙台式缓冲液（TB）〕、凝血酶处理组（终浓度1 U/mL，无钙TB制备）和不同浓度LPS处理组（终浓度1、10、100μg/mL，无钙TB制备）。各组加入相应刺激剂后室温孵育30 min。应用化学发光法检测三磷酸腺苷（ATP）含量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性；用流式细胞仪检测血小板膜联蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）阳性率以反映磷酯酰丝氨酸（PS）暴露水平；用流式细胞仪测定血小板平均通道荧光强度（MCF）以反映线粒体内膜电位（ΔΨm）去极化。结果与对照组比较，凝血酶处理组血小板ATP水平明显降低〔相对荧光强度（RLU）：（5.46±0.14）x105比（6.25±0.26）x105，P＜0.05〕， AnnexinⅤ阳性率〔（50.43±2.45）%比（1.58±0.25）%，P＜0.05〕和caspase-3活性〔RLU：（26.92±1.60）x103比（1.30±0.10）x103，P＜0.05〕均明显升高，血小板MCF明显降低〔（8.32±0.58）x104比（13.05±1.10）x104，P＜0.05〕，说明ΔΨm去极化增加。给予不同浓度LPS处理后，血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性均明显升高，血小板MCF明显降低，说明ΔΨm去极化增加，且呈浓度依赖性。与对照组比较，1μg/mL LPS即可使AnnexinⅤ阳性率增加〔（10.45±1.08）%比（1.58±0.25）%， P＜0.05〕，caspase-3活性升高〔RLU：（14.06±0.61）x103比（1.30±0.10）x103，P＜0.05〕，MCF明显降低〔（9.48±0.50）x104比（13.05±1.10）x104，P＜0.05〕。经100μg/mL LPS处理后血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性最高，且均明显高于对照组〔ATP（RLU）：（7.00±0.03）x105比（6.25±0.26）x105， AnnexinⅤ阳性率：（55.35±2.42）%比（1.58±0.25）%，caspase-3（RLU）：（32.00±3.75）x103比（1.30±0.10）x103，均P＜0.05〕；血小板MCF最低，且明显低于对照组〔（4.69±0.55）x104比（13.05±1.10）x104，P＜0.05〕。结论大肠杆菌LPS可体外诱导小鼠血小板ATP升高、PS暴露、ΔΨm去极化及caspase-3活性增加，说明LPS可诱导血小板凋亡，且呈浓度依赖性。

脂多糖诱导小鼠血小板减少症可能与凝血及炎症反应无关

目的探讨脂多糖（LPS）诱导小鼠血小板减少症（TCP）与凝血及炎症反应的关系。方法按随机数字表法将48只雄性C57BL／6小鼠分为对照组及低剂量、高剂量LPS处理组，每组再按观察时间随机分为4h和24h两个亚组，每个亚组8只。低剂量和高剂量LPS组分别经腹腔注射0．5mg／kg和50mg／kg LPS，对照组注射等量生理盐水。于观察时间点取小鼠内眦血，测定血小板计数（PLT），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、D-二聚体、纤维蛋白原降解产物（FOP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6）。结果与对照组比较，低剂量和高剂量LPS组4h、24h时PLT（×10^9／L）均显著下降（4h：660．65±180．48、568．55±117．99比1199．13±110．54，24h：505．63±218．92、256．33±72．86比1229．13±1189．37，均P〈0．05），且高剂量组较低剂量组降低更为明显（均P〈0．05）。析因分析显示，LPS剂量、作用时间均对PLT有影响（F1=135．660、P1=0．000，F2=12．120、P2=0．001），LPS剂量和作用时间对PLT的影响具有交互效应（F=5．580，P=0．007）。与对照组比较，低剂量和高剂量LPS组4h、24h时TAT（ng／L，4h：1．10±0．59、0．22±0．13比3．47±1．73，24h：1．18±0．68、0．39±0．29比3．19±1．27）、TNF-α（nmol／L，4h：87．35±12．29、93．70±5．25比101．59±10．96，24h：81．94±8．26、93．23±4．71比102．84±10．56）和IL-6（ng/L，4h：81．78±7．82、78．59±9．06比110．88±9．66，24h：76．03±9．85、71．34±3．69比110．88±10．35）均显著降低（均P〈0．05），且高剂量组4h、24h时TAT较低剂量组进一步降低，24h TNF—α 较低剂量组进一步升高（均P〈0．05）。TAT、TNF—α和IL-6仅受LPS剂量影响（TAT：F=42．350，P=0．000；TNF-α：F=14．810，P=0．000；IL-6：F=81．910，P=0．000），而不受LPS作用时间影响（TAT：F=0．002，P=0．967；TNF—α：F=0．342，P=0．562；IL-6：F=2．973，P=0．092）；LPS剂量与作用时间对TAT、TNF-α和IL-6的影响均无交互效应（TAT：F=0．236，P=0．791；TNF—α：F=0．572，P=0．569；IL-6：F=0．774，P=0．468）。LPS剂量和作用时间对D-二聚体无影响（F1=2．448、P1=0．099，R=0．024、P2=0．877），对FDP也无影响（F1=0．106、P1=0．900，R=0．013、P2=0．908）；也不存在交互效应（D-二聚体：F=0．002，P=0．998；FDP：F=0．582，P=0．563）。结论LPS可诱导小鼠发生TCP，但这种作用可能与凝血系统活化及过度炎症反应无关。

丙泊酚对神经调节辅助通气患者的影响研究

目的探讨丙泊酚不同镇静水平对神经调节辅助通气患者的影响。方法前瞻性研究，收集天津市第-中心医院重症监护病房（ICU）2012年6月至2015年6月神经调节辅助通气（neurallyadjustedventilatorassist，NAVA）患者50例，随机（随机数字法）分为轻度镇静组和深度镇静组各25例，比较两组患者的呼吸力学指标：吸气峰压（PIP）、平均气道压（Pmean）、膈肌电位（EAdi）；气体交换指标：动脉血pH值、动脉血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）；人机同步性指标：触发延迟时间（triggerdelay）、吸呼气转换延迟时间（offcycledelay）；血流动力学指标：平均动脉压（MAP）、心率（HR）。数据统计采用SPSS17．0统计软件，计数资料采用x。检验，计量资料采用成组t检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果镇静后，轻度镇静组和深度镇静组患者的PIP、Pmeam、和EAdi均降低（轻度镇静组与镇静前比较t值分别为2．519、2．363、2．980，深度镇静组与镇静前比较t值分别为3．158、-4．307、4．462，均P〈0．05）；深度镇静组患者的PIP、Pmeam、EAdi较轻度镇静组降低（t值分别为2．018、-2．441、3．402，均P〈0．05）。轻度镇静组MAP、HR、PaCO：较镇静前无显著改变（t值分别为1．620、1．492、-0．267，均P〉0．05）；深度镇静组MAP、HR均较镇静前和轻度镇静组降低（深度镇静组与镇静前比较t值分别为2．805、2．944，深度镇静组与轻度镇静组比较￡值分别为2．175、2．019，均P〈0．05），PaCO2则较镇静前和轻度镇静组升高（t值分别为-4．644、-0．315，均P〈0．05）。镇静前、后及两组间患者的pH值、PaO2、Triggerdelay、Offcycledelay均无明显改变（轻度镇静组与镇静前比较t值分别为-1．470、1．250、-0．745、-0．555，深度镇静组与镇静前比较t值分别为-1．090、-0．333、-1．088、-0．717，轻度镇静组与深度镇静组比较t值分别为-0．612、-0．542、0．379、1．225，均P〉0．05）。结论对于NAVA通气患者，给予丙泊酚轻度镇静，能降低EAdi和气道压力，不影响气体交换、血流动力学和人机同步性。