寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿主免疫应答,适应寄生生活中起着重要作用。本文综述了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基本类型、结构特征和作用机制,以及寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展。

羊主要抗病候选基因的研究进展

疾病是影响畜牧业生产的主要因素,虽然传统的疾病防治技术对疾病的预防和治疗起了不小作用,但未能从根本上控制和消灭传染病的流行。随着分子生物学和基因工程技术的发展,寻找抗病基因,开展遗传育种从遗传本质上提高家畜对疾病的抵抗力,已经逐渐成为研究热点。本文就羊体内与免疫相关的部分抗病候选基因的国内外研究概况加以综述。

羊流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及序列分析

为探讨羊流产嗜性衣原体MOMP蛋白的生物学功能、揭示其在流产衣原体病诊断和防治中的作用。本试验根据Gen Bank公布的流产嗜性衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因序列,设计并合成4条特异性引物,以羊流产嗜性衣原体青海分离株感染的鸡胚卵黄囊中提取的衣原体基因组为模板,应用套式PCR扩增到MOMP全基因序列。通过生物信息学软件对该基因的结构及其推导的氨基酸序列进行了预测分析,同时分析了与其他流产嗜性衣原体的同源性。结果显示,该基因全长1 170 bp,可编码389个氨基酸,蛋白分子量理论值为41.8 ku,理论等电点7.54,编码蛋白理化性质较稳定。其第1位到第19位氨基酸残基为信号肽序列,具有3处N-糖基化位点。含有多个能被其他酶修饰的位点,以无规则卷曲为主,含5个跨膜区,3个亲水性较强的抗原表位。同源性分析表明与其他流产嗜性衣原体分离株的一致性高在93%以上,系统进化分析表明与OCLH196株(序列号为AJ440239)位于同一进化分支。

多头带绦虫甘肃分离株分子COⅠ基因部分序列比较分析

应用线粒体DNA中的细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因作为分子标记,对我国甘肃省景泰和平凉地区10个绵羊源脑多头蚴进行分析,与已知带属绦虫种的相应序列进行相似性比较,下载GenBank数据库的带属绦虫COI基因片段序列构建系统进化树,分析其分类及亲缘关系.结果表明,所有多头带绦虫分离株均成功扩增出444 bp的COI基因片段,去除引物序列后多头带绦虫分离株的COI基因片段为396 bp,可以分为4类,共有5个核苷酸变异位点,变异率为0.25%～1.26%.基于COI核苷酸序列的系统进化树表明所有T.multiceps分离株构成一个分支,可分为2个亚群.T.multiceps与T.krabbei 的亲缘关系最近,其次为T.serialis,T.asiatica,T.saginata,与T.ovis等其他带属绦虫关系较远,与T.mustelae关系最远.COI基因序列在种内相对保守,又存在一定的种间差异,可作为带属绦虫分类鉴定研究的分子标记.

多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达

从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸。对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物。结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白。对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性。

多头带绦虫脑多头蚴cDNA表达文库的构建及初步分析

从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA，以Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，利用LambdaZAPIIXR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴eDNA表达文库。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小，鉴定文库质量。结果表明脑多头蚴eDNA表达文库的原始库容量为1．0×10。pfu，扩增后文库滴度为1．6×10^9pfu／mL。随机挑选的165个噬菌斑克隆中，0．25kb以上的克隆155个，重组率为93．9％，对其中0．5kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签（EST），分析后得到96个单一EST序列（UniqueEST），其中20个EST与绦虫基因有同源性，38个EST与吸虫基因有同源性，4个EST与线虫基因有同源性，17个EST与其他物种有同源性，其余17个EST没有同源基因。这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tml6抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白。

多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析

从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。

多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达

为原核表达Tm16和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头蚴原头节基因组DNA为模板分别扩增Tm16和Tm18抗原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm16和pGEX-Tm18。转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化。结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm16及GST-Tm18重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆抗体特异性识别。

谈“主谓一致”三原则

指出英语句子中主谓一致的三个基本原则,即语法一致,意义一致,邻近一致。还介绍了三种习惯用法。

如何变英语听力学习中的被动接收为主动接受

本文从理论和实践两方面论述了在听力教学中应把听与说,听与写,提高听力技能与拓宽知识面有机地结合起来的重要性和必要性。这三者的结合有利于调动学生的主观能动性,从而变听力学习中的被动接收为主动接受。

含蓄比较级

本文归纳、总结了英语中不用“more than”结构,但也表达比较含义的英语词组。

谈加强英汉翻译指导

外语作为一种交际工具,首先必须要达到言传(即翻译)的水平这样才具有实际应用价值。教学中加强对学生的翻译指导(本文仅谈英汉翻译)有利于激发起学生的学习兴趣,从而培养学生实际运用英语的能力。

不同处理方式海藻对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响

文章旨在评估不同处理方式的海藻对蛋鸡产蛋性能、血清生化和蛋品质的影响。试验选择40周龄产蛋率接近的648只海兰褐壳蛋鸡,随机分为3组,每组108只,每个重复36只。对照组蛋鸡饲喂基础日粮,T1和T2组蛋鸡饲喂基础日粮+0.5%海藻和0.5%发酵海藻。经过1周的适应期后,开展为期6周的饲养试验。结果:T1组4~6 w蛋鸡的产蛋率和平均蛋重较对照组和T2组分别显著提高2.70%、2.59%和3.75%、3.40%(P<0.05)。T1组蛋鸡4~6 w和1~6 w料蛋比较对照组分别显著降低4.65%和2.70%(P<0.05),但1~6 w产蛋率显著提高1.40%(P<0.05)。照组和T1组鸡蛋哈夫单位较T2组显著提高12.17%和13.62%(P<0.05),同时T1和T2组蛋黄颜色a值较对照组分别显著提高5.08%和4.60%(P<0.05)。对照组与处理组对蛋鸡血清大部分生化指标无显著影响(P>0.05),T1组血清谷丙转氨酶活性显著高于对照组和T2组(P<0.05),同时对照组蛋鸡血清胆固醇浓度显著高于T1和T2组(P<0.05),血清甘油三酯浓度显著高于T1组(P<0.05)。处理组血清白蛋白浓度显著高于对照组(P<0.05)。结论:在日粮中添加0.5%海藻可显著改善41~46 w蛋鸡生产性能和血清白蛋白浓度,但0.5%发酵海藻组鸡蛋哈夫单位降低。

甘肃省定西市牛主要疫病调查分析

通过对甘肃省定西市近十年来牛主要疫病疫情资料的汇总分析,结合实验室检测以及对全市牛饲养、疫病发生等情况的调查,初步了解当前严重危害定西市牛养殖业的主要疫病及其发病情况和影响因素。调查结果显示,近十年来在定西市由牛病毒性腹泻造成的牛病死量较高,牛布鲁氏菌病、牛结核病和牛炭疽造成的经济损失较大。实验室检测未发现牛口蹄疫和牛结核病,发现牛衣原体病和弓形虫病的病原学阳性率较高,分别为9.80%和2.60%。调查发现,引起定西市牛疫病的主要因素是牲畜引进,引起寄生虫病的主要是食入被幼虫污染的饲草。提示应采取"分区域、分策略、抓重点、强体系"的综合防治措施,以降低牛主要疫病的发生风险,促进本地牛养殖业健康持续发展。

羊四苗分点同时免疫与单苗免疫对比试验

为探索不同组合的免疫方法对其抗体产生的影响,确立合理有效的免疫程序。试验将口蹄疫、羊三联四防、小反刍兽疫和羊痘4种疫苗进行不同组合,即分别进行单苗单独、两两组合、三三组合、4种疫苗同时分点注射,共分为15组,每组20只,对各组免疫后副反应观察和抗体水平检测。结果表明:口蹄疫、三联四防、小反刍兽疫和羊痘4种疫苗分点同时注射组产生的抗体水平,与单苗注射组相比,差异不显著(P﹥0.05),疫苗注射后产生的抗体效价相对较高且稳定,不同疫苗产生的抗体之间相互干扰、拮抗作用不明显,抗体合格率分别在70%以上,均能达到国家规定的免疫要求,因此该免疫接种方法在实际工作中可推广应用。

甘肃省定西市羔羊腹泻病流行病学调查

为了解甘肃省定西市羔羊腹泻疾病发生和流行情况,科学规范指导腹泻病防治工作,2017-2018年对定西市7个县(区)采用基本情况调查、实验室抽样检测等方法进行了羔羊腹泻病流行病学调查,共填写调查问卷3640份,采集腹泻羊肛门棉拭子样本1500份、粪便样本700份、血清700份,运用血清学和病原学方法分别对霉菌、大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、链球菌、轮状病毒、蠕虫、梨形虫和隐孢子虫进行了检测。结果显示:腹泻羔羊样本中致病性大肠杆菌检出率最高,其次是隐孢子虫和轮状病毒。结果表明,羔羊腹泻不是单纯的细菌性疾病,而是病毒、寄生虫、细菌混合感染引起的疾病,并提出了综合防控措施。

甘肃通渭县三种重大猪病免疫效果评价与分析

为评估甘肃省通渭县猪的口蹄疫、猪瘟、繁殖与呼吸综合征三种重大猪病的免疫效果,在通渭县18个乡镇共采集猪血清样品540份,采用正向间接血凝试验(HIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行免疫抗体水平检测。结果表明三种猪病的免疫抗体阳性率均较高,各阶段猪群之间差异不显著,都在85%以上,免疫效果较好。

信息技术与初中思想品德课整合初探

信息技术与课程整合是将信息技术以工具的形式与课程融为一体，使之成为教师的教学工具、学生的认知工具。信息技术的迅速发展和在教学中的应用，为初中思想品德课教学注入了新的活力，为大容量、高效率的教学和教学改革提供了新的支撑。

猪四种疫苗分点同步免疫与单苗免疫的效果对比试验

为了研究猪多苗分点同时免疫效果,探索一种切实可行的动物防疫新方法,以此提高基层动物防疫水平。本研究将口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌4种疫苗进行不同组合试验,即分别进行单苗、两两组合、三三组合、4种疫苗同时分点注射。试验分为15组,每组20头,用正向间接血凝试验和ELISA方法检测免疫抗体。结果表明:口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌4种疫苗分点同时注射产生的抗体水平,与单苗注射相比,差异不显著(P>0.05),疫苗注射后产生的抗体效价相对较高且稳定,不同疫苗间产生的抗体干扰和拮抗作用不明显,且抗体合格率均在70%以上,达到了国家规定的免疫要求,因此该免疫接种方法可在实际工作中推广应用。

定西市羊主要疫病流行病学调查与分析

通过对定西市近十年来羊主要疫病历史疫情资料进行汇总分析,结合实验室检查及对全市羊饲养情况、疫病发生情况等进行调查,摸清了当前对我市羊产业发展危害严重的主要疫病、发病情况和影响因素,并提出了综合防控措施,对有效防控疫情起到了一定作用。