基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体

目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法：将GW／3蛋白N末端的肽段（AAAERGAVELK）展示于T7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot等方法检测mAb的特异性。结果：利用表面展示GP73抗原表位的重组噬菌体为抗原免疫小鼠，通过细胞融合和筛选得到了能识别GP73蛋白的mAb，且特异性较好。结论：将蛋白质抗原的合适抗原表位展示在T7噬菌体表面，用这种重组噬菌体作为替代抗原可以制备识别全蛋白的mAb。

抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定，该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，该抗体检测HPPCn的极限为0．1μg／L；Western blot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为，该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13（IHLELRN）。结论：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。

高中生物探究性实验实施环节中几个问题的探讨

国际教育界有这样一句话：告诉我，我会忘记；分析给我听，我可能会记住；让我参与，我就能理解．生物学是一门以实验为基础的自然科学．生物学的每一个理论、每一项发现、每一项技术和成果，莫不是无数科学家经过艰苦的不懈努力，反复实验所取得的．在生物学实验课堂开展研究性学习有着得天独厚的条件，是中学开展研究性学习的重要阵地．本文就高中生物探究性实验实施环节中的几个问题进行初步的探讨．

高尔基体蛋白73与肝癌诊断

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)检查是目前肝癌诊断最常采用的手段,但血清AFP对肝癌诊断的灵敏度和特异性均不理想,因此,临床上迫切需要更理想的肝癌标志物。高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是一种II型高尔基体跨膜糖蛋白,与肝炎、肝硬化和肝癌等肝病的发生、发展密切相关,GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性为65%和90%,而核心岩藻糖化GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性则高达90%和100%。GP73有可能成为一种更理想的肝癌临床诊断标志物,而核心岩藻糖化的GP73在肝癌的早期诊断中可能具有更重要的意义。