不同单细胞全基因组扩增方法的比较及MALBAC在辅助生殖中的应用

单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)是指在单细胞水平对全基因组进行扩增的新技术,其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增,获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序,用于揭示细胞异质性。目前,WGA方法主要包括引物延伸预扩增(primer extension preamplification PCR,PEP-PCR)、简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)、多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)、多次退火环状循环扩增(multiple annealing and looping-based amplification cycles,MALBAC)等。本文对不同的单细胞WGA方法的原理及应用情况分别进行了阐述,并对其扩增效率进行评价和比较,包括基因组覆盖度、均一性、重现性、SNV(single-nucleotide variants)和CNV(copy number variants)检测力等。综合对比不同单细胞WGA方法后发现,MALBAC的扩增均一性最高、等位基因脱扣率最低、重现性最好,且对于CNV和SNV的检测效果最好。本文还阐述了MALBAC技术在人类单精子减数重组、非整倍体分析以及人类卵细胞基因组研究中的应用。

供体细胞的不同选择和处理对重编程过程的影响

供体细胞核移入去核的卵母细胞后,必定要经过表观遗传修饰的重编程过程,回到胚胎开始发育的全能状态。若重编程过程不完全,必定会导致克隆效率降低。但是,体细胞核的重编程能力不仅仅是在其移入去核的卵母细胞后所体现,它在不同的供体细胞当中的潜能也是不尽相同的。并且,对供体细胞进行不同的处理,也会导致其重编程的能力和程度不同。文章首先阐述了供体细胞的类型、代数、周期、年龄以及物种的不同选择对其核移植后重编程过程的不同影响,其后又通过对供体细胞的冷冻保存,血清饥饿以及不同试剂的处理等方面对重编程过程所起到的作用作出了概况性的论述与分析。

不同处理牛卵丘/颗粒细胞作为核供体对克隆胚发育的影响

本研究利用TSA(Trichostatin A)、ROS(Roscovitine)、血清饥饿和接触抑制方法处理牛卵丘/颗粒细胞,检测处理前后细胞乙酰化水平、周期分布及其对重组胚发育能力的影响,为提高核移植效率提供理论基础。分别采用上述方法处理牛卵丘/颗粒细胞,首先对处理的细胞形态及活率进行观察,并利用流式分选技术检测处理细胞的周期分布,再通过间接免疫荧光法检测经上述不同处理前后细胞乙酰化水平变化,最后以上述处理细胞作为核供体构建重组胚,比较重组胚发育水平的不同。试验结果显示,经上述处理的卵丘/颗粒细胞形态良好,活率均保持在94%以上;TSA处理卵丘/颗粒细胞后,其乙酰化水平较对照组和其他处理组明显增加(P<0.05),经ROS处理的卵丘/颗粒细胞乙酰化表达水平同样高于对照组(P<0.05),但仍低于TSA处理组(P<0.05),但经血清饥饿处理的卵丘/颗粒细胞乙酰化水平较对照组明显降低(P<0.05);利用TSA处理卵丘/颗粒细胞24 h后,细胞被明显抑制在G0/G1期,且较其他处理组的抑制现象更加明显(P<0.05);并且,经TSA处理后的卵丘/颗粒细胞充当供体细胞,其卵裂率和囊胚率较对照组明显增加(P<0.01,(85.2±3.4)%vs(68.6±6.7)%;(30.2±5.7)%vs(10.4±8.3)%)。经TSA处理的牛卵丘/颗粒细胞,与其他处理组相比,乙酰化水平较高,细胞形态良好,细胞周期被明显抑制在G0/G1期,且获得了较高的卵裂率和囊胚率,作为供体细胞的处理方式较为适合。

DNA甲基化与组蛋白修饰对克隆胚发育的影响

在正常的受精、发育过程中,基因组DNA不对称的去甲基化、重新甲基化以及组蛋白修饰作用发生在整个受精和胚胎发育过程中。本文将从DNA甲基化、DNA不对称的去甲基化和组蛋白修饰作用就其原理,相互之间的关系及其对胚胎发育情况的影响作以综述,并对近年来,DNA甲基化与组蛋白修饰作用在胚胎发育过程中的研究作以总结。

功能基因筛选方法的研究进展

功能基因的筛选研究可为深入了解表型性状的发生和发展过程以及作用机制奠定基础,因而正在成为研究家畜表型性状的重要途径。该领域的迅速发展主要依赖于生物技术的不断提高和发展。文章对功能基因筛选研究策略及其主要技术方法,如候选基因法、全基因组关联分析、二代测序技术、基因编辑技术等的研究进展及应用进行了综述,旨在为相关领域的研究提供参考。

TSA对滩羊成纤维细胞作为供体细胞的作用

为探索成纤维细胞作为供体细胞的潜能和TrichostatinA(TSA)处理供体细胞的适合浓度,提高克隆胚胎的发育水平。本研究分别利用100、50、25、10ng·mL-1TSA处理滩羊成纤维细胞,观察细胞形态,统计细胞活率,利用流式分选技术分析处理前后细胞的周期时相,同时通过间接免疫荧光法检测细胞乙酰化水平,并以经过10～50ng·mL-1TSA处理的成纤维细胞作为供体细胞,检测其重构胚发育水平。结果发现,当TSA的浓度达100ng·mL-1时,细胞大量死亡,不同浓度TSA处理细胞24h后,细胞周期被明显抑制在G0/G1期,乙酰化水平明显高于对照组,其中供体细胞经10ng·mL-1TSA处理的克隆胚胎卵裂率和囊胚率明显升高(P<0.05,(85.2±3.4)%vs(68.6±6.7)%,(35.6±5.7)%vs(10.4±8.3)%)。结果表明,经10ng·mL-1TSA处理的滩羊成纤维细胞周期同步化明显,乙酰化维持较高水平,重构胚胎发育水平明显提高,适合作为成纤维细胞的处理方法和浓度。

牛超数排卵影响因素分析

高效、稳定的超数排卵方法是获得充足卵源,充分发挥胚胎移植实际应用效果,扩大优良母畜繁殖速度的技术支撑和保障。长期以来,对于牛超数排卵影响因素的研究一直是生殖生物学家关注的热门课题之一,因此本文在查阅大量相关文献资料、总结实验经验和综合分析的基础上,紧密结合胚胎工程研究与应用过程中的实际需要,就环境条件、个体情况和超排处理方法对超排效果的影响因素等关键技术环节进行了概括性的论述,为建立牛超数排卵的科学体系奠定基础。

卵母细胞体外成熟的影响因素

随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。

表观遗传因素对哺乳动物胚胎发育的影响

哺乳动物核移植技术作为发育生物学的重要研究方法,在农业、医药、动物保护等方面具有巨大潜力。核移植的低成功率一直是其发展的瓶颈,而体细胞核在卵母细胞中的重编程效率低下是造成该瓶颈的重要诱因。DNA甲基化作为支配基因正常表达的表观遗传修饰方式,是调节基因组功能的重要手段,在胚胎正常发育过程中具有显著调节基因组功能的作用。本研究论述了DNA甲基化、基因印记、microRNA、X染色体失活等因素对哺乳动物胚胎发育中基因调控的影响。

囊胚培养液中游离DNA的重要染色体整倍性研究

目的探讨利用培养液中游离DNA检测对应囊胚的13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的效率。方法本研究共纳入239枚囊胚,所有的胚胎均来源于PGT-A周期。囊胚活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测胚胎的整倍性;培养液游离DNA采用无创胚胎染色体筛查(NICS)方法检测整倍性;采用盲法比较两者的结果。计算NICS在检测13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的敏感性、特异性、诊断效率、阳性预测值和阴性预测值。结果239枚囊胚中的209枚有NICS结果,NICS检出率为87.5%(209/239)。NICS方法在检测13、15、16、18、21、22号染色体的特异性、效率比较高,均>90%,NICS结果的阴性预测值超过97%;但是敏感性波动较大(33%~100%),阳性预测值较低(<50%)。结论NICS方法可以检测囊胚整倍性。当NICS结果显示这些重要染色体(13、15、16、18、21、22号染色体)为整倍体时,对应囊胚该条染色体整倍性几率高;但是当NICS结果显示这些重要染色体为非整倍体时,对应胚胎并不一定为非整倍体。

大步向前

近年来,贵阳商业审计师事务所不断发展进步,取得了卓越的成绩。随着贵阳市经济发展步伐的加快,1990年11月。

卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素

卵泡闭锁是哺乳动物卵巢中一种普遍现象,其实质是由卵巢颗粒细胞凋亡造成的。颗粒细胞的状态已经成为衡量卵母细胞质量乃至胚胎发育能力的一个重要参考指标,因此对颗粒细胞的凋亡开展研究显得十分必要。调控颗粒细胞凋亡的因素有多种,本文从与颗粒细胞凋亡相关的激素、与颗粒细胞凋亡相关细胞因子和与颗粒细胞凋亡相关的基因三方面对卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素进行综述。

单细胞基因组检测技术与临床应用

单细胞基因组检测是指利用全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)方法对单细胞水平的DNA进行扩增与检测的一系列技术手段。随着基因组学和生物医学的快速发展,这类检测技术在生命科学研究和精准医学方面发挥着越来越重要的作用,有助于提高对单细胞内基因组变异、修饰、染色质空间构象等生物学变化与功能的理解。本文对单细胞全基因组扩增方法、检测方法、在辅助生殖领域的临床应用和前景进行了综述,比较了不同方法的优缺点及其在实际应用中的表现。