一株产淀粉酶的嗜热地衣芽孢杆菌的筛选及鉴定

目前,需要将能在高温、高盐和碱性等极端环境中稳定的淀粉酶利用于农业生产中。从云南腾冲热泉附近的土壤样品中分离得到一株菌株,经验证其为一株能够产淀粉酶的嗜热菌。通过测定该菌的16S rRNA基因序列,进行序列比对和构建系统发育树,结合菌落和菌体形态的观察,确定了该菌的分类学地位,并利用非发酵细菌生化鉴定研究了该菌的生理生化性质。结果表明,该菌株为革兰氏阳性细菌,属于地衣芽孢杆菌,命名为CHJ05;通过不同温度和不同pH条件下的生长实验,确定了该菌生长的最佳温度为45℃,最适pH为9,还能在10%NaCl的高盐环境中稳定生长。该菌所产的淀粉酶在30~40℃和pH6~10能保持较高活性,Zn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)三种金属离子对酶活有促进作用,Mn^(2+)和Fe^(2+)对酶活有抑制作用。因此,CHJ05为一株能在高温、高盐以及碱性条件下稳定生长的菌株,为研究和开发在极端环境中继续产淀粉酶的菌株扩大资源储备。

红球菌35R1中邻苯二酚1,2-双加氧酶的表达及纯化

3,5-二甲基苯酚(3,5-DMP)是一种重要的精细化工原料以及有机合成中间体,在工农业生产领域广泛应用并大量排放到环境中,对人类和环境造成了巨大的危害。Rhodococcus sp.35R1是一株以3,5-二甲基苯酚为唯一碳源和能源的高效降解菌。为验证菌株35R1中3,5-二甲基苯酚是通过邻苯二酚途径开环代谢的,通过生物信息学分析,寻找到35R1基因组上的邻苯二酚1,2-双加氧酶编码基因catA,通过一步克隆法将其连接到表达载体pET28a(+)上,然后,将其转化至表达宿主E.coli BL21(DE3)中,从而进行该基因的异源表达。结果成功在35R1基因组上扩增到catA基因,构建了重组质粒pET28a-catA,采用自诱导的方法诱导表达了邻苯二酚1,2-双加氧酶,纯化酶可催化邻苯二酚生成顺式粘糠酸。