离体大鼠肠道菌群对野漆树苷的代谢研究

目的:研究大鼠肠道菌群对野漆树苷的体外代谢转化作用。方法:将野漆树苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液在37℃厌氧条件下孵育,不同时间点取样经乙酸乙酯萃取后,采用HPLC-MS/MS对代谢产物进行定性和定量分析。结果:孵育4 h后野漆树苷已被肠道菌代谢完全,在代谢组的孵育液中发现了芹菜素和柚皮素两种代谢产物,以芹菜素为主,并且在4 h达到较高浓度,随后缓慢降解,24 h后消失。结论:在离体条件下,大鼠肠道菌群对野漆树苷具有显著的代谢转化作用,提示代谢产物为其生物活性成分。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中的野漆树苷及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中野漆树苷的LC-MS/MS测定方法,并研究静脉注射后野漆树苷在大鼠体内的药代动力学特征。方法大鼠血浆样品经乙酸乙酯萃取处理,用色谱柱Phenomenex C8（30 mm×2.00 mm,3μm）进行分离,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源（ESI）,负离子模式,多反应监测（MRM）,选择离子分别为野漆树苷（m/z 577.6→269.1）,内标柚皮素（m/z 271.0→151.0）,将建立的方法应用于测定大鼠静脉注射野漆树苷后血浆的药物浓度,并采用DAS 2.0计算得主要药代动力学参数。结果大鼠血浆中野漆树苷在1~2000μg/L浓度范围内线性关系良好,日内、日间精密度（RSD）均〈10%,准确度（RE）在±7%之间,低、中、高3个浓度下提取回收率为86.8%~91.0%,无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静注该药（5 mg/kg）后AUC0-t为（72627.8±18067.9）μg·min/L,t1/2为（52.1±14.3）min,CLz为（0.07±0.02）L/（min·kg）。结论该检测方法简单、快速、灵敏、准确,适用于野漆树苷血药浓度监测及其药动学研究。药代动力学参数表明大鼠静注该药后体内消除较快。

串联质谱法检测24 h尿醛固酮在原发性醛固酮增多症筛查中的临床应用价值

目的:探讨液相色谱串联质谱法检测尿醛固酮在原发性醛固酮增多症筛查中的临床应用价值。方法:诊断性能评价。选取2019年1月到10月间符合入组标准的住院患者413例,其中原发性醛固酮增多症(PA)患者60例,原发性高血压患者353例。测定立位2 h血浆醛固酮浓度(PAC)及肾素浓度(DRC),留取24 h尿液采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)检测尿醛固酮。通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估尿醛固酮及尿醛固酮与肾素浓度比值(UADRR)在筛查PA中的价值,并与血浆醛固酮肾素浓度比值(ADRR)筛查PA的结果进行比较,同时考察尿钠大于200 mmol/24 h、老年患者或低血钾患者中尿醛固酮在筛查PA中的应用价值。结果:LC-MS/MS检测尿醛固酮的ROC曲线下面积为0.725(95%CI 0.679~0.767),最佳切点为7.13μg/24 h,低于ADRR的ROC曲线下面积(0.958,95%CI 0.934~0.975)。UADRR的ROC曲线下面积为0.947(95%CI 0.920~0.966),最佳切点为1.11(μg/24 h)/(μIU/ml),敏感度和特异度分别为91.7%和89.0%,与ADRR无统计学差异。当24 h尿钠含量大于200 mmol时,尿醛固酮的ROC曲线下面积为0.834(95%CI 0.730~0.910),最佳切点值为9.31μg/24 h,该切点下敏感度和特异度分别为90.9%和68.7%。对于60岁以上老年患者,尿醛固酮的ROC曲线下面积为0.860(95%CI 0.770~0.925),最佳切点值为6.91μg/24 h,该切点下敏感度和特异度分别为84.6%和81.3%。当入院血钾水平小于3.50 mmol/L时,尿醛固酮的ROC曲线下面积为0.822(95%CI 0.684~0.917),最佳切点值为10.63μg/24 h,该切点下敏感度和特异度分别为85.7%和66.7%。结论:LC-MS/MS检测尿醛固酮可为临床筛查PA提供参考,且在24 h尿钠大于200 mmol、老年患者或低血钾患者中筛查性能更优,若联合肾素浓度检测可提供与ADRR相当的筛查价值。

LC-MS/MS同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分的含量

目的：建立运用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分（鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷）含量的分析方法。方法：采用Venusil MP C18色谱柱（2.10 mm×50 mm,5μm）,以甲醇（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0-0.3 min,10%A;0.3-0.8 min,10%-95%A;0.8-3.0 min,95%A;3.0-3.2 min,95%-10%A;3.2-4.5 min,10%A）,流速0.35 m L·min-1,柱温为室温,进样量10μL。采用电喷雾离子源（ESI）,正离子模式下多反应监测扫描（MRM）,通过优化三重四级杆的质谱仪参数以及4个化合物相关的质谱参数,进行检测和定量分析。结果：通过仪器精密度,线性范围,重复性,稳定性,加样回收率等方法学验证,发现其结果均符合定量分析的相关标准。鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷在测定浓度范围内均具有良好的线性关系（r≥0.994 7）;平均加样回收率（n=6）在90.8%-112.1%,RSD均≤5.1%。结论：该方法简便、快速、准确、可靠,可用于鸡矢藤提取物中4种主要有效成分的含量测定。