神经病理性疼痛诱导小鼠脊髓CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)表达上调

目的:观察神经病理性疼痛小鼠脊髓中C/EBPα的表达,探讨其对疼痛行为的影响。方法:小鼠腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)诱导神经病理性疼痛。在不同时间点取L5节段脊髓,通过实时定量PCR,Western blot和免疫荧光的方法,检测SNL术后脊髓中C/EBPα的表达变化;免疫荧光双标方法检测C/EBPα分别与神经元标志物Neu N、星形胶质细胞标志物GFAP,以及与小胶质细胞标志物CD11b的共定位情况;鞘内注射氯化锂观察对疼痛行为的影响。结果:SNL诱导小鼠脊髓内C/EBPα长时间表达上调;C/EBPα主要分布在脊髓神经元中,少量分布于星形胶质细胞,且大部分定位在细胞核。鞘内注射氯化锂缓解了神经病理性疼痛。结论:外周神经损伤诱导C/EBPα在脊髓背角神经元中表达。靶向抑制脊髓C/EBPα缓解神经病理性疼痛。

LncRNA在动物科学中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200nt的非编码RNA,能够存在于细胞核和细胞质中。LncRNA能够以顺式和反式作用方式调节基因表达,是一类重要的基因表达调节分子。LncRNA参与细胞分化发育、X染色体失活、肿瘤、免疫、神经系统和心血管系统疾病等多种生物过程和疾病的调控,具有重要的研究价值。作者主要对LncRNA的分类和来源、作用机制、研究现状及其在畜牧兽医中的研究情况进行了综述,为LncRNA在兽医和畜牧业科学中的研究和应用提供参考。

右美托咪定对LPS诱导星形胶质细胞MCP-1分泌的影响

目的研究右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA分泌的影响。方法培养原代大鼠星形胶质细胞,待诱导分化成熟,免疫组化检测α-2A肾上腺受体的表达;不同浓度LPS刺激星形胶质细胞,观察LPS浓度与MCP-1 mRNA表达的量效关系;随后将细胞随机分为6组:对照组(control组)、LPS(200 ng/ml)刺激组(LPS组)、右美托咪定(DEX)500 ng/ml孵育组(DEX组)、DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS(200 ng/ml)组[DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS组],荧光实时定量PCR检测各组MCP-1mRNA的表达。结果α-2A肾上腺受体在星形胶质细胞表达,与细胞标志物GFAP完全共标;不同浓度LPS刺激可引起MCP-1剂量依赖性的表达增加(F(6,41)=289.35,P<0.001),LPS刺激引起MCP-1 mRNA表达量增加的ED50为150.8 ng/ml,ED95为344.1 ng/ml,r=0.86;与LPS组相比,不同浓度右美托咪定均可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞MCP-1 mRNA升高(F(5,21)=454.15,P<0.001)。结论右美托咪定可抑制LPS刺激大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA的表达,该作用可能是其减轻疼痛的机制之一。

趋化因子CXCL16及受体CXCR6在神经病理性疼痛小鼠背根神经节中的表达变化

目的:检测神经病理性疼痛小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中CXC型趋化因子配体16(C-X-C Motif Chemokine Ligand 16,CXCL16)及其受体CXCR6的表达情况,探讨CXCL16在疼痛的发生发展过程中所发挥的作用。方法:采用ICR小鼠进行坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI),诱导神经病理性疼痛,取术侧不同时间点L4~6节段DRG,通过实时定量PCR、Western Blot和免疫荧光的方法,检测SNI后CXCL16和CXCR6的m RNA和蛋白表达变化;鞘内注射CXCL16重组多肽,观察对疼痛行为的影响。结果:(1)SNI 3 d后可见小鼠DRG中Cxcl16 m RNA的表达显著增加(P<0.001),可持续至14 d(P<0.001),SNI后7 d CXCL16蛋白表达也显著增加(P<0.05),免疫荧光结果表明CXCL16主要分布在DRG中小型神经元中;(2)CXCR6的m RNA和蛋白在SNI 7 d显著增加(P<0.05);(3)鞘内注射CXCL16多肽引起小鼠机械性触诱发痛。结论:外周神经损伤诱导CXCL16和CXCR6在DRG表达增加,CXCL16能够导致痛觉过敏,提示它可能在神经病理性疼痛中发挥作用。

CXCL13通过CXCR5激活星形胶质细胞中JNK参与痛觉过敏

目的:探讨CXCL13及其受体CXCR5参与痛觉过敏的机制。方法:细胞培养和免疫荧光染色检测脊髓背角神经元中CXCL13的表达;通过转染CXCL13和CXCR5过表达质粒研究CXCL13和CXCR5的相互作用;Western Blot方法检测CXCL13重组因子刺激原代星形胶质细胞后JNK磷酸化水平变化和鞘内注射CXCL13后脊髓中JNK磷酸化水平变化;行为学检测鞘内注射JNK抑制剂SP600125对CXCL13引起的热痛觉过敏和机械性触诱发痛的影响。结果:体外培养的脊髓背角神经元表达并释放CXCL13;CXCL13分泌后与受体CXCR5结合并发生内化;CXCL13孵育培养的星形胶质细胞快速而短暂地激活JNK;鞘内注射CXCL13快速且短暂激活脊髓中的JNK;鞘内注射JNK抑制剂缓解了CXCL13诱导的热痛觉过敏和机械性触诱发痛。结论:CXCL13通过CXCR5激活星形胶质细胞中JNK参与痛觉过敏。

趋化因子及其受体:神经病理性疼痛的潜在治疗靶点

神经病理性疼痛是临床上常见且难治的一种慢性疼痛,严重影响病人的生活,也给家庭和社会带来沉重的经济负担。目前的治疗药物和干预措施对神经病理性疼痛的疗效并不理想。趋化因子是一类结构相似的小分子分泌蛋白,通过激活相应的G蛋白偶联受体启动胞内信号通路,参与细胞迁移、增殖、炎症等生理和病理过程。越来越多的证据表明,外周和中枢神经系统内多种趋化因子及其受体(如CCL2/CCR2,CXCL1/CXCR2,CXCL12/CXCR4,CX3CL1/CX3CR1,CXCL13/CXCR5,CXCL10/CXCR3)在慢性疼痛下表达增加,它们通过介导神经元和非神经元细胞的相互作用、增强神经炎症从而在慢性疼痛的发生发展中起重要作用。同时,趋化因子及其受体的表达受到转录因子、miRNA、DNA甲基化、组蛋白修饰等调控。作为分泌型的小分子蛋白,趋化因子从神经元或非神经元细胞释放后作用于同类或其他类型细胞上的同源受体,激活MAPK及PI3K等胞内信号促进下游基因的表达,进一步促进炎症反应;或通过胞内激酶调控离子通道的功能,提高神经元兴奋性或增强突触传递效能来促进外周敏化和中枢敏化。动物行为学实验证明,采用趋化因子及其受体的siRNA、中和抗体、小分子拮抗剂能有效缓解神经病理性疼痛。因此,趋化因子及其受体可能作为治疗神经病理性疼痛的潜在靶点。

趋化因子CXCL10作为神经病理性疼痛生物标记物的研究

目的:目前临床上缺乏神经病理性疼痛诊断和预后判断的客观指标,本研究旨在检测神经病理性疼痛小鼠和人的脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)和血清中趋化因子CXCL10的表达情况。方法:结扎ICR小鼠L5脊神经(spinal nerve ligation,SNL)构建神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)模型,足底注射福尔马林或完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)建立炎症性疼痛模型;收集捐献者的脑脊液和血液,采用Real-time PCR、半定量PCR、Western Blot、免疫荧光和ELISA方法,分别检测CXCL10和CXCR3的mRNA和蛋白表达、CSF和血清中CXCL10的表达。结果:①Cxcl10在正常ICR小鼠的脾脏、淋巴结、背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)、脊髓和脑中有不同程度的基础表达;②Cxcr3在正常ICR小鼠的脾脏、淋巴结、DRG、脊髓和脑中也有不同程度的基础表达;③与假手术组相比,SNL模型小鼠CSF与血清中CXCL10含量显著增加(P<0.05,P<0.01);急性炎症性疼痛小鼠CSF和血清中CXCL10与对照组相比无显著变化;慢性炎症性疼痛小鼠CSF中CXCL10与对照组相比无显著变化;血清中CXCL10显著增加(P<0.05);④健康人类受试者的脊髓、DRG和淋巴结中有CXCL10和CXCR3表达;⑤疱疹后神经痛病人CSF与血清中CXCL10与对照组相比显著增加(P<0.05),骨性关节炎病人CSF和血清中CXCL10无显著增加。结论:神经病理性小鼠CSF和血清以及疱疹后神经痛病人CSF和血清中CXCL10表达显著增加,CXCL10可能作为神经病理性疼痛的生物标志物。