乙酸菌糖磷酸化作用的研究

对７ 种乙酸菌（ Ａｃｅｔｉｔｏｍａｃｕｌｕｍ ｒｕ ｍｉｎｉｓ， Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗｏｏｄｉｉ， Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕ ｍ ｌｉｍｏｓｕ ｍ 和分离株Ａ２ 、Ａ４ 、Ａ１０ 、Ｈ３ＨＨ） 的葡萄糖和２脱氧葡萄糖磷酸化作用进行了研究。尽管所有机体都存在磷酸化反应，但它们在依赖ＰＥＰ 和ＡＴＰ 的比例上有实质性区别。分离菌株Ａ１０ 具有最高的依赖ＰＥＰ 的葡萄糖磷酸化活力（１１６２ｎｍｏｌ·Ｌ－１·ｍｇ － １·ｍｉｎ － １） ，Ａ１０ 、Ｈ３ＨＨ和Ｅ．ｌｉｍｏｓｕｍ 都具有葡萄糖磷酸转移酶系统（ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｓｙｓｔｅｍ ，ＰＴＳ） 。相反，Ａ．ｒｕｍｉｎｉｓ、Ａ．ｗｏｏｄｉｉ、Ａ２ 和Ａ４ 则不具有ＰＴＳ活力。这七株菌的葡萄糖依赖ＡＴＰ 的磷酸化活力都高于依赖ＰＥＰ的磷酸化活力，但其程度有所不同。Ａ１０ 和Ｈ３ＨＨ 的葡萄糖ＰＴＳ可通过胞外葡萄糖诱导，并且其比活在对数期随培养时间延长而增加。此外，还检测到Ａ１０

反刍动物瘤胃微生物酶类膜消化(触壁消化)的研究

本试验旨在探明反刍动物前胃内是否存在由微生物酶类参与的膜消化。在初生牛犊的前胃上皮,未发现蛋白酶和脲酶的活力。但在成年水牛和湖羊的前胃三室上皮,都不同程度地存在着这些消化酶。成年牛瘤胃还有上皮和腔之间尿素分解的正协同效应及纯化蛋白酶的上皮吸附效应,用15000倍扫描电镜观察,发现前胃上皮乳头表面有许多微突起,它们由可吸附酶分子的多糖层履盖,且成年动物的糖层较厚。由此推断,有活力的消化酶能借助于前胃的特殊结构,和与之接触的食糜发生膜消化。

地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录

乙酰辅酶A羧化酶 (AcetylCoACarboxylaseEC 6.4.1 .2 ,ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A ,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步 ,也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌 (M .tuberculosis)和天蓝色链霉菌 (S .coelicolor)中ACC -α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好 ,设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约 2 5 0bp的片段 ,并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC -α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1 797bp,编码一个 5 98个氨基酸的蛋白 ,推算出的分子量是 63,71 4Da ;基因G +Cmol%含量为70 .1 % ,符合U32基因结构特征 ,距起始密码子GTG上游 6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG ,并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET2 8(b)系统构建表达载体 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中实现了accA的诱导表达 ,产物大部分以可溶形式存在 ,并通过WesternBlot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。NorthernBlot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。

地中海拟无枝菌酸菌U-32的3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)基因的克隆与序列分析

地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ３２是一种临床上重要的抗生素———力复霉素ＳＶ的产生菌。研究表明，在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中，３氨基５羟基苯甲酸合成酶（ＡＨＢＡＳ）是合成中间体Ｃ７Ｎ母核（又称ＡＨＢＡ）的关键酶。通过筛选以广宿主粘粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ｐＬＡＦＲ３为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２的基因文库，获得６个阳性克隆子。将含有ＡＨＢＡＳ基因的约２５ｋｂ的片段克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ和ＫＳ上，进行酶谱分析得到其在染色体上的初步定位。序列测定表明地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２中的ＡＨＢＡ合成酶基因，由１１６７ｂｐ组成，起始密码子为ＡＴＧ，终止密码子为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸，所克隆到的ＡＨＢＡ合成酶基因在大肠杆菌的启动子控制下获得诱导表达，蛋白分子量约为４３ｋＤ。

量子点激光器及其应用研究

报道了用分于束外延生长出自组装垂直耦合InAs/GaAs大功率量子点激光器(QDLaser)材料和器件。对腔长为 80 0 μm ,室温下和 77K下连续激射阈值电流密度分别为 2 18A/cm2 和 4 9A/cm2 ,波长为 96 0nm ,最大输出功率大于lW。首次报道在0 54W工作下 ,寿命超过 30 0 0小时 ,功率仅下降 0 4 9db ,并制备出实用化的大功率量子点激光器激光耦合模块 ,室温连续激射功率超过

头状链轮丝菌染色体复制起始区的克隆和对变铅青链霉菌的转化

头状链轮丝菌 (Streptoverticillumcaespitosus)ATCC2 742 2是抗肿瘤药物———丝裂霉素A的产生菌 ,根据高GC含量革兰氏阳性菌染色体复制起始区两端基因序列的保守性 ,采用PCR方法从该菌中克隆了一段包含染色体复制起始区 (oriC)的 1 3kb片段。序列分析发现 ,克隆片段与天蓝色链霉菌的oriC及邻近区域的同源性达 80 %以上 ;头状链轮丝菌oriC中含有 2 2个DnaA box ,保守序列为TTGTCCACA。以克隆片段构建的质粒可以跨属转化变铅青链霉菌 (S .lividans)ZX7,原生质体转化效率为 3 2× 10 2 个 μgDNA ;质粒在S .lividansZX7中能以低拷贝形式稳定存在 ;转化子的菌落和菌丝形态均正常。头状链轮丝菌oriC序列与几种链霉菌的oriC有较高的同源性 ,以及在变铅青链霉菌中仍具有复制起始活性等说明链轮丝菌属与链霉菌属在系统发生上关系较近 ;但采用最大似然法分析oriC序列构建的头状链轮丝菌与几种链霉菌的系统进化树表明 ,头状链轮丝菌与几种链霉菌之间的分化距离远大于链霉菌之间的分化距离。

复方锌洁粘贴片治疗口腔粘膜炎症的临床疗效观察

目的 :观察复方锌洁粘贴片治疗口腔粘膜炎症的效果。方法 :用随机法将 63例门诊口腔粘膜炎症患者分成两组 ,用单盲法给药。实验组用复方锌洁粘贴片 ,对照组用安慰剂。结果 :实验组治疗有效率为 98 4 2 % ,对照组治疗有效率为68 2 5 %。两组比较差异有显著性 (p <0 0 1)。结论 :复方锌洁粘贴片有消炎、止痛及收敛的作用 ,临床观察疗效显著。

红光InAlAs量子点的结构和光学性质

利用ＭＢＥ方法在（００１）衬底上成功地生长了密度大、尺寸小、发红光的ＩｎＡｌＡｓ／Ａｌ－ＧａＡｓ 量子点结构． 通过原子力显微镜观测表明， ＩｎＡｌＡｓ量子点的密度和大小都随覆盖厚度的增加而增大； 发现Ａｌ原子的表面迁移率决定ＩｎＡｌＡｓ 量子点的形貌． 光荧光谱证实了量子点的发光峰值在红光范围， 并结合形貌的统计得到了量子点的发光峰展宽主要是受量子点的横向尺寸影响．

瘤胃微生物胞外蛋白酶的提纯及性质鉴定

反刍动物的瘤胃中不存在腺体,消化酶完全来自于微生物。瘤胃降解的蛋白,除一部分为机体必需外,大部分被微生物浪费。因此,瘤胃微生物蛋白酶活力的高低直接影响饲料蛋白的利用率。目前,研究者们正寻找各种途径增加通过瘤胃的蛋白,但实验中常将微生物的整体作用和具体酶的作用相混淆,故本试验旨在提取瘤胃微生物胞外蛋白酶纯品,较全面地了解其性质和特点。

地中海拟无枝菌酸菌U32染色体特性的脉冲场电泳分析

地中海拟无枝菌酸菌 (Amycolatopsismediterranei)U32是产力复霉素SV的工业生产菌株。采用脉冲场电泳分析发现 ,地中海拟无枝菌酸菌U32仅有一条约 1 0Mb的线性染色体 ,没有内源性质粒。利用Southern杂交法 ,对 1 1个编码力复霉素生物合成、相关初级、次级代谢关键酶以及调控蛋白的基因 ,在U32染色体DNA的PshBI酶切片段上进行了定位。分析发现在一条长度约 70 0kb的PshBI酶切片段上 ,分别存在着力复霉素合成基因簇 (rif)、氮代谢的亚硝酸还原酶小亚基基因 (nasD)、衔接初级与次级代谢的甲基丙二酰变位酶基因 (mcm)、脂肪酸代谢的乙酰辅酶A羧化酶生物素载体蛋白基因 (accA)以及一套核糖体RNA转录单元。同时还发现U32至少有 5套核糖体RNA转录单元。其余定位的基因均只出现单一杂交信号。

打印机、传真机能效限定值及能效等级测试

结合采集数据过程中遇到的问题,分析打印机、传真机能效限定值以及能效等级标准中的测试方法,分别介绍了典型能耗法(TEC法)和模式功率法(OM法)的计算模型、计算方法以及检测的基本步骤和方法,并提出在测试过程中应该注意的事项。

假单胞菌sp.130 GL-7-ACA酰化酶的核苷酸和蛋白质序列分析

对来源于假单胞菌sp .130的戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (GL 7 ACA)酰化酶结构基因的全序列及所编码蛋白质的α,β亚基的N末端和C末端的氨基酸序列进行了测定。将蛋白质序列与其他同类的GL 7 ACA酰化酶进行了同源性比较 ,结果显示该酶与来源于假单孢菌GK16和C42 7的酰化酶的序列有较高同源性 ,而与其它同类酰化酶的同源性较低。这些酶的α亚基N 末端差别较大 ,但是 β 亚基的N

以技术集成促进生物催化技术转移

生物催化研究和产业化都在迅速发展,但两者之间的联系并不紧密,成功的技术转移很少。缺乏集成研发平台成为生物催化技术转移的瓶颈。在国内相关企业的技术力量不足以进行技术集成的现状下,建议中国科学院建设酶工程集成研发平台,依托此平台企业和科研院所建立广泛的技术合作和技术转移关系,建立生物催化产业的产学研价值链。

砷化镓晶体缺陷显示的可靠性分析

为了提高砷化镓缺陷检测的可靠性，对熔融ＫＯＨ腐蚀法、ＡＢ腐蚀法和超声ＡＢ腐蚀法三种腐蚀方法进行了可靠性对比实验研究．发现超声ＡＢ腐蚀法操作简便，适用范围广，显示缺陷的可靠性和充分性都很高．同时具有分辨能力强，获得缺陷信息量多等特点，是一种值得推广的ＧａＡｓ晶体缺陷检测方法．作者提出了超声ＡＢ腐蚀检测ＧａＡｓ晶体缺陷的检测工艺条件．并提供了部分有代表性的照片．可作有关部门在今后修订国家标准时参考．

Ca^(2+)和Mn^(2+)对地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U-32次生代谢及激酶活性的影响

采用Ca2 + 、Mn2 + 和地中海拟无枝菌酸菌U 32共培养的方法 ,通过滤纸法检测抗生素含量和离体磷酸化反应检测激酶活性 ,研究Ca2 + 和Mn2 + 对地中海拟无枝菌酸菌U 32次生代谢的影响。低浓度Ca2 + 和Mn2 + 均能促进地中海拟无枝菌酸菌U 32的生长 ;随着离子浓度增高 ,促生长效果下降 ;浓度太高 ,则表现为抑制作用。 5mmol/LCa2 + 对地中海拟无枝菌酸菌U 32的色素绝对产量增加效果最好 ,而对其相对于菌体的色素量则以 5mmol/LMn2 + 的效果最好。 0 5mmol/LCa2 + 对地中海拟无枝菌酸菌U 32的抗生素合成有很好的作用 ,而Mn2 + 有一定的抑制作用。对地中海拟无枝菌酸菌U 32的无细胞提取液进行离体磷酸化反应检测 ,发现Ca2 + 能促进其激酶的活性 ,而Mn2 + 则相对抑制了某些激酶活性。

合成气的生物利用与定向转化

合成气是来源于石化、煤化工以及生物质加工行业的一类重要原料气体。现有的化学催化路线可将合成气转化为氨、烯烃、甲醇等大宗化工产品,但尚无法实现选择性地合成具有较高附加值的长碳链化合物,而发展合成气的生物转化路线是克服上述难题、拓展产业链的有效策略。本文综述了随着分子遗传操作工具以及合成生物学的快速发展,合成气生物利用相关的菌株代谢工程设计、改造以及发酵工艺优化等方面的研究进展和产业化进程,并指出目前该技术路线在固碳效率、产物合成种类及产量方面还存在不足,亟待优化以满足大规模工业化推广应用的要求。本文还对合成气生物利用与转化的研究现状进行了梳理和总结,并探讨了未来的发展方向,以期为建立具有经济竞争力的合成气生物利用技术和工艺提供参考。

利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换/中断系统

地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌 ,其遗传操作一直是一个难题。在该菌株DNA高效电转化的基础上 ,利用同源重组的原理 ,建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换 中断系统。通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选 ,成功地用α 淀粉酶基因 (amy)取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的 3 氨基 5 羟基苯甲酸合成酶基因 (ahbas)。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是 0 5 %～ 0 7%和2 %。将质粒pDK110变性后转化可显著提高重组频率 ,在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率。此外 ,通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选 ,我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD ,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因 (apr) ,其效率约为 30～ 5 0转化子 μgDNA。

Burkholderia pickettii中D-乙内酰脲酶基因(dha)的克隆、测序及表达

对一株能转化D ,L 对羟基苯乙内酰脲为D 对羟基苯甘氨酸的菌株MMR0 0 3进行了细菌分类学鉴定 ,该菌为皮氏伯克霍尔德氏菌 (Burkholderiapickettii)。实验通过Southern杂交 ,部分文库构建和筛选 ,并经一系列亚克隆测序分析 ,获得一长度为 1374bp的完整开放阅读框 ,编码 45 8个氨基酸的D 乙内酰脲酶基因。用该基因序列构建的高表达质粒pXZPH2转化E .coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后 ,检测到D 乙内酰脲酶活性。该基因编码的氨基酸序列经Blast同源比较分析与放射形土壤杆菌NRRLB112 91所产相应酶有 85 %的同源性。以D ,L 对羟基苯乙内酰脲为底物测得的表达酶的活力为 0 6 6u mL ,比相同条件下所测出发菌株MMR0 0 3的酶活提高了

细菌信号传导调控元件的合成生物学研究进展

合成生物学的一个重要目标是设计、改造微生物（主要指细菌），使其能够自主执行复杂任务，如合成重要生物基产品（药物、生物燃料等）、疾病治疗以及环境修复等，造福人类社会。要完成这些任务，细菌必须依赖其信号传导系统，