不同葡萄糖浓度对INS-1细胞PPARδ表达的影响

目的研究不同葡萄糖浓度对大鼠INS-1细胞PPARδ表达的影响,以初步阐明PPARδ在胰岛细胞糖脂代谢关联中的作用。方法分别用含3、11、20mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基,培养INS-1细胞24h后,冻融法裂解细胞,检测INS-1细胞内的甘油三酯水平。提取RNA和核蛋白,RT-PCR半定量检测PPARδmRNA,Westernblot检测PPARδ蛋白表达。结果随着葡萄糖浓度的升高INS-1细胞内甘油三酯含量增高,而PPARδmRNA和蛋白的表达均明显降低。结论葡萄糖促进,INS-1细胞内甘油三酯沉积,而PPARδ的表达下降可能是高糖条件下胰岛细胞脂质沉积的重要原因。

骨形态发生蛋白7改善糖代谢的作用及其机制

目的探索骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)对2型糖尿病小鼠糖代谢的影响及其机制。方法将8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用小剂量链脲佐菌素注射联合高脂喂养建立2型糖尿病小鼠模型。将建模成功的小鼠分为4组(n=20):2型糖尿病模型组,PBS对照组(PBS腹腔注射),BMP7低剂量组(BMP7,100μg/kg,隔日腹腔注射),BMP7高剂量组(BMP7,200μg/kg,隔日腹腔注射)。4周后,分别检测血糖、血总胆固醇、甘油三酯、血清胰岛素水平、体质量的变化,并计算胰岛素分泌指数HOMA-β和胰岛素抵抗指数HOMA-IR。取小鼠胰腺,Western blot检测蛋白激酶D1(protein kinase D1,PKD1)及磷酸化PKD1的表达变化。结果与2型糖尿病模型组和PBS对照组相比,BMP7高剂量组和低剂量组的血糖、甘油三酯均明显降低(P<0.05),而血清胰岛素水平、HOMA-β均显著升高(P<0.05)。BMP7低剂量组和BMP7高剂量组的体质量均低于对照组(P<0.05),BMP7高剂量组的HOMA-IR低于对照组(P<0.05)。Western blot检测发现BMP7处理组的PKD1蛋白表达量与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),但磷酸化PKD1水平均明显升高(P<0.05)。结论BMP7可以促进2型糖尿病小鼠的胰岛素分泌和改善其胰岛素敏感性,从而降低血糖,其改善胰岛素分泌作用可能与增加PKD1磷酸化有关。

脉冲电磁场治疗原发性骨质疏松近期疗效观察

目的观察脉冲电磁场对原发性骨质疏松患者的骨密度及生化指标的改善情况。方法治疗组采用Union2000型骨质疏松治疗系统联合钙尔奇D片,治疗共60d,而对照组采用钙尔奇D片,连用60d。治疗前后分别测定骨密度、血骨钙素、尿羟脯氨酸和临床腰背痛评分,测定结果用SPSS软件,分别进行组内和组间比较。结果①对照组治疗前后骨密度(L2L4)无明显变化,治疗组治疗后与治疗前比较骨密度有所增加,但无统计学意义;②对照组治疗前后临床腰背痛评分无明显差异,治疗组治疗后临床腰背痛评分较治疗前明显增加;③对照组治疗前后血骨钙素无统计学差别,治疗组治疗后骨钙素水平较治疗前明显升高;④对照组治疗前后尿羟脯氨酸浓度无统计学差异,治疗组治疗前后尿羟脯氨酸无统计学差异。结论脉冲电磁场治疗原发性骨质疏松在缓解临床骨痛症状方面效果十分显著,并且能够明显提高患者的骨形成速率,而对骨吸收速率无明显影响。但本研究观察脉冲电磁场中对骨密度无明显改善,这可能是与随访时间较短有关。

小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisom e proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体。方法通过KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pm eⅠ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌B J5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒。pAd-mPPARδ经PacⅠ线性化后用L ipofectam ineTM2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液。将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和W estern b lot检测PPARδ蛋白的表达。结果成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010pfu/m。l重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加。结论该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础。

骨形态发生蛋白7对胰岛素分泌的影响及机制研究

目的探讨骨形态发生蛋白7(bone morphorgenetic protein 7,BMP7)对胰岛细胞胰岛素分泌的影响。方法Western blot检测小鼠胰岛细胞株MIN6中3种BMP7的Ⅰ型受体BMPR1A、BMPR1B、ACVR1A的表达情况。将MIN6细胞分为4组:PBS对照组,重组人BMP7(rhBMP7)低、中、高剂量组(rhBMP7终浓度分别为10、50、100 ng/ml),每组设5个复孔。ELISA检测各组细胞培养基中的胰岛素分泌情况。激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度变化。结果BMPR1A、BMPR1B、ACVR1A均表达于MIN6细胞。PBS对照组及rhBMP7低、中、高剂量组的胰岛素浓度分别为(0.42±0.11)、(0.63±0.22)、(0.82±0.19)、(1.24±0.26)ng/(ml.μg)。与对照组相比,rhBMP7低、中、高剂量组的胰岛素分泌均明显增加(P<0.05)。PBS对照组及rhBMP7低、中、高剂量组的细胞内钙离子浓度增加分别为(3.5±2.1)%、(4.2±2.3)%、(5.1±3.5)%、(4.9±2.7)%,4组间差异不显著(P>0.05)。结论 BMP7可显著促进胰岛细胞的胰岛素分泌,其作用机制可能是调控非钙离子浓度依赖的胞吐环节。

结合局部解剖学知识提高内分泌临床带教效果

临床学习是医学生培养过程中的极其重要的一环,是学生从课堂走向临床的第一步,是医学理论联系临床实践的重要阶段[1]。内分泌及代谢疾病涉及机体全身多个器官,各项检查检验较复杂,专科性强,相对难以掌握。本文就如何结合局部解剖学知识,提高内分泌科临床带教效率总结如下。

解剖知识在妇科内分泌临床带教中的应用

随着生活水平的提高和女性自我关注度的增强，妇科内分泌疾病的发生率和就诊率都明显上升。但是由于妇科内分泌的发病机制复杂、患者自我保护意识强等特点，其临床带教已成为内分泌科教学环节中的难点[1]。本文在总结我科多年的临床带教经验基础上，结合局部解剖学知识，就如何提高妇科内分泌的临床教学水平总结报告如下。

自体骨髓间充质干细胞体外扩增后移植治疗糖尿病足

背景:国外动物实验表明体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足效果较好。目的:观察自体骨髓间充质干细胞体外扩增后患肢移植的效果和安全性。设计:随机对照临床观察。对象:解放军第三军医大学西南医院2006-10/2008-10住院确诊的糖尿病足患者40例,男22例,女18例,年龄(64.3±12.7)岁,按wagner分级2级8例,3级18例,4级14例。按查表法随机分为细胞移植组22例,常规治疗组18例,实验经医院伦理委员会讨论批准。方法:常规治疗组给予常规降糖、降压、调脂、抗感染、抗凝、营养神经、扩张血管等药物治疗,局部常规换药,有坏疽者行截趾治疗;细胞移植组在常规治疗的基础上,按密度梯度离心和贴壁法分离制备骨髓间充质干细胞悬液,经流式细胞仪鉴定、染色体检测、细胞悬液皮试后,予肌肉注射法行扩增后自体骨髓间充质干细胞移植。主要观察指标:细胞移植后1个月两组患者治疗效果的比较,鉴定可能不良事件和副反应。结果:移植后1个月,细胞移植组患者肢体疼痛、冷感、间歇性跛行均有所改善,踝肱指数明显升高,双下肢血管显像血流灌注有所增加,与常规治疗组比较差异均有显著性意义(P<0.01)。移植后3个月随访患者均无异常症状体征出现,血、尿、便常规检测正常,心电图和肝肾功能无特殊改变,出凝血时间正常。结论:体外扩增自体骨髓间充质干细胞移植患肢治疗糖尿病足简便、有效、安全。

蒙药“通拉嘎-5”对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其机制研究

目的探讨"通拉嘎-5"对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其作用机制。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞后,"通拉嘎-5"作用于3T3-L1脂肪细胞24 h,用3H标记的2-脱氧-葡萄糖([3H]2-DG)示踪检测胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞摄取葡萄糖的情况;"通拉嘎-5"作用3T3-L1脂肪细胞48 h后,用Real-time PCR检测PPARγ和LXRα的基因表达,用Western blot检测PPARγ和LXRα的蛋白表达。结果 "通拉嘎-5"能促进胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取(比阴性对照组高1.915倍,P<0.05);能明显上调3T3-L1脂肪细胞和LXRα基因(比阴性对照组高2.895倍,P<0.01)和蛋白(比阴性对照组高1.977倍,P<0.01)表达;而对PPARγ基因和蛋白表达无明显的影响。结论 "通拉嘎-5"可能通过提高3T3-L1脂肪细胞LXRα的基因和蛋白表达,促进胰岛素介导的葡萄糖摄取功能,改善胰岛素抵抗,可能为"通拉嘎-5"治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制之一。

黑升麻提取物治疗围绝经期骨质疏松患者的疗效

目的观察黑升麻应用于围绝经期骨质疏松患者的疗效。方法将87例围绝经期骨质疏松患者随机分为两组,替勃龙治疗组在基础治疗上加用替勃龙,黑升麻治疗组在基础治疗上加用黑升麻治疗,两组均连续服药6个月,治疗前后检测骨密度(BMD),雌二醇和骨代谢指标:骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型胶原C端肽(CTX)。结果经过6个月的治疗,在BMD、雌二醇和骨代谢指标的改善程度上,两组均较治疗前有明显改善,而两组间相比其差异无统计学意义(P<0.05)。结论替勃龙和黑升麻均能有效治疗围绝经期骨质疏松,在对围绝经期骨质疏松患者的BMD,雌二醇和骨代谢指标改善程度上,黑升麻治疗组不劣于替勃龙治疗组。

超声清创刀联合负压创面系统治疗糖尿病足溃疡的疗效观察

目的：探讨糖尿病足溃疡患者使用超声清创刀联合负压创面治疗系统的临床疗效。方法47例糖尿病足溃疡Ⅱ～Ⅲ级（ Wagner分级）患者分为2组，实验组26例行超声清创刀联合负压创面系统治疗，对照组21例仅常规清创联合负压创面治疗。比较2组患者的创面愈合程度、治愈率、显效率和不良反应。结果与对照组比较，实验组随访第1周的显效率有显著差异（P〈0.05）；第2、4、6、12周的治疗愈合率均有显著差异（P〈0.05）。2组患者均未出现全身不良反应。结论超声清创刀联合负压创面系统联合治疗糖尿病足溃疡加快创面愈合，可能对于改善糖尿病足溃疡的治疗有重要作用。

局部免疫调节治疗甲状腺相关性胫前粘液水肿的临床观察

胫前粘液水肿（pretibial myxedema,PTM）为自身免疫性甲状腺疾病的特殊表现之一,见于Graves病、桥本病等,主要发生在胫前、足背甚至足趾的浸润性皮损改变,少数有瘙痒、色素沉着,轻者无症状,严重者常影响患者生活质量[1]。局部免疫调节治疗是其主要的治疗手段之一。

脉冲电磁场对绝经后骨质疏松症患者骨密度及腰背痛改善效果

目的:观察脉冲电磁场对绝经后骨质疏松症骨密度及腰背痛改善的情况。方法:采用STATISTICA/W5.0统计软件,对比分析年龄48～69岁16例女性I型骨质疏松患者经脉冲电磁场治疗前后骨密度和腰背痛改善的指标。结果:所有病例的腰背疼痛症状均消失;骨密度(g/cm2)有所增加,但差异无显著性意义(腰椎1～4:0.658±0.065和0.661±0.071;股骨颈:0.572±0.067和0.580±0.066;t=0.264,0.399,P均>0.05)。结论:脉冲电磁场是一种较好的I型骨质疏松治疗的手段。

药根碱对脂肪细胞糖脂代谢的影响及其机制研究

目的探讨黄连根茎提取物药根碱对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取、脂肪酸氧化的影响及其可能机制。方法采用不同浓度(265.65、53.75、10.75、2.15、0.45μmol/L)药根碱作用于3T3-L1细胞不同时间(12、24、48、72h),MTT法检测药根碱的细胞毒性。以0.45μmol/L药根碱作用于3T3-L1细胞48h后,用[3H]2-DG标记检测胰岛素介导的葡萄糖摄取情况,14C-palmitic标记检测脂肪酸氧化情况,Real-time PCR检测PPARs基因表达情况,Western blotting检测PPARs蛋白表达情况,以PBS代替药根碱作为对照。结果药根碱最佳作用浓度为0.45μmol/L,最佳作用时间为48h。与PBS对照组相比,药根碱具有促进3T3-L1细胞脂肪酸氧化、PPARα、PPARβ基因和蛋白表达的作用(P<0.01或P<0.05),而对PPARγ基因和蛋白表达无明显影响。结论药根碱可显著促进3T3-L1细胞的脂肪酸氧化,其机制可能与上调PPARα、PPARβ基因及蛋白表达有关。

5-氨基乙酰丙酸介导继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠甲状旁腺荧光特性的研究

目的研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)定位继发性甲状旁腺功能亢进症(secondaryhyperparathyroidism,SHPT)大鼠甲状旁腺组织方法的可行性,并观察其代谢产物原卟啉Ⅸ(protoporphyrinⅨ,PpⅨ)在甲状旁腺组织积聚的动态变化。方法 16只6～8周龄健康雌性SD大鼠,体质量180～200 g,分为手术组(5/6肾切除+高磷饲养,n=12)和假手术组(正常磷饲养,n=4),28 d后,2组大鼠腹腔注射500 mg/kg 5-ALA,405 nm蓝光探测2组大鼠颈部甲状腺区域,应用微型光纤光谱仪检测甲状腺、甲状旁腺组织内PpⅨ在不同时间的荧光强度、波长,并取其行组织学检查。结果在注射5-ALA后,2组大鼠甲状旁腺组织均可用肉眼观察,大部分位于甲状腺外侧。手术组在0.5～4 h均可见甲状旁腺组织显红色荧光,假手术组在1～3 h均可见红色荧光,其中2组荧光强度在2 h达到高峰,手术组峰值显著高于假手术组(P<0.05)。在注入5-ALA后2 h,手术组和假手术组内甲状旁腺组织荧光强度均高于甲状腺组织10倍。组织学检查确认红色荧光组织均为增生的甲状旁腺细胞。结论 5-ALA介导SHPT甲状旁腺组织的高荧光强度的特点为术中辨别增生与正常的甲状旁腺组织提供了重要的依据。

人ZnT-8作为1型糖尿病新型免疫调节剂的研究

目的:构建人锌转运体8(Zinc transporter 8,Zn T-8)羧基端原核表达载体,表达和纯化人Zn T-8羧基端(Zn T-8-COOH)重组蛋白,为寻找1型糖尿病新型免疫调节剂创造条件。方法:人Zn T-8-COOH c DNA克隆入p ET-32a载体,在大肠杆菌BL21中利用异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-thio-β-D-galactoside,IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定表达产物,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。40只4周龄的雌性非肥胖型糖尿病(non obese diabetic,NOD)小鼠随机分为Zn T-8重组蛋白预处理组及生理盐水对照组,分别腹腔注射Zn T-8重组蛋白和生理盐水,每周测量各组NOD小鼠体质量,检测血糖、血清C肽水平。结果:经PCR扩增后得到306 bp的DNA片段,成功构建到p ET-32a表达载体上,经测序分析序列正确;Zn T-8重组蛋白在大肠杆BL21中获得成功表达,并得以有效纯化。Zn T-8重组蛋白预处理组NOD小鼠与生理盐水对照组相比,28周龄时Zn T-8重组蛋白预处理组的体质量高于生理盐水对照组(P<0.05)。28周龄时Zn T-8重组蛋白预处理组的血糖低于生理盐水对照组(P<0.05);28周龄时Zn T-8重组蛋白预处理组的血清C肽水平高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:成功制备人Zn T-8-COOH重组蛋白,并初步证实了其对1型糖尿病的免疫调节作用。

17α-羟化酶缺陷假两性畸形1例

先天性肾上腺皮质增生症是一组肾上腺皮质激素生物合成酶系中某一或几种酶的先天性缺陷,而使皮质醇等激素水平改变所致的一组疾病。最常见的酶缺陷为21-羟化酶缺陷,其次为11β-羟化酶缺陷。17α-羟化酶缺陷非常罕见。本科2010年7月收治1例,现报告如下。

Tiam1基因沉默降低结肠癌细胞VEGF-C/-D的表达

目的探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)的表达与结肠癌淋巴管生成的关系。方法将实验细胞分为3组,分别为未干扰组(HCT116)、空质粒载体对照组(HCT116/CN)和干扰组(HCT116/siRNA-Tiam1)。应用siRNA使Tiam1基因表达下调,通过RT-PCR检测Tiam1 mRNA表达抑制率,并用RT-PCR和Western blot方法检测Tiam1基因干扰前后VEGF-C/-D mRNA和蛋白的表达情况。结果通过筛选后稳定表达的情况下,siRNA组的Tiam1、VEGF-C/-D mRNA和蛋白的表达明显低于未干扰组。结论Tiam1参与了VEGF-C/-D表达的调节,推测Tiam1可能通过诱导VEGF-C/-D的表达影响结肠癌淋巴管的生成。Tiam1可作为结肠癌淋巴转移过程中一个有价值的指标。