热应激处理鼠囊胚Hsp70基因表达的RT-PCR检测

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃1、2、3 h和38℃1、2、3 h热应激处理,然后在37℃条件下分别恢复3、2、1 h后,提取胚胎细胞总RNA,用RT-PCR方法检测小鼠囊胚Hsp70基因的表达,以明确小鼠囊胚经热应激处理后是否有诱导型Hsp70基因表达。结果表明:各试验组,包括对照组鼠的囊胚都有诱导型Hsp70基因的表达。说明小鼠囊胚对热应激处理敏感,轻微热应激就可使诱导型Hsp70基因表达。

热休克蛋白70在配子发生和胚胎发育中的表达

热休克蛋白(hsp)是机体在应激状态下迅速合成的一组蛋白质。热休克蛋白70(hsp70)是hsp中成员最多、最重要的一族,具有普遍性、高度保守性以及应激性。hsp70作为蛋白成熟过程中的分子伴侣,参与细胞周期调节、DNA损伤修复及细胞凋亡,在配子发生及胚胎发育、机体衰老过程中具有重要的生理作用。本文主要就hsp70在配子形成和胚胎发育中的作用进行了简述。

从遗传与生理角度看猪繁殖疾病防治

各种原因引起的猪产科疾病而导致的猪繁殖障碍日益严重,给我国的养猪业带来了巨大的经济损失。本文主要从遗传性因素、饲养管理因素、生殖器官病理性及内分泌等引起猪产科疾病进而导致猪繁殖障碍的病因作一综述,并提供一些综合预防和治疗措施。

猪附红细胞体实时荧光定量PCR检测方法的建立

参照猪附红细胞体16 S rRNA基因序列设计了1对引物,分别以标准株和分离株的基因组DNA为模板,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测猪附红细胞体,确定特异性产物的Tm值,同时做普通PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为88.5℃,最低能检测到含0.036 fg/μL阳性质粒的标准品。以阳性质粒标准品10倍倍比稀释的模板进行实时荧光定量PCR,通过对反应体系和反应条件进行筛选和优化,建立了检测猪附红细胞体的标准曲线。建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法显示了较好的特异性、敏感性和广谱性,为猪附红细胞体病的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。

小鼠胚胎诱导型Hsp70基因的RNA干扰有效序列筛选

【目的】应用RNA干扰技术沉默小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)中诱导型热休克蛋白70(Hsp72)基因的表达,从而筛选出对Hsp72基因具有确实干扰作用的siRNA。【方法】设计并合成4对特异性针对Hsp72基因的siRNA,借助LipofectamineTM2000瞬时转染MEF,41℃热应激处理后,采用RT-PCR和Western blot检测Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量。【结果】在热应激组中,siRNA1、siRNA2两组及阳性、阴性和空白3个对照组的Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量均极显著高于常温对照组(P<0.01),siRNA3和siRNA4两组的Hsp70 mRNA的表达量极显著低于常温对照组(P<0.01);siRNA3组Hsp70蛋白表达量极显著低于常温对照组(P<0.01),而siRNA4组与常温对照组差异不显著(P>0.05)。与空白对照相比,4对siRNA中siRNA3和siRNA4对MEF中Hsp72 mRNA有极显著(P<0.01)的抑制作用,其对Hsp72 mRNA的抑制率分别为86.2%和75.4%(P<0.01),对Hsp72蛋白表达的抑制率分别为77.3%和57.0%(P<0.01)。【结论】体外合成的四对特异性针对Hsp72基因的siRNA中,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构表面位置的siRNA3和siRNA4对Hsp72基因具有显著的抑制作用,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构复杂处的siRNA1和siRNA2对Hsp72基因的抑制作用不明显。

热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1 h,2 h和3 h,然后在37℃条件下分别恢复3 h,2 h和1 h后,利用Western blot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,以明确热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响。结果显示,38℃和40℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2 h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3 h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达。

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。

猪附红细胞体病的研究进展

猪附红细胞体病是近几年引起医学和畜牧兽医工作者注意的一种人畜共患病。从附红细胞体的分类、形态结构、抵抗力、流行病学方面进行了综合论述,探讨了猪附红细胞体病的实验室诊断方法及防治措施等。

热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响的研究

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1h、2h和3h,然后在37℃条件下分别恢复3h、2h和1h后,利用Westernblot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,同时观察囊胚的热敏性,以明确热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响。结果显示,38℃及40℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。38℃及40℃热应激组囊胚孵出率均随着热应激时间的延长而降低。结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达;热应激能够降低小鼠囊胚的孵出率。

添加剂在早期断奶仔猪上的应用现状

由于早期断奶的仔猪消化系统发育不成熟、消化酶和胃酸分泌不足、免疫力低及应激的产生,常常会表现出一系列的不良现象,如厌食或拒食、消化机能紊乱、腹泻水肿、生长迟滞、饲料利用率低等所谓的“仔猪早期断奶综合征”,从而严重影响了养猪业的经济效益。本文从添加剂的角度就如何消除或减轻仔猪断奶综合征作一综述。

HSP72在热应激小鼠囊胚中的表达及其作用

将体外培养的小鼠囊胚分别施以38℃温和热应激和40℃强烈热应激处理1、2和3 h,然后在37℃正常培养条件下分别恢复3、2和1 h,用体视显微镜观察囊胚孵出率以及经38℃和40℃诱导热应激后囊胚的孵出率,用Western-blot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达。结果,38℃热应激处理2 h时,HSP72表达量达到最高水平,与对照组差异显著;40℃热应激处理3 h时,HSP72表达量达到最高水平,与对照组差异不显著;38℃热诱导2 h囊胚孵出率最高,与40℃强烈热应激处理2 h组差异显著。结果表明,热诱导组囊胚孵出率与38℃热应激组囊胚HSP72的表达量呈正相关。

日粮中添加黄芪粉对白羽肉鸡生长性能和免疫功能的影响

试验旨在探究黄芪粉对肉鸡生产性能和免疫功能的影响。选择1日龄白羽肉鸡1600只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复50只。对照组(A组)饲喂基础日粮,试验组(B组、C组、D组)分别在基础日粮中添加0.5%、0.7%、1.0%的黄芪粉,试验期42 d。结果显示,C组、D组肉鸡出栏重与A组相比,差异极显著(P<0.01);平均日增重有升高趋势,但各组间差异不显著(P>0.05);C组和D组肉鸡的胸腺指数和法氏囊指数均极显著高于A组(P<0.01);C组和D组肉鸡的NDV抗体滴度显著高于A组和B组。本研究表明,日粮中添加0.7%~1.0%黄芪粉可提高肉鸡生长水平和免疫功能,降低死淘率。

日粮中添加蝇蛆粉对蛋鸡生产性能、蛋品质和免疫功能的影响

试验旨在探究蝇蛆粉对蛋鸡生产性能、蛋品质和免疫功能的影响,选择36周龄蛋鸡960只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复48只。对照组(A组)饲喂基础日粮,试验组(B组、C组、D组)分别在基础日粮中添加2%、4%、6%的蝇蛆粉,试验期90 d。试验结果显示,C组、D组蛋鸡产蛋率与对照组差异极显著(P<0.01);平均蛋重和合格蛋率有升高趋势,但各组差异不显著;D组料蛋比与A组差异显著(P<0.05);3个试验组比对照组的蛋壳厚度和蛋黄重都有所增加,但均差异不显著(P>0.05);B组与对照组以及B组和D组的哈氏单位差异显著(P<0.05),C组、D组与对照组之间差异极显著(P<0.01),C、D组间差异不显著(P>0.05);试验组比对照组的蛋黄颜色都有所增加,D组与对照组间差异显著(P<0.05);各试验组血清中IgA、IgM没有显著差异(P>0.05);C组和D组血清中IgG含量与对照组差异极显著(P<0.01),C、D组间差异不显著(P>0.05);3个试验组的T淋巴细胞和B淋巴细胞相对于对照组均有所增加,但差异不显著(P>0.05);C、D组的ND抗体效价与对照组相比差异极显著(P<0.01),C、D组间差异不显著(P>0.05)。本试验结果表明,日粮中添加4%~6%蝇蛆粉可提高蛋鸡生产水平、蛋品质和免疫功能。

两种禽白血病诊断试剂的比对研究

本研究同时采用禽白血病ELISA检测试剂盒和禽白血病乳胶微球检测试纸条对已确诊的278份禽白血病临床样品进行检测,比较两种诊断试剂检测结果的差异。经统计分析发现,禽白血病ELISA检测试剂盒敏感性为94.74%,特异性为99.61%,与确诊结果间的Kappa值为0.94;禽白血病乳胶微球检测试纸条敏感性为94.74%,特异性为100%,与确诊结果间的Kappa值为0.97,两种诊断试剂的重复性试验结果均一致。试验结果证明,禽白血病乳胶微球检测试纸条和禽白血病ELISA检测试剂盒都能满足禽白血病的检测需求;由于禽白血病乳胶微球检测试纸条的经济、储存、运输和操作的便捷性,更适用于禽白血病净化。

冲着头条写稿的人——记济南军区某部报道员许虎

他,胖墩墩的身架,胡须浓重的脸庞,虎头虎脑的,看上去好象个摔跤队员。怎么也看不出是个摇笔杆子的。然而,在济南军区某部,他——许虎,是出了名的“虎记者”。仅去年,他在军区《前卫报》上一连捅出4个一版头条、3个二版头条,其中有三篇还加了编后;其它省级以上报纸也登了六个头条。这不能不令人钦佩。其实,许虎写稿并不是首发命中的。他也有着许多初学者的同样经历。想当初,1982年他刚从江苏大丰县踏入绿色军营时。

中草药复合添加剂对工作犬血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响

为了研究中草药复合添加剂对工作犬血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响,试验将18只拉布拉多工作犬随机分成3组,分别为对照组、试验A组和试验B组,每组3个重复,每个重复2只(公母各1只),试验期共50 d。试验第1~7天,各组均饲喂基础日粮;第8~50天,对照组饲喂基础日粮,试验A组饲喂基础日粮+5 g/kg(按日粮重计)的中草药复合添加剂(由黄芪、党参、茯苓、蒲公英、金银花、淫羊藿配制而成),试验B组饲喂基础日粮+10 g/kg(按日粮重计)的中草药复合添加剂。试验结束后,前臂静脉采血,测定各组血清生化指标[总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)质量浓度、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性]、抗氧化指标[过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)浓度]和免疫指标[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)质量浓度]。结果表明:试验A组血清GLB质量浓度显著高于对照组(P<0.05),试验B组血清TP、GLB质量浓度显著高于对照组(P<0.05);试验A组和试验B组血清CK活性极显著低于对照组(P<0.01),其他血清生化指标与对照组均差异不显著(P>0.05);试验A组和试验B组所有血清生化指标均差异不显著(P>0.05)。试验B组血清CAT、SOD和GSH-Px活性显著或极显著高于对照组和试验A组(P<0.05或P<0.01),试验A组血清CAT和SOD活性显著高于对照组(P<0.05),试验A组、B组血清MDA浓度极显著低于对照组(P<0.01)。试验B组血清IgA、IgG和IgM质量浓度显著或极显著高于对照组和试验A组(P<0.05或P<0.01);而试验A组仅血清IgG质量浓度显著高于对照组(P<0.05),IgA和IgM质量浓度与对照组差异不显著(P>0.05)。说明日粮中添加中草药复合添加剂能提高工作犬抗氧化能力和免疫功能,且不会对肝脏和肾脏产生损伤,其中添加剂量为10 g/kg效果较好。

大蒜素对白羽肉鸡生长性能、血清生化指标和免疫性能的影响

[目的]研究大蒜素对白羽肉鸡生长性能、血清生化指标和免疫性能的影响,为大蒜素在白羽肉鸡养殖中的应用提供理论依据。[方法]选择1日龄白羽肉鸡800只,随机分为4组,每组4个重复,每个重复50只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验A、B、C组分别在基础日粮中添加100、200、400 mg/kg大蒜素,试验期42 d。试验结束后测定白羽肉鸡的生长性能、血清生化指标和免疫器官指数。[结果]试验B、C组的末重、采食量、增重均极显著升高,料重比、死淘率和血清谷丙转氨酶、总胆固醇水平均显著降低;与对照组相比,试验A、B、C组的血清谷草转氨酶、尿素氮极显著降低,总蛋白、球蛋白、白蛋白、新城疫抗体滴度极显著升高。[结论]日粮中添加200 mg/kg或400 mg/kg大蒜素可以改善白羽肉鸡血液营养代谢,提高肉鸡生长水平,降低死淘率,并可对白羽肉鸡免疫性能产生一定程度的促进作用。