新城疫疫苗滴鼻点眼诱导雏鸡消化道产生共同黏膜免疫反应的研究

为研究不同日龄雏鸡免疫后诱导消化道的共同黏膜免疫反应,本实验采用新城疫病毒(NDV)LaSota疫苗株经滴鼻点眼途径免疫雏鸡,分别于免疫后不同时间采集消化道洗脱液和胆汁样品,采用间接ELISA对其IgM、IgG和SIgA抗体水平进行检测。结果显示:NDV特异性IgM于免疫后4 d即可检出,并于第7 d达到峰值后迅速下降;而IgA于免疫后第7 d可检测到,并于第21 d达到较高水平。13日龄免疫组总抗体水平高于6日龄之前免疫组,但1日龄和3日龄免疫组不能够诱导消化道黏膜产生抗体。胃肠道不同部位免疫反应强度不同。其中前胃和十二指肠两个部位的免疫反应较强,而回肠和盲肠的免疫反应较弱。此外,胆汁中以较高SIgA抗体水平为主。研究表明,NDV弱毒苗滴鼻点眼后能够诱导消化道产生共同黏膜免疫反应,并且与日龄存在相关性。该研究结果为雏鸡共同黏膜免疫机制的研究和有效防制新城疫提供了实验依据。

不同日龄雏鸡免疫新城疫病毒弱毒疫苗后体液免疫和黏膜免疫反应的变化规律

采用新城疫LaSota弱毒株疫苗经滴鼻、点眼途径免疫不同日龄雏鸡,然后采集血清、泪液和鼻洗脱液,应用血凝抑制试验(HI)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗原特异性IgM、IgG和IgA或SIgA抗体水平的消长规律进行检测。结果显示,血清中IgG抗体水平最高,IgA和IgM抗体水平相对较低。免疫组血清HI效价明显高于空白对照组血清HI效价。泪液和鼻洗脱液中新城疫病毒(NDV)特异性IgM出现的最早,于免疫后第4天可检测到,并于第7天达到高峰,而后迅速下降;而NDV特异性IgG、SIgA于免疫后第7天可检测到,并于第21天达到较高水平。13日龄免疫组总抗体水平分别高于6日龄免疫组和3日龄免疫组总抗体水平,但是1日龄免疫组不能诱导呼吸道黏膜产生抗体。研究结果表明,泪液、鼻洗脱液中抗体和血清中抗体均存在日龄相关性变化的特点,为雏鸡出壳后免疫机制的研究和更有效控制新城疫的发生提供了试验依据。

表达F4^+ETEC的靶向性乳酸杆菌活菌载体的构建

为了研究M细胞靶向肽(Co1)和树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)的免疫增强作用,用实验室构建的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88ac-STa-LTB-STb-co1(KSLS-co1)的阳性质粒为模板,通过PCR的方法获得DCpep-KSLS-co1和KSLS-co1-DCpep融合基因。然后将DCpep-KSLS-co1、KSLS-co1-DCpep基因亚克隆到p PG612.1表达载体中,转化到干酪乳酸杆菌L.casei393。Western blot和间接免疫荧光分析显示,DCpep-KSLS-co1、KSLS-co1-DCpep基因在干酪乳酸杆菌中获得了表达。本试验为进一步研究M细胞靶向和树突状细胞靶向策略在乳酸菌活载体疫苗系统中应用提供物质基础。