热休克蛋白内质网亚型Grp94特异性荧光探针的设计、合成与应用

葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94,Grp94)是Hsp90在内质网中的亚型,其调控的客户蛋白较专一。选择性抑制Grp94已经成为靶向Hsp90伴侣系统开发药物的新方向。本研究以前期得到的高活性、高选择性Grp94抑制剂DDO-5813为基础,设计并合成得到了Grp94特异性荧光探针Grp94-Probe。采用荧光偏振实验和细胞内与ER-Red共染色实验证明Grp94-Probe与Grp94特异性结合作用。荧光偏振实验结果表明,Grp94-Probe能够较好地与Grp94~N结合(EC_(50)=117.9 nmol/L),且其作为探针分子可以较好的区分化合物对Grp94~N抑制活性的强弱。细胞内荧光成像实验结果显示,Grp94-Probe能够在细胞内质网与ER-Red共染色,表明Grp94-Probe能在细胞内与Grp94结合。该荧光探针为开发Grp94抑制剂提供了活性测试工具分子,为探索细胞内Grp94的化学生物学功能提供了有利工具。

基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)的HSP90-HOP相互作用抑制剂活性测试方法的构建及其应用

热休克蛋白90(HSP90)是细胞内大量表达的一类蛋白,其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。HSP90的众多客户蛋白与肿瘤的发生发展有重要的关系,因此抑制HSP90的功能可以使这些癌症相关蛋白降解,从而诱导肿瘤细胞凋亡,达到治疗肿瘤的目的。HSP90在发挥功能时还需要与辅伴侣蛋白HOP相互作用,因此靶向HSP90-HOP的相互作用开展抑制剂研发成为抑制HSP90伴侣系统的新策略。本文基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)构建了稳定的用于测试HSP90-HOP相互作用抑制剂活性的方法,并用该方法研究了HSP90 C-端五肽MEEVD及其突变肽段对HSP90-HOP相互作用的抑制活性,为新型HSP90-HOP相互作用抑制剂的筛选和发现提供了重要基础。