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日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的构建和初步分析 被引量:8
1
作者 姜孝玉 涂洪斌 +4 位作者 陈慧萍 卫剑文 杨文利 吴文言 徐安龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期424-428,共5页
以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (EST... 以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 35个 ,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等 ,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现 .日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础 . 展开更多
关键词 日本鬼Yuo 毒腺 CDNA表达文库 刺毒鱼类
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2,4-D对水稻幼苗过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性及同工酶的影响 被引量:7
2
作者 姜孝玉 梅星元 +1 位作者 袁均林 贺红武 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期199-202,共4页
用不同浓度的2,4-D处理水稻幼苗,结果表明:高浓度的2,4-D对水稻幼苗的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性有明显抑制作用,POD、SOD的同工酶谱带有的减弱或消失;低浓度的2,4-D对POD、S... 用不同浓度的2,4-D处理水稻幼苗,结果表明:高浓度的2,4-D对水稻幼苗的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性有明显抑制作用,POD、SOD的同工酶谱带有的减弱或消失;低浓度的2,4-D对POD、SOD有激活作用,POD、SOD同工酶谱带有的增强或出现新谱带. 展开更多
关键词 过氧化物酶 超氧化物歧化酶 水稻 同工酶
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赤魟尾刺cDNA表达文库的构建 被引量:11
3
作者 涂洪斌 卫剑文 +4 位作者 姜孝玉 陈慧萍 钟肖芬 吴文言 徐安龙 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期906-909,共4页
目的 以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法 应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果 通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得... 目的 以赤尾刺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA 3 0为基础的赤尾刺cDNA表达文库。方法 应用SMARTTMcDNALibraryConstruction技术和初步生物信息学分析等方法。结果 通过对亚文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,已获得了 5 6个赤新EST序列 ,其中已确定的全长cDNA克隆有 2 4个 ,包括IPL肿瘤抑制因子、亲环素cyclophilinA、硒蛋白selenoproteinW、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatinA、tyrosyl tRNAsynthetase和calcineurin类似物蛋白等。结论 这些基因在赤中绝大多数均为首次发现。赤尾刺cDNA表达文库的成功构建 。 展开更多
关键词 赤魟 尾刺 CDNA表达文库 海洋药物 中药
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玫瑰红绿海葵触手cDNA表达文库的构建和初步分析 被引量:13
4
作者 刘文华 王义良 +5 位作者 陈慧萍 姜孝玉 涂洪斌 卫剑文 彭文烈 徐安龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期749-753,共5页
A cDNA expression library of the tentacles of Sagartia rosea was constructed. The cDNA was cloned into eukaryotical expression plasmid pcDNA3. SMART TM protocol was used for cDNA library construction and bioinformatic... A cDNA expression library of the tentacles of Sagartia rosea was constructed. The cDNA was cloned into eukaryotical expression plasmid pcDNA3. SMART TM protocol was used for cDNA library construction and bioinformatics analysis was carried out. 71 novel EST clones were obtained from 130 sequences in the library, of which there were 21 full-length clones, including cytolysin genes, flourescent protein, ubiquinol-cytochrome C reductase gene, elongation factor, ferritin gene riboflavin kinase gene, ribosomal protein. This provides a base for further investigating their biological activity and application. 展开更多
关键词 玫瑰红绿海葵 触手 cDNA表态文库 构建
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金钱鱼毒腺cDNA表达文库的构建及EST序列分析 被引量:9
5
作者 陈慧萍 姜孝玉 +4 位作者 涂洪斌 杜晶春 卫剑文 杨文利 徐安龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期166-170,共5页
以金钱鱼 (Scatophagusargus)毒腺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的金钱鱼毒腺cDNA表达文库 .应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术和生物信息学分析等方法 ,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得了 ... 以金钱鱼 (Scatophagusargus)毒腺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的金钱鱼毒腺cDNA表达文库 .应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术和生物信息学分析等方法 ,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得了 2 0 1个金钱鱼新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 2 7个 ,包括多个核糖体大小亚基蛋白 (ribosomalprotein)、细胞凋亡相关蛋白 (programmedcelldeath 10 ) ,G蛋白信号调控子 (Gproteinsignalingregulator)、胸腺素(thymosinbeta 4 )、延伸因子 (translationelongationfactor 1 alpha)和泛素 (ubiquitin)等 .金钱鱼毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为研究金钱鱼毒腺的活性组分及其作用机制奠定了基础 。 展开更多
关键词 金钱鱼 毒腺 CDNA 表达文库 EST 序列分析 功能基因
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海葵溶细胞素的研究进展 被引量:7
6
作者 刘伟 王娟 +2 位作者 姜孝玉 杨文利 徐安龙 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期56-62,共7页
关键词 海葵 研究进展 细胞 钾离子通道 腔肠动物门 生物学活性 肽类毒素 化学刺激 神经毒素 生理作用 抑制剂 溶血性 去极化 珊瑚 蛋白 触手 心脏
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平颏海蛇碱性磷脂酶A_2的融合表达、纯化及活性特征 被引量:4
7
作者 杨文利 钟肖芬 +5 位作者 彭立胜 卫剑文 姜孝玉 叶兰汀 吴文言 徐安龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期436-441,共6页
将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属... 将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 。 展开更多
关键词 平颏海蛇 磷脂酶A2 融合表达 纯化 细胞毒 蛇毒
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赤魟亲环素A的融合表达、纯化及活性特征 被引量:5
8
作者 涂洪斌 朱俊杰 +5 位作者 张强 彭立胜 钟肖芬 陈慧萍 姜孝玉 杨文利 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第11期67-70,共4页
目的探讨赤鱼工亲环素A基因(dsCypA)的生物学功能。方法构建硫氧还蛋白基因融合表达体系PETTRX-dsCypA,低温诱导表达的融合蛋白dsCypA-TRX,利用金属螯合亲和层析纯化后,经蛋白酶切割和进一步纯化,得到高纯度成熟重组dsCypA,测定其酶活... 目的探讨赤鱼工亲环素A基因(dsCypA)的生物学功能。方法构建硫氧还蛋白基因融合表达体系PETTRX-dsCypA,低温诱导表达的融合蛋白dsCypA-TRX,利用金属螯合亲和层析纯化后,经蛋白酶切割和进一步纯化,得到高纯度成熟重组dsCypA,测定其酶活性。结果重组dsCypA具有与人CypA相近的肽基脯氨酸顺反异构酶活性,这在鱼类CypA中是首次报道。结论dsCypA的功能克隆可能部分地解释赤鱼工尾刺中药应用的分子生物学机制,也为从比较生物学的角度,深入开展CypA基因的结构与功能关系研究奠定了基础。 展开更多
关键词 赤魟 亲环素A 融合表达 酶活性
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人内皮抑素基因的克隆、表达、纯化及活性测定 被引量:5
9
作者 杨芳 何援利 +3 位作者 姜孝玉 刘芸 彭冬先 宗利丽 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期416-418,共3页
目的获得有生物学活性的人内皮抑素蛋白。方法用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到人内皮抑素编码区基因,连接PGEM-T载体,测序确认,定向克隆入pBV220表达载体,转化大肠杆菌DH5α进行表达、纯化及活性测定。结果经测序分析证实,所获得的55... 目的获得有生物学活性的人内皮抑素蛋白。方法用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到人内皮抑素编码区基因,连接PGEM-T载体,测序确认,定向克隆入pBV220表达载体,转化大肠杆菌DH5α进行表达、纯化及活性测定。结果经测序分析证实,所获得的552bp基因片段序列属于人内皮抑素基因,构建表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,并具有生物学活性。结论人内皮抑素基因在大肠杆菌中获得非融合表达,表达蛋白能够抑制人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)的增殖,为应用内皮抑素进行抗血管生成治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 人内皮抑素 基因克隆 表达 纯化 抗血管生成作用
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人分泌型内皮抑素质粒的构建及序列测定 被引量:4
10
作者 杨芳 何援利 +3 位作者 姜孝玉 刘芸 彭冬先 宗利丽 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期11-12,16,共3页
目的 :旨在获得人内皮抑素 (endostatin)分泌型基因片段。 方法 :合成含信号肽的上游引物 ,用聚合酶链反应技术克隆人分泌型内皮抑素基因 ,10g/L琼脂糖凝胶电泳后回收 ,将其重组入PGEM T载体 ,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列。 结... 目的 :旨在获得人内皮抑素 (endostatin)分泌型基因片段。 方法 :合成含信号肽的上游引物 ,用聚合酶链反应技术克隆人分泌型内皮抑素基因 ,10g/L琼脂糖凝胶电泳后回收 ,将其重组入PGEM T载体 ,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列。 结果 :经Genbank分析证实 ,所获得的 6 4 5bp基因片段序列属于信号肽及人内皮抑素功能区段基因 ,翻译为蛋白质序列正确。 结论 :本研究为应用内皮抑素基因进行肿瘤的抗血管生成治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 内皮抑素 基因 聚合酶链反应
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重组海葵溶细胞素对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 被引量:2
11
作者 欧阳平 姜孝玉 +1 位作者 杨文利 徐安龙 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第11期994-995,1002,共3页
目的观察重组海葵溶细胞素(Src)对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VCMC),应用不同浓度的Src分别进行刺激VCMC并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。... 目的观察重组海葵溶细胞素(Src)对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VCMC),应用不同浓度的Src分别进行刺激VCMC并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果各组的细胞增殖率分别为对照组:0.802±0.055;Src100μg/ml组:0.115±0.014;Src10μg/ml组:0.213±0.016;Src1μg/ml组:0.335±0.097,Src100ng/ml组:0.663±0.060;Src10ng/ml组:0.678±0.129;Src1ng/ml组:0.738±0.072。统计分析显示100ng/ml以上浓度的Src能明显抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论重组海葵溶细胞素Src对大鼠血管平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 药物作用 重组海葵溶细胞素 细胞增殖 VCMC
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重组海葵溶细胞素及平颏海蛇磷脂酶A_2对血管外膜成纤维细胞增殖的影响 被引量:1
12
作者 欧阳平 姜孝玉 +2 位作者 杨文利 赖文岩 徐安龙 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第2期158-160,共3页
目的观察重组海葵溶细胞素(rSrc)及平颏海蛇磷脂酶A2(rPLA2)对成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养成纤维细胞,应用不同浓度的rSrc和rPLA2分别进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果各组... 目的观察重组海葵溶细胞素(rSrc)及平颏海蛇磷脂酶A2(rPLA2)对成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养成纤维细胞,应用不同浓度的rSrc和rPLA2分别进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果各组细胞增殖率分别为:对照组0.840±0.061、rSrc 100 μg/ml组0.263±0.044、rSrc 10 μg/ml组0.418±0.054、rSrc 1 μg/ml组0.605±0.063、rSrc 100 ng/ml组0.772±0.054、rSrc 10 ng/ml组0.906±0.072、rPLA2 100 μg/ml组0.498±0.076、rPLA2 10 μg/ml组0.937±0.112、rPLA2 1 μg/ml组0.978±0.145。统计分析显示,低至1 μg/ml的rSrc仍能明显抑制大鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。rPLA2 100 μg/ml组与对照组相比细胞增殖率有显著差异(P<0.05);rPLA2 10 μg/ml和rPLA2 1 μg/ml组与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结论rSrc和rPLA2分别对血管外膜成纤维细胞增殖有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 重组海葵溶细胞素 平颏海蛇磷脂酶A2 血管外膜成纤维细胞 细胞增殖 抑制作用
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重组海蛇碱性磷脂酶A_2的抗肿瘤活性与相对酶活性的关系
13
作者 梁永钜 杨小平 +4 位作者 卫剑文 符立梧 姜孝玉 陈尚武 杨文利 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1474-1478,共5页
背景与目的:蛇毒磷脂酶A2(snakevenomphospholipaseA2,SVPLA2)是一类分子量为14ku左右的蛋白家族,除了酶活性,该蛋白还具有多种药理活性。迄今,陆地蛇PLA2的结构与功能关系特别是其酶活性与药理活性的关系已被广泛研究,但对海蛇PLA2的... 背景与目的:蛇毒磷脂酶A2(snakevenomphospholipaseA2,SVPLA2)是一类分子量为14ku左右的蛋白家族,除了酶活性,该蛋白还具有多种药理活性。迄今,陆地蛇PLA2的结构与功能关系特别是其酶活性与药理活性的关系已被广泛研究,但对海蛇PLA2的研究则较少。本文旨在研究重组平颏海蛇碱性磷脂酶A2(recombinantseasnakebasicphospholipaseA2,rSSBPLA2)及其突变体(rN48和rK49)体内外抗肿瘤作用,并探讨酶活性相关位点对抑瘤作用的影响。方法:对酶活性相关位点48、49位氨基酸进行His→Asn和Asp→Lys的定点突变,用MTT法检测rSSBPLA2及其突变体rN48和rK49对人原髓白血病细胞HL-60、人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;用小鼠S180移植瘤和艾氏腹水癌(EAC)模型对rSSBPLA2进行抗肿瘤作用观察;并检测突变体对小鼠移植瘤的抗瘤活性。结果:与rSSBPLA2相比较,突变体rN48和rK49的相对酶活力分别为0和5%。rSSBPLA2对HL-60细胞、SK-N-SH细胞和MGC-803细胞的IC50值分别为(45.28±0.09)μg/ml、(57.07±0.12)μg/ml和(69.34±0.35)μg/ml,对HepG2细胞生长没有抑制作用;而rN48和rK49对以上细胞均无抑制作用。rSSBPLA2对小鼠S180移植瘤具有明显的抑制作用,按2mg/kg(qd×10)、2mg/kg(q2d×5)、4mg/kg(qd×1)、4mg/kg(q5d×2)实验给药,其抑瘤率分别为50.8%、43.2%、38.2%、55.5%;rSSBPLA2按4mg/kg(q5d×2)剂量给药时,对EAC抑瘤率为33.5%,与对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。而突变体rN48和rK49分别按4mg/kg(q2d×5)和7mg/kg(qd×10)方案进行实验,无明显抗肿瘤作用。结论:rSSBPLA2的抑瘤活性可能与其酶活性密切相关。 展开更多
关键词 重组海蛇碱性磷脂酶A2 抗肿瘤活性 酶活性 S180肉瘤 定点突变
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重组腺病毒载体介导外源基因转移至脑血管的实验研究
14
作者 石忠松 黄正松 +2 位作者 郭少雷 姜孝玉 洪海 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期308-310,共3页
目的 基因载体直接体内转移血管壁为血管病的治疗提供一种新方法 ,本研究探讨腺病毒载体介导外源基因转移至颅内血管的可行性。方法  2 5 0 μl含巨细胞病毒启动子的编码报告基因 -绿色荧光蛋白 ( GFP)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体... 目的 基因载体直接体内转移血管壁为血管病的治疗提供一种新方法 ,本研究探讨腺病毒载体介导外源基因转移至颅内血管的可行性。方法  2 5 0 μl含巨细胞病毒启动子的编码报告基因 -绿色荧光蛋白 ( GFP)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体 ( Ad5CMV5GFP) ,滴度为 2 .5× 10 9pfu/ m l,经枕大池穿刺法注入正常兔的脑池内。注入腺病毒载体后 1~ 7d,采用荧光显微镜、免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应方法从形态学和分子生物学方面检测颅内血管和血管周围组织中外源基因 GFP的表达情况。结果 直接体内转染后 1d,在颅内大血管如基底动脉的外膜可见外源基因的表达 ,3d时减弱 ,7d后消失 ,而血管中膜和内膜未见外源基因的表达 ;注入腺病毒载体后1~ 7d,外源基因可以有效转移至颅底软脑膜细胞 ,小血管外膜和平滑肌层也可见外源基因的表达 ;注入腺病毒载体后兔体温未见升高 ,但是脑脊液中的白细胞数明显升高 ,血管壁中可见炎性细胞浸润。结论 经脑池内注入重组腺病毒载体可以将外源基因转移至正常兔颅内血管和软脑膜中 。 展开更多
关键词 重组腺病毒载体 外源基因转移 脑血管病 实验 治疗
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血管生成抑制因子人内皮抑素基因的克隆与原核表达
15
作者 杨芳 何援利 +1 位作者 姜孝玉 郑丹 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第19期104-106,共3页
目的:构建血管生成抑制因子人内皮抑素非融合蛋白大肠杆菌表达载体。方法:实验于2004-02/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成,表达质粒由中山大学医药分子实验室保存,肝细胞来源于南方医科大学珠江医院引产胎儿肝脏。用反... 目的:构建血管生成抑制因子人内皮抑素非融合蛋白大肠杆菌表达载体。方法:实验于2004-02/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成,表达质粒由中山大学医药分子实验室保存,肝细胞来源于南方医科大学珠江医院引产胎儿肝脏。用反转录多聚合酶链反应得到人内皮抑素全基因,连接PGEM-T载体,在16℃下以进行16h连接反应,转化大肠杆菌DH5α,对所获克隆扩大培养,提取质粒经EcoRI,BamHI酶切鉴定。将带有插入片段的重组质粒命名为PGEM-Tendo。对其阳性克隆扩大培养,大量提取质粒,以T7,SP6为测序引物进行全自动正、反向测序确认。将PGEM-Tendo质粒及表达载体pBV220经EcoRI,BamHI酶切后定向连接,转化入大肠杆菌DH5α,聚合酶链反应鉴定阳性克隆,命名为pBV220-endo。将含pBV220-endo的DH5α工程菌在30℃小量培养,经42℃热诱导4h后收菌,对所收菌和诱导前细菌进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶。离心收集菌体并超声破碎,将超声后的上清液和沉淀进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果:反转录—聚合酶链反应获得内皮抑素基因含酶切位点约573bp,用EcoRI,BamHI双酶切,10g/L琼脂糖凝胶电泳上可见约为552bp的内皮抑素片段和约为3000bp的PGEM-T载体片段,说明内皮抑素已成功构建在PGEM-T载体上。经全自动正、反向测序,Genbank分析证实,所获得的552bp基因片段序列属于人内皮抑素功能区段基因,该基因的第471位氨基酸编码碱基由G突变为A,但编码的氨基酸都是精氨酸,经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,出现特异性蛋白质条带,大小与人内皮抑素蛋白大小相符合。非融合重组蛋白内皮抑素主要以不溶的包涵体形式表达,表达量为14.5%。结论:克隆的552bp的内皮抑素基因,经与GenBank中人胶原XVIIIcDNA中内皮抑素基因比较,基因序列基本一致,说明人内皮抑素基因在大肠杆菌中获得非融合表达,为应用内皮抑素进行抗血管生成基因治疗奠定了实验方法学基础。 展开更多
关键词 内皮/解剖学和组织学 逆转录聚合酶链反应 基因表达
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巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因的原核表达比较
16
作者 涂洪斌 朱俊杰 +3 位作者 杨文利 姜孝玉 陈慧萍 徐安龙 《广州医学院学报》 2005年第3期1-6,共6页
目的:探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法:构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果:低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两... 目的:探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法:构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果:低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两个表达体系中的表达差异,其中pETTRX-hmGFP的重组蛋白表达水平和可溶性均比pET21b-hmGFP高。结论:对pETTRX-hmGFP的表达条件进行了优化,为下一步hmGFP成熟重组蛋白的纯化及其荧光波谱分析奠定了良好基础。 展开更多
关键词 巨型辐花海葵 荧光蛋白类似物基因 原核表达
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重组腺病毒载体介导外源基因转移至痉挛脑血管的研究
17
作者 石忠松 黄正松 +2 位作者 郭少雷 姜孝玉 洪海 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1239-1240,共2页
目的 探讨蛛网膜下腔出血后腺病毒载体介导外源基因转移至痉挛颅内血管的可行性。方法 采用“枕大池 2次注血法”建立兔迟发性脑血管痉挛模型 ,在第 2次注血同时枕大池内注入 2 5 0 μl复制缺陷型重组腺病毒载体 (Ad5CMV5GFP) ,滴度为... 目的 探讨蛛网膜下腔出血后腺病毒载体介导外源基因转移至痉挛颅内血管的可行性。方法 采用“枕大池 2次注血法”建立兔迟发性脑血管痉挛模型 ,在第 2次注血同时枕大池内注入 2 5 0 μl复制缺陷型重组腺病毒载体 (Ad5CMV5GFP) ,滴度为 2 .5× 10 9pfu/ml,2、4d后 (初次注血第 5天和 7天 )行荧光显微镜、免疫组织化学和RT PCR检测颅内血管和血管周围组织中外源基因GFP(绿色荧光蛋白 )的表达情况。结果  2d时在基底动脉外膜可见GFP表达 ,4d时消失 ,而中膜和内膜未见GFP表达 ;2~ 4d时颅底软脑膜细胞、小血管外膜和平滑肌层可见GFP表达。结论 经脑池内注入重组腺病毒载体可以将外源基因转移至痉挛脑血管和软脑膜中 。 展开更多
关键词 蛛网膜下腔出血 脑血管痉挛 基因转移 腺病毒
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