微RNA和去乙酰化在支气管哮喘中对Th细胞因子的影响

目的探究支气管哮喘(BA)病人外周血CD4+T淋巴细胞中微RNA-126(miR-126)、微RNA-326(miR-326)和微RNA-155(miR-155)以及Th细胞相关因子的表达情况;探究去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对支气管哮喘大鼠miR-126、miR-326和miR-155以及Th细胞相关因子的调控作用。方法收集2015年10月至2017年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院、新疆维吾尔自治区人民医院及新疆医科大学附属中医医院的哮喘急性发作期病人(48例),采用实时荧光定量PCR技术检测BA病人miR-126、miR-326和miRNA-155以及Th细胞相关因子mRNA的表达情况。建立BA大鼠模型,分别给予大鼠低、高浓度的TSA干预,PCR技术检测各组miR-126、miR-326和miR-155以及Th细胞相关因子的表达。免疫组化法检测干扰素-γ(IFN-γ)、GATA结合蛋白3(GATA3)、维甲酸相关孤儿受体(ROR-γ)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果BA病人组miR-126、miR-326和miR-155 mRNA的表达高于健康人组(1.63±0.30比0.54±0.10,2.25±0.67比1.62±0.39,2.17±0.68比1.75±0.46,均P<0.05),IFN-γ和Foxp3 mRNA表达低于健康人组(0.86±0.19比1.36±0.27,1.01±0.22比1.83±0.30,P<0.05),ROR-γmRNA表达高于正常组(2.79±0.40比1.62±0.38,P<0.05);BA大鼠模型中,模型组中miR-126 mRNA的表达高于正常组(2.17±0.39比0.92±0.06,P<0.01),TSA低剂量组中miR-126 mRNA的表达低于模型组(2.17±0.39比1.24±0.20,P<0.05);TSA高剂量组中GATA3 mRNA的表达低于正常组和模型组(3.69±0.88比1.64±0.35、1.08±0.36,P<0.01);在TSA高剂量组中ROR-γmRNA的表达高于正常组和模型组(5.50±1.02比0.89±0.37、10.94±2.85,P<0.05)。结论去乙酰化酶抑制剂可下调miR-126、miR-326和miR-155的表达;适量的去乙酰化酶抑制剂可上调细胞因子IFN-γ和Foxp3的表达以及下调GATA3和ROR-γ的表达。

辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎大鼠血清NO和鼻粘膜iNOS表达的影响

目的:探讨辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)大鼠血清一氧化氮(NO)及鼻粘膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。方法:40只大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、实验组,用卵清蛋白建立变应性鼻炎大鼠模型,通过对造模的大鼠灌服辛芷鼻敏胶囊及与同类药物对照,用酶法检测血清一氧化氮水平及逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量测定鼻粘膜诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达。结果:实验药物组的血清NO的水平和iNOS mRNA的表达明显低于模型组及阳性对照组(P<0.05)。结论:辛芷鼻敏胶囊可能通过降低鼻粘膜iNOS mRNA的表达及血清NO含量,抑制大鼠AR发病过程NO的合成,进而减少嗜酸粒细胞(Eosinophil,EOS)的浸润而改善症状。

中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109 AQP1 mRNA表达的影响

目的探讨中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109 AQP1 mRNA表达的影响。方法以5 g/L及10 g/L的葛根素注射液干预食管癌细胞系TE-1及ECA109,干预24 h后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1 mRNA表达,观察表达结果。结果 AQP1在食管癌细胞系ECA109及TE-1中均有少量表达;葛根素可上调ECA109及TE-1细胞系AQP1表达。结论葛根素通过上调AQP1 mRNA的表达,从而影响食管癌细胞水转运。

哈萨克族食管癌患者中Lrig1通过MEK-ERK信号通路调控NF-κB及MMP-2表达

目的:探讨Lrig1、NF-κB及MMP-2在哈萨克族食管癌患者中的表达与PI3K-AKT、MEK-ERK信号通路及与临床病理指标之间的关系。方法:采用RT-PCR方法检测48例哈萨克族食管癌患者组织中Lrig1、NF-κB、MMP-2表达,探讨NF-κB、MMP-2的表达与Lrig1的关系。纳入PI3K及MEK信号通路的关键基因PI3K、AKT1、MEK1、MEK2、MEK5、ERK1、ERK2,研究Lrig1调控NF-κB、MMP-2基因表达的通路。结果:转录水平mRNA检测显示在肿瘤组织及远端正常组织中NF-κB(P<0.001,P=0.014)、MMP-2(P=0.003,P=0.045)的表达与Lrig1 mRNA表达相关;蛋白水平Western blot检测显示Lrig1与NF-κB、MMP-2可能呈负相关。在肿瘤组织中MEK5(P<0.001)及ERK2(P=0.009)的表达与Lrig1相关;PI3K在正常组织中(P<0.001)的表达与Lrig1相关。Lrig1、MMP-2及NF-κB协同表达率为52.1%(25/48),其协同表达与淋巴结转移相关(P=0.020)。结论:NF-κB、MMP-2与Lrig1协同表达促进食管癌患者的淋巴结转移,Lrig1可能是通过MEK-ERK信号通路调控相关基因表达。

辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎大鼠血清一氧化氮和鼻黏膜嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的:探讨辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎(AR)大鼠血清一氧化氮(NO)及鼻黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)的影响。方法:40只大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、实验组,用卵清蛋白建立AR大鼠模型,通过对造模的大鼠灌服辛芷鼻敏胶囊及与同类药物对照,用酶法检测各组大鼠血清NO水平,HE染色,高倍镜下观察EOS的变化。结果:实验组血清NO水平为(29.11±2.63)μmol/L,明显低于模型组[(57.28±3.10)μmol/L]及阳性对照组[(45.79±6.47)μmol/L](P<0.05)。实验组大鼠的鼻黏膜组织病理学改变明显减轻,鼻黏膜上皮下偶见EOS。结论:辛芷鼻敏胶囊可能通过减少血清NO水平,改善鼻黏膜EOS浸润,从而改善症状,发挥治疗作用。

survivin基因A9194G位点在新疆维、哈、汉3个民族正常人群的分布研究

目的探讨survivin基因A9194G位点在新疆维吾尔族、哈萨克族及汉族正常人群的分布情况。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术(PCR-RFLP)检测survivin基因A9194G位点在304例正常人群(哈萨克族100例、维吾尔族102例、汉族102例)的分布情况。结果 3个民族正常人群A、G基因频率分布差异无统计学意义。3个民族正常人群基因型AA、AG、GG分布差异有统计学意义,其中哈萨克族与维吾尔族正常人群AG基因型分布低于汉族,差异有统计学意义,但维吾尔族与哈萨克族正常人群基因型分布无统计学差异。结论维、哈族与汉族survivin基因A9194G位点分布存在差异,为今后开展其基因多态性与民族特高发疾病的相关研究奠定了基础。

新疆维、汉人群变应性鼻炎患者与正常人表观遗传现象IFN-γ基因甲基化比较研究

目的探讨IFN-γ基因甲基化在新疆维、汉人群变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)患者与正常人群中的表达。方法通过对新疆伊犁地区变应性鼻炎的流行病学调查,随机整群抽样调查符合条件的AR患者和正常人并采集外周静脉血,提取基因组DNA;亚硫酸氢盐修饰试剂盒S7820修饰DNA;甲基化特异性PCR(methylation Specific PCR,MS-PCR)法对DNA甲基化进行定性分析。结果汉族AR患者IFN-γ基因甲基化阳性率(8.5%)与正常对照组(1.7%)相比差异无统计学意义(χ2=3.229,P>0.05),维吾尔族AR患者IFN-γ基因甲基化阳性率(18.6%)与对照组(16.9%)相比差异无统计学意义(χ2=0.058,P>0.05),维吾尔族AR患者(18.6%)与汉族AR患者(8.5%)的IFN-γ基因甲基化阳性率差异无统计学意义(χ2=2.617,P>0.05),维吾尔族正常对照组(16.9%)比汉族正常对照组(1.7%)IFN-γ基因甲基化阳性率高,差异有统计学意义(χ2=8.659,P<0.05)。结论汉族正常人群IFN-γ基因低甲基化状态可能在汉族变应性鼻炎的发病过程中发挥着更为重要的作用。

伊犁地区变应性鼻炎患者的中医证型调查研究

目的调查伊犁地区变应性鼻炎(AR)的中医辨证分型,为中医药治疗提供更多依据。方法采用问卷调查形式,共在伊犁地区调查1 887人,并对AR患者进行中医辨证分型。结果 1 887人中患AR者242人,患病率为12.82%。其中肺气虚寒型167例(占69.01%),脾气虚弱型32例(占13.22%),肾阳不足型20例(占8.26%),肺经伏热型23例(占9.51%),AR患者中医证型构成比比较差异有统计学意义(P<0.01)。男性AR患病率为10.35%(94/908),女性AR患病率为15.12%(148/979),男女AR患病率间差异有统计学意义(P<0.01)。不同年龄阶段的人群AR患病率比较,差异有统计学意义(P<0.01);其中青少年(<21岁)AR患病率最高(27.08%),与其他年龄段人群比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论伊犁地区AR患者中医证型发病以肺气虚寒型最高,各个年龄阶段中青少年患病率偏高。

新疆维、汉族变应性鼻炎患者IL-4与IgE水平检测及相关性研究

目的探讨新疆维吾尔族、汉族变应性鼻炎患者IL-4和IgE的表达水平及其相关性。方法选择新疆维吾尔族(维族)AR患者47例,健康对照组46例;汉族AR患者45例,健康对照组45例采用双抗体夹心酶联免疫吸附剂测定法(ABC-ELISA)检测IL-4和IgE的表达水平,并对变应性鼻炎患者IL-4与IgE进行相关性分析。结果维、汉族变应性鼻炎组血清中IL-4、IgE水平明显高于维、汉族健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),维吾尔族、汉族变应性鼻炎组IL-4与IgE水平呈正相关关系(r分别为0.414、0.393,P<0.01),维、汉族AR组及维、汉族健康对照组之间血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05),维、汉族AR组及维、汉族健康对照组之间血清IgE水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-4和IgE在维、汉族变应性鼻炎发病过程中均发挥重要作用。

新疆维吾尔族与汉族哮喘患者外周血CD_4^+T淋巴细胞白介素2、白介素4、干扰素γ mRNA表达水平研究

目的检测新疆维吾尔族与汉族哮喘患者外周血CD_4^+T淋巴细胞白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)mRNA的表达水平,比较其表达差异在疾病中的作用。方法选取2014年12月—2015年5月在新疆医科大学第一附属医院和新疆维吾尔自治区人民医院确诊的哮喘急性发作期患者150例为哮喘组(包括维吾尔族30例、汉族120例),及同期在新疆医科大学第一附属医院进行体检的健康人群101例为对照组(包括维吾尔族35例、汉族66例)。应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测所有受试者IL-2、IL-4、IFN-γmRNA的表达水平。结果选择内参基因GAPDH进行校正。哮喘组与对照组受试者IL-2、IL-4 mRNA的表达水平间差异有统计学意义(P<0.05);而IFN-γmRNA的表达水平间差异无统计学意义(P>0.05)。维吾尔族与汉族哮喘患者IL-2 mRNA的表达水平间差异无统计学意义(P>0.05);而IL-4、IFN-γmRNA的表达水平间差异有统计学意义(P<0.05)。汉族哮喘亚组与汉族对照亚组受试者IL-2、IL-4 mRNA的表达水平间差异有统计学意义(P<0.05);而IFN-γmRNA的表达水平间差异无统计学意义(P>0.05)。维吾尔族哮喘亚组与维吾尔族对照亚组受试者IL-2、IL-4 mRNA的表达水平间差异有统计学意义(P<0.05);而IFN-γmRNA的表达水平间差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘患者IL-2基因表达高于健康人群,IL-4基因表达低于健康人群;汉族哮喘患者IL-4、IFN-γ基因表达均低于维吾尔族哮喘患者。提示IL-2、IL-4、IFN-γ基因在哮喘发病过程中发挥重要作用。

哈萨克族食管癌中cdc42启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体

目的构建cdc42基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究cdc42基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出cdc42基因,以阳性组织基因组DNA扩增出cdc42基因启动子区CpG岛,cdc42基因经双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1相连,并转入甲基化酶缺陷的大肠杆菌E.coliER1793中扩增。经测序成功后,将重组质粒及cdc42基因启动子区CpG岛用HindⅢ酶切,连接后再次转入E.coliER1793中扩增。将重组质粒转染至食管癌细胞株Eca-109中,荧光显微镜观察结果。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的cdc42基因及其启动子区CpG岛,并将双序列成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。转染后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。结论成功构建真核表达载体,为进一步探讨cdc42基因启动子区CpG岛甲基化状态对该基因在哈萨克族食管癌细胞株中的表达及功能的影响奠定了基础。

辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎大鼠血清IL-13和鼻粘膜STAT6 mRNA及其蛋白含量表达的影响

目的:探讨辛芷鼻敏胶囊对变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)大鼠的血清中白介素13(Interleukin-13,IL-13)和鼻粘膜组织的信号转导和转录激活因子-6(Signaltransducers and activators of transcription-6,STAT6)mRNA及蛋白表达,明确药效机制。方法:40只大鼠随机分为空白对照组、模型组、对照组、实验组,用卵清蛋白建立AR大鼠模型,通过对造模的大鼠灌服辛芷鼻敏胶囊及与同类药物对照,用酶联免疫吸附技术(Enzyme labeled immunosorbent assay,ELISA)定量测定各组大鼠血清IL-13水平,用原位杂交(ISH)、免疫组化方法半定量检测鼻粘膜中STAT6mRNA、STAT6蛋白含量的表达。结果:实验组大鼠血清的IL-13表达水平和鼻粘膜中STAT6mRNA、STAT6蛋白含量的表达比例明显低于模型组及对照组(P<0.05)。结论:辛芷鼻敏胶囊可能降低STAT6mRNA、STAT6蛋白含量表达,抑制大鼠AR发病过程中IL-13的表达水平,进而减少嗜酸性粒细胞浸润而控制症状。

新疆伊犁地区维吾尔、汉族不同人群变应性鼻炎患者IL-4基因甲基化比较研究

目的探讨IL-4基因启动子区甲基化在维吾尔、汉族两个民族变应性鼻炎(AR)患者中的差异。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),病例组维吾尔族、汉族AR患者各31例,健康对照组维吾尔族、汉族各31例,检测其外周血IL-4基因甲基化状态。结果维吾尔族、汉族AR患者IL-4甲基化率均高于健康对照组,有统计学意义(P<0.05);维吾尔族、汉族AR患者IL-4甲基化率相比较,无统计学差异(P>0.05)。维吾尔族、汉族健康对照组未甲基化率相比较,有统计学差异(P<0.01)。结论 IL-4基因高甲基化是导致AR患病的一个重要原因.汉族人群比维吾尔族易患AR。

哈萨克族食管癌中MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1的表达及其临床病理意义

目的:探讨在新疆哈萨克族食管癌组织中基质金属蛋白酶1、2、7(MMP-1、MMP-2、MMP-7)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)和肿瘤转移相关基因1(MTA1)mRNA的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR方法检测75例哈萨克族食管癌标本中MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA的表达水平,分析其表达与临床病理特征的关系。结果:MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA在哈萨克族食管癌组织中的表达较正常组织增高,差异均具有统计学意义(P均<0.05);且MMP-2、MMP-7、MTA1 mRNA的表达与淋巴结转移有关(P<0.05),MMP-1、MMP-7 mRNA的表达与临床分期有关(P<0.05);TIMP-1与MMP-1、MMP-7、MTA1的表达呈正相关(r=0.446、0.458、0.333,P均<0.01)。结论:MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA表达上调共同参与了哈萨克族食管癌的发生发展过程;MMP-2、MMP-7和MTA1可能是哈萨克族食管癌发生侵袭、转移的主导因素。

PTEN、p21基因在新疆哈萨克族食管癌中的表达

目的研究PTEN、p21基因在哈萨克族食管癌中的表达。方法采用RT-PCR法检测PTEN、p21基因在48例哈萨克族食管癌组织及远端无癌组织中的表达,并分析其表达与肿瘤分化、TNM分期、临床分期、淋巴结转移的关系。结果 PTEN基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为75%、45.8%,癌组织高于远端无癌组织(χ2=8.537,P<0.05);p21基因在癌组织和远端无癌组织中表达的阳性率分别为95.8%、97.9%,差异无统计学意义(χ2=0.344,P>0.05)。PTEN和p21表达与食管癌分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移均无相关性。结论 PTEN、p21基因可能均不是哈萨克族食管癌的主要致病基因。

凋亡蛋白因子c-IAP2在新疆哈萨克族食管癌中的表达及临床意义

目的探讨新疆哈萨克族食管癌组织中凋亡蛋白因子c-IAP2 mRNA的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测30例哈萨克族食管癌患者中c-IAP2 mRNA的表达。结果 30例哈萨克族食管癌患者癌组织与正常组织(手术切缘无癌组织)中c-IAP2 mRNA表达阳性率分别为93.33%(28/30)与70.0%(21/30)。半定量光密度扫描后c-IAP2 mRNA表达量在哈萨克族食管鳞癌患者癌组织及正常组织中差异有统计学意义(P<0.05),但c-IAP2的表达与分化程度、病理分期及有无淋巴结转移均无相关性。结论 c-IAP2 mRNA在哈萨克族食管癌患者癌组织中的表达高于正常组织,表明c-IAP2通过抑制细胞凋亡,可能促进了哈萨克族食管癌的发生。

STAT3、VEGF基因在新疆哈萨克族食管癌中的表达及其相关性研究

目的:研究信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在哈萨克族食管癌中的表达及相关性,从而为探讨哈萨克族食管肿瘤癌变的机制奠定基础。方法:采用RT-PCR方法检测STAT3、VEGF基因在30例哈萨克族食管癌组织及相应癌旁组织(手术切缘无癌组织)中的表达。结果:STAT3、VEGF基因在30例食管癌组织中表达的阳性率分别为73.33%(22/30)和76.67%(23/30),30例癌旁组织中表达的阳性率为43.33%(13/30),两种基因在癌组织中表达的阳性率均高于癌旁组织(P<0.05)。STAT3与VEGF基因的表达具有相关性(P<0.05)。结论:STAT3、VEGF基因的表达可能与哈萨克族食管癌的发生有关,两者之间可能具有协同作用,共同促进食管癌的发生。

新疆哈萨克族食管癌中Survivin、c-myc、NF-κB的表达及其与临床因素的相关性研究

目的检测Survivin、c-myc、NF-κB在48例哈萨克族食管癌组织及远端无癌组织中的表达,分析Survivin、c-myc、NF-κB表达与患者临床因素和病理分级的相关性,初步探讨Survivin、c-myc、NF-κB在哈萨克族食管癌发生发展中相互关系及作用机制。方法经Trizol一步法提取48例哈萨克族食管癌组织及远端无癌组织标本总RNA,mRNA逆转录cDNA,反转录聚合酶链式反应(半定量RT-PCR)法检测48对哈萨克族食管癌组织、远端无癌组织中Survivin、c-myc、NF-κB mRNA表达,分析Survivin、c-myc、NF-κB mRNA表达与患者临床病理因素之间的相关性。结果①哈萨克族食管癌组织中Survivin、c-myc的阳性表达率显著高于远端无癌组织(P<0.05),NF-κB的阳性表达率无显著差异(P>0.05);②哈萨克族食管癌组织中Survivin、c-myc mRNA的相对表达量明显高于远端无癌组织(P<0.05),NF-κB mRNA的相对表达量无显著差异(P>0.05);③Survivin的表达与淋巴结转移、临床分期及肿瘤侵犯深度具有相关性(r=0.379、0.488、0.393,P<0.05);c-myc的表达与分化程度相关(r=0.437,P<0.05);NF-κB表达与性别、分化程度、临床分期、淋巴结转移以及侵润深度均无关(P>0.05);④Survivin表达与c-myc表达相关(r=0.535,P<0.05);c-myc表达与NF-κB表达相关(r=0.261,P<0.05)。结论 Survivin、c-myc在哈萨克族食管癌组织中表达上调,Survivin与c-myc协同发挥作用共同参与哈萨克族食管癌的发生发展。