易致污染的支原体在固体培养基上的形态特征

目的：研究不同条件下、不同生长期易致污染的支原体在固体培养基中的形态特征。方法通过改变支原体菌体浓度、培养时间及培养基组成，观察支原体在固体培养基中的形态变化。结果支原体菌体浓度小于103 cfu／mL时，培养至2～3天后可在固体培养基中形成典型的“油煎蛋”状形态，以蔗糖作为碳源培养支原体会导致葡萄糖发酵型支原体（肺炎支原体）不能在固体培养基中形成典型菌落，当使用牛血清代替马血清为支原体提供外源胆固醇时，猪鼻支原体在固体培养基中不能形成典型菌落。结论支原体的不同生长期、菌体浓度、培养基的组成都会使易致污染的支原体在固体培养基上的形态发生变化。

快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]该试纸条可在15min之内完成检测;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒检测低1个滴度;对89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3份阳性,两种检测的符合率为86.52%,特异性为89.89%。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测西尼罗病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。

麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响

目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果：137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异（P＞0.05）,170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异（P＜O.01）.结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次.

浅析初中历史课堂教学中如何培养学生的创新能力

当今时代,科技与社会飞速发展,社会对人才的需求也越来越大。初中历史教学中如何培养学生的创新能力已经成为社会发展的迫切要求。就历史教学中如何改变教育观念,改革教学方法,培养学生的创新能力进行探讨。

哺乳动物细胞西尼罗病毒样颗粒表达、纯化及其鉴定

目的利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒(WNV)prM和E蛋白,形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法筛选典型西尼罗病毒株,构建重组质粒,转染293T细胞,表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白,利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验(IFA)和酶链免疫吸附试验(ELISA)对表达产物进行鉴定。结果重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(viruslike particles VLPs),转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性;间接ELISA证实,重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性,为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础。

简谈应用细胞分析仪检测MA104细胞浓度及活率

评价细胞分析仪检测MA104细胞浓度及活率的可行性。方法 用标准颗粒检测细胞分析仪的准确性;用MA104细胞悬液检测细胞分析仪的重复性。结果 使用细胞分析仪检测浓度为3.96×106/ml、2.00×106/ml和5.17×105/ml的标准浓度颗粒和活率为4.04%;3.00%;4.83%标准活率颗粒;以评估该仪器的准确度;实验重复5次;浓度RSD分别为1.30%;1.73%;4.69%;平均浓度与标准浓度偏差分别为4.04%;3.00%;4.83%;活率RSD分别为3.26%;1.13;%;0.16;%;平均活率与标准活率偏差分别为1.49%;0.78%;0.12;%;说明该细胞分析仪有较好的准确度;MA104细胞悬液吸取1次;对同一加样孔进行10次重复检测;样品检测结果显示浓度RSD为2.34%;活率RSD为1.03%;说明该细胞分析仪有较好的重复性。MA104细胞悬液吸取10次进行检测;样品检测结果显示浓度RSD为8.65%;活率RSD为2.50%;说明细胞悬液吹打均匀;计数结果将更加准确。结论 该设备有良好的准确度和重复性;可用于轮状病毒滴度检测MA104细胞传代计数。但是在使用时一定要将细胞悬液吹打充分;计数结果将更加准确;从而保证病毒滴度检测的准确性。

2019年国产口服轮状病毒活疫苗质量控制中病毒滴度趋势分析

目的对口服轮状病毒活疫苗(oral rotavirus vaccine, ORV)质量控制中的病毒滴度进行趋势分析。方法利用CCID50+ELISA检测国内企业2019年生产的ORV的关键控制指标(病毒滴度),根据检测结果计算均值,建立警戒限(均值■和行动限(均值■,绘制趋势分析图,进行连续性和周期性趋势分析;并将中国食品药品检定研究院(National Institutes for Food and Drug Control, NIFDC)病毒滴度结果与企业病毒滴度结果进行比较。结果病毒滴度趋势分析显示NIFDC检测结果未见超趋势(out of trend, OOT),企业检测结果有1次连续10批以上结果高于平均值,经偏差调查证实生产、质控和检测环节均未发现异常情况,分析原因可能是其中有多批成品来自同一批原液。2019年度和2018年度比较结果显示年度间具有较好的一致性。NIFDC与企业病毒滴度结果显示均检测结果差异没有统计学意义(P=0.082 7,P>0.05);Bland-Altman法统计显示97%批次的检测结果的差值位于2倍标准差(2s)以内。结论对2019年国产ORV病毒滴度的趋势分析反映出该制品的批间一致性以及生产工艺的稳定性良好。

口服轮状病毒活疫苗稳定性评价

目的评价兰州生物制品研究所有限责任公司(兰州公司)口服轮状病毒活疫苗的稳定性。方法选取兰州公司2014年生产的3批口服轮状病毒活疫苗,置于37℃条件下进行热稳定性试验,在0和7 d取样进行病毒滴度检查;置于25℃条件下进行加速稳定性试验,在0、1、2、3个月进行全部检定项目检查;置于2~8℃条件下进行长期稳定性试验,在0、3、6、9、12、15、18个月进行全部检定项目检查。结果口服轮状病毒活疫苗于37℃条件保存7 d,热稳定性试验符合质量标准(病毒滴度≥每毫升5.5 lg半数细胞培养物感染量,病毒滴度下降≤1.0 lg)。在25℃条件下保存3个月,全部检定项目均符合质量标准。在2~8℃条件下保存18个月,全部检定项目均符合质量标准。结论兰州公司生产的口服轮状病毒活疫苗质量稳定。